王綠林,赫亞歌,高新玉,辛春燕,高培濱,鄧立新*
(1.河南農(nóng)業(yè)大學(xué)牧醫(yī)工程學(xué)院,鄭州 450002;2.河南省項(xiàng)城市秣陵鎮(zhèn)人民政府,項(xiàng)城 466232)
妊娠母犬不同時(shí)期生殖系統(tǒng)超聲聲像圖變化
王綠林1,赫亞歌1,高新玉2,辛春燕1,高培濱1,鄧立新1*
(1.河南農(nóng)業(yè)大學(xué)牧醫(yī)工程學(xué)院,鄭州 450002;2.河南省項(xiàng)城市秣陵鎮(zhèn)人民政府,項(xiàng)城 466232)
為探索不同生殖時(shí)期母犬生殖系統(tǒng)的超聲聲像圖變化特征,以8只標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)比格犬為對(duì)象,利用彩色多普勒超聲診斷儀,在二維灰階、彩色多普勒超聲模式下分別對(duì)子宮、卵巢、胎兒進(jìn)行實(shí)時(shí)跟蹤監(jiān)測(cè),將獲取的聲像圖進(jìn)行總結(jié)分析,同時(shí)對(duì)母犬在不同時(shí)期進(jìn)行陰道涂片鏡檢。結(jié)果表明,超聲條件下可見發(fā)情期母犬卵巢、子宮體積明顯逐漸增大,邊界清晰,單個(gè)卵泡成像明顯,子宮腔內(nèi)可見呈“細(xì)線”狀的子宮乳,妊娠后23 d超聲即可探查到孕囊;彩色多普勒超聲下,發(fā)情期卵巢內(nèi)血流明顯豐富,后腔靜脈和腹主動(dòng)脈分出的卵巢動(dòng)靜脈相互纏繞,呈紅藍(lán)條帶相互交織狀態(tài)進(jìn)入卵巢;妊娠后子宮血流逐漸豐富,血管內(nèi)徑及血流信號(hào)強(qiáng)度迅速增大。超聲條件下可實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)卵巢、子宮及胚胎在不同時(shí)期的大小、血流分布變化及其聲像圖規(guī)律,為母犬生殖系統(tǒng)發(fā)育過程多普勒超聲聲像圖研究及臨床檢查提供相應(yīng)參考依據(jù)。
多普勒超聲;B超;母犬;生殖系統(tǒng);聲像圖
作為寵物,犬備受人們喜愛;作為工作犬,主要用于軍隊(duì)、武警、公安等領(lǐng)域,為人們的生活提供安全保障,功勞顯著。隨著人們生活水平的提高和社會(huì)發(fā)展變化,寵物犬的飼養(yǎng)量不斷增大,社會(huì)對(duì)工作犬的需求也成倍增加[1]。犬的生產(chǎn)繁殖逐漸引起人們的重視,同時(shí)犬科動(dòng)物生產(chǎn)繁殖對(duì)于改進(jìn)犬科珍貴物種及保護(hù)瀕臨犬種十分重要[2],目前在犬的繁殖過程中,確定母犬最佳配種時(shí)間,必須用具體排卵期前指標(biāo)來鑒定。這些指標(biāo)主要涉及在卵巢血流變化,卵泡/黃體數(shù)和排卵期前指標(biāo)聲像圖回聲特性。母犬發(fā)情時(shí)間的準(zhǔn)確判斷極為重要,必須根據(jù)母犬所處的不同發(fā)情時(shí)期選擇合適的配種時(shí)間。因此,臨床上找到一種簡(jiǎn)單、高效的鑒定母犬發(fā)情周期的方法顯得尤為迫切。為了更加精確的判定母犬最佳配種時(shí)間,需要一種實(shí)用便于操作的方法。
超聲檢查是一種方便、快捷、無損傷的檢查方法,深受臨床醫(yī)師的喜愛,彩色多普勒超聲成像技術(shù)可對(duì)感興趣區(qū)的血流情況進(jìn)行監(jiān)測(cè),可用于犬生殖系統(tǒng)的評(píng)估研究。彩色多普勒超聲對(duì)犬生殖系統(tǒng)評(píng)估的研究已有十幾年,但此類研究報(bào)道較少,國(guó)內(nèi)更是一片空白,而國(guó)外一些文獻(xiàn)對(duì)該領(lǐng)域僅僅做了部分縱向研究,如:L.H.Bergeron等[3]和K.K?ster等[4]對(duì)發(fā)情周期中卵巢的血流灌注情況進(jìn)行了研究;P.R.Batista等[5]和Cda.C.Barbosa等[6]對(duì)圍產(chǎn)期及子宮復(fù)舊過程中子宮動(dòng)脈血流變化情況進(jìn)行了研究;P.Di Salvo等[7]和 P.G.Blanco等[8]對(duì)正常妊娠母犬子宮動(dòng)脈及胎兒的一些大血管的血液動(dòng)力學(xué)進(jìn)行了研究。目前,該領(lǐng)域研究?jī)?nèi)容較為分散,缺少全面完整的研究,并不能對(duì)生殖系統(tǒng)進(jìn)行系統(tǒng)的評(píng)估。
本試驗(yàn)利用多普勒超聲檢查方法對(duì)母犬的卵巢血流變化、卵泡、卵巢黃體等回聲特性進(jìn)行實(shí)時(shí)追蹤監(jiān)測(cè),從發(fā)情前期開始每天進(jìn)行檢查,直到黃體生成素到達(dá)峰值4 d以后,并對(duì)所獲得的聲像圖進(jìn)行分析。用二維灰階超聲進(jìn)行卵巢黃體數(shù)量及其回聲特性分析,用彩色多普勒對(duì)卵巢血流特性進(jìn)行分析,觀察卵巢子宮的形態(tài)變化。確定發(fā)情各期與聲像圖的對(duì)應(yīng)關(guān)系,為通過超聲檢查以確定最佳配種時(shí)間方法的應(yīng)用,建立一套科學(xué)合理的參考標(biāo)準(zhǔn)。同時(shí)本試驗(yàn)還對(duì)胎兒的心血管系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)行了實(shí)時(shí)超聲監(jiān)測(cè),為監(jiān)測(cè)胎兒是否健康發(fā)育提供依據(jù)。
1.1 試驗(yàn)動(dòng)物
標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)比格犬8只(陜西西安迪樂普生物科技公司提供)。雌性,1.5歲,平均體重11 kg,健康狀態(tài)良好。
1.2 試驗(yàn)儀器
祥生Q6VET型彩色多普勒超聲診斷儀(配有:微凸變頻探頭,中心頻率5.0 MHz,線陣探頭,中心頻率7.5MHz);顯微鏡,載玻片,瑞氏染液;寵物專用保定架;獸用耦合劑。
1.3 動(dòng)物準(zhǔn)備與超聲檢查
每次試驗(yàn)前對(duì)動(dòng)物進(jìn)行饑餓處理12 h。將試驗(yàn)比格犬上界劍狀軟骨部,右側(cè)至第11肋骨末端,左側(cè)至最后肋骨部,后界為恥骨聯(lián)合部進(jìn)行備毛處理。按照各器官的空間解剖位置及相互之間位置關(guān)系,在相應(yīng)區(qū)域進(jìn)行掃查。分別獲取卵巢、子宮及胚胎的不同切面聲像圖,將聲像圖和數(shù)據(jù)進(jìn)行保存分析,根據(jù)聲像圖及生殖生理特征,總結(jié)不同階段聲像圖的規(guī)律。整個(gè)檢查周期包括:乏情期、發(fā)情前期、發(fā)情期和妊娠后每隔一周進(jìn)行檢查直至恢復(fù)正常。
采集各個(gè)階段犬陰道分泌物,常規(guī)瑞氏吉姆薩染色法染色,顯微鏡下觀察拍照記錄。
1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析
2.1 卵巢聲像圖變化
探頭掃查右腎頭部稍偏向腹側(cè)即可見右側(cè)卵巢,分別對(duì)右側(cè)卵巢進(jìn)行不同生殖時(shí)期聲像圖掃查分析。在B型超聲條件下:發(fā)情間期,卵巢內(nèi)整體呈現(xiàn)均勻中等強(qiáng)度回聲,邊界清晰,并可見黃體存在,黃體與卵巢的邊界清晰可辨;發(fā)情前期,卵巢內(nèi)可見清晰卵泡,卵泡邊界清晰,回聲強(qiáng)度較高,卵泡內(nèi)為液性暗區(qū),卵巢體積較發(fā)情間期增大;發(fā)情后期,卵巢內(nèi)卵泡體積變大,卵泡邊界清晰,同時(shí)有紅體產(chǎn)生,卵巢整體體積變大;妊娠第7天,卵巢內(nèi)出現(xiàn)黃體,同時(shí)有腔黃體和紅體并存,并且三者之間界限清晰分明;妊娠第14天,卵巢內(nèi)可見黃體,紅體和有腔黃體消失,卵巢的體積較發(fā)情期小,與發(fā)情間期接近。
在彩色多普勒超聲條件下:發(fā)情間期,卵巢內(nèi)血流不明顯,但可見卵巢下方的卵巢動(dòng)靜脈;發(fā)情前期,可見卵巢內(nèi)部有血流存在,分布在各個(gè)卵泡之間,同時(shí)卵巢下方的卵巢動(dòng)靜脈搏動(dòng)清晰可見;發(fā)情后期,卵巢內(nèi)血流豐富,血管環(huán)繞卵泡分布,并呈交織纏繞狀態(tài);妊娠第14天,卵巢內(nèi)的血流減少,與發(fā)情期相同的量程等條件下,血流圖像不可見,只能觀察到卵巢后方的動(dòng)靜脈。具體見圖1~10。
圖1 乏情期右側(cè)卵巢二維聲像圖Fig.1 Diestrus,dimensional ultrasound image of right ovary
圖2 乏情期右側(cè)卵巢彩色多普勒聲像圖Fig.2 Diestrus,dimensional Doppler ultrasound image of right ovary
圖3 發(fā)情前期右側(cè)卵巢二維聲像圖Fig.3 Proestrus,dimensional ultrasound image of right ovary
圖4 發(fā)情前期右側(cè)卵巢多普勒聲像圖Fig.4 Proestrus,Doppler ultrasound image of right ovary
圖5 發(fā)情期右側(cè)卵巢二維聲像圖Fig.5 Metestrous,dimensional ultrasound image of right ovary
圖6 發(fā)情期右側(cè)卵巢多普勒聲像圖Fig.6 Metestrous,Doppler ultrasound image of right ovary
圖7 右側(cè)卵巢配種7 d二維聲像圖Fig.7 Right ovary dimensional ultrasound image at breeding 7 d
圖8 右側(cè)卵巢配種7 d多普勒聲像圖Fig.8 Right ovary Doppler ultrasound images at breeding 7 d
圖9 配種14 d右側(cè)卵巢二維聲像圖Fig.9 Breeding 14 d,two-dimensional ultrasound images of right ovary
圖10 配種14 d右側(cè)卵巢多普勒聲像圖Fig.10 Breeding 14 d,Doppler ultrasound image of right ovary
2.2 卵巢變化
不同生殖時(shí)期的卵巢進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè),測(cè)量左右兩側(cè)卵巢大小與生殖時(shí)期的相關(guān)規(guī)律,具體數(shù)據(jù)見表1。
2.3 子宮聲像圖變化
定位于恥骨前緣,在膀胱直腸三角區(qū)找到子宮,分別進(jìn)行橫切面與縱切面掃查,觀察發(fā)情間期、發(fā)情期、妊娠第16、23天時(shí)母犬子宮二維灰階超聲聲像圖特征。結(jié)果顯示:發(fā)情前期子宮二維聲像圖回聲無明顯變化,呈低回聲強(qiáng)度勻質(zhì)結(jié)構(gòu),如圖11;發(fā)情期時(shí),子宮變化不明顯,但可觀察到子宮開始增粗,子宮壁開始變厚,如圖12;妊娠第16天,子宮體積變大,子宮腔擴(kuò)張內(nèi)部開始出現(xiàn)條帶狀液性暗區(qū),子宮壁開始增厚,如圖13;妊娠第23天(犬一般20 d左右能檢查到孕囊),檢查發(fā)現(xiàn)子宮內(nèi)有圓形,邊界清晰,回聲較強(qiáng)聲像圖,如圖14。妊娠第29天時(shí)可觀察到胎心搏動(dòng),胎兒雛形已基本形成。
Table 1 The size of ovary at the genesial cycle(±s)mm
圖11 發(fā)情間期子宮橫切二維聲像圖Fig.11 Diestrus,uterine cross-section of the two-dimensional ultrasound image
圖12 發(fā)情期子宮橫切二維聲像圖Fig.12 Estrus,uterine cross-section of the two-dimensional ultrasound image
圖13 配種16 d子宮矢狀切二維聲像圖Fig.13 Breeding 16 d,uterine longitudinal section of two-dimensional ultrasound image
圖14 配種23 d子宮矢狀切二維聲像圖Fig.14 Breeding 23 d,uterine longitudinal section of two-dimensional ultrasound image
2.4 母犬不同生殖時(shí)期陰道涂片
根據(jù)超聲檢查結(jié)果,對(duì)處于不同生殖時(shí)期的母犬進(jìn)行陰道涂片,染色鏡檢,觀察不同階段陰道涂片中脫落的有核鱗狀上皮細(xì)胞比例判定發(fā)情時(shí)期,對(duì)超聲檢查結(jié)果進(jìn)行分析。通過顯微鏡觀察顯示:乏情期陰道涂片可見視野內(nèi)幾乎全部為未角化的有核上皮細(xì)胞,如圖15;發(fā)情前期陰道涂片可見視野內(nèi)角化的無核上皮細(xì)胞增多,約占60%,如圖16;發(fā)情期陰道涂片可見視野內(nèi)角化的無核上皮細(xì)胞大量增加,占90%以上,如圖17;發(fā)情后期陰道涂片可見視野內(nèi)未角化的有核上皮細(xì)胞增多,視野內(nèi)幾乎不可見角化的無核上皮細(xì)胞,如圖18。
大量未角化的有核上皮細(xì)胞A great quantity of nuclei epithelial cells aren’t keratotic圖15 乏情期陰道涂片(400×) GSFig.15 Diestrus smear of vagina
角化的無核上皮細(xì)胞增多Keratotic non-nuclei epithelial cells were increased圖16 發(fā)情前期陰道涂片(400×) GSFig.16 Proestrus smear of vagina
大量角化的無核上皮細(xì)胞A great quantity of non-nuclei keratotic epithelial cells 圖17 發(fā)情期陰道涂片(400×) GSFig.17 Estrus smear of vagina
2.5 不同時(shí)期孕囊變化特征
母犬妊娠后逐漸開始出現(xiàn)孕囊,并且孕囊及胚胎變化呈現(xiàn)一定的規(guī)律。具體數(shù)據(jù)見表2。
大量未角化的有核上皮細(xì)胞A great quantity of nuclei epithelial cells aren’t keratotic>
圖18 發(fā)情后期陰道涂片(400×) GSFig.18 Late estrus smear of vagina
在過去的近半個(gè)世紀(jì),超聲醫(yī)學(xué)取得突飛猛進(jìn)的發(fā)展,隨著基礎(chǔ)理論研究的深入,儀器性能和檢查方法的改進(jìn),超聲圖像的分辨力和清晰度都得到了極大地提高[9],同時(shí),彩色多普勒技術(shù)的應(yīng)用,可以顯示器官的血液供應(yīng)狀態(tài)及組織器官的發(fā)育過程[10]。近年來,超聲診斷技術(shù)在臨床上應(yīng)用正在飛速發(fā)展,其中B型超聲、彩色多普勒超聲應(yīng)用最為普遍。臨床上有B超對(duì)腎組織損傷檢查[11]、腹腔疾病的診斷[12]以及彩色多普勒對(duì)肝動(dòng)脈檢查[13]、超聲引導(dǎo)下穿刺技術(shù)[14]的應(yīng)用等,超聲影像技術(shù)正逐步成為獸醫(yī)臨床上不可或缺的一種重要檢查方法。生殖系統(tǒng)疾病是犬常見的多發(fā)病,特別雌性生殖系統(tǒng)疾病正極大地威脅著動(dòng)物的生命安全。超聲影像技術(shù)以其獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)在生殖系統(tǒng)檢查和疾病診斷方面發(fā)揮著巨大的作用,如犬隱睪的超聲診斷[15]、犬子宮蓄膿的影像學(xué)診斷[16]等,超聲技術(shù)已在寵物臨床上得到了廣泛地應(yīng)用。
表2 妊娠期胚胎大小與超聲所見
Table 2 The size and contents of ultrasound of embryo in the gestational period
妊娠時(shí)間/dPregnancydays孕囊大小(x-±s)/mmPregnancysacsize(x-±s)超聲所見Ultrasoundfeatures232.28±0.37可探查到早期孕囊出現(xiàn)2613.38±1.58出現(xiàn)較強(qiáng)回聲的胚胎細(xì)胞2921.35±1.66可見初具胎兒形態(tài)的組織3328.05±1.08胎兒頭部和體部已經(jīng)分化3835.02±1.14已經(jīng)出現(xiàn)完整的胎兒形態(tài)4655.60±1.02胎兒的內(nèi)臟器官和肢體完全出現(xiàn)5580.58±1.25骨骼已經(jīng)鈣化有明顯聲影,胎兒已經(jīng)具備出生的基本條件
雌性生殖系統(tǒng)主要包括卵巢和子宮。犬卵巢是產(chǎn)生卵母細(xì)胞的器官,同時(shí)能分泌雌激素,以促進(jìn)其生殖器官和乳腺的發(fā)育,發(fā)情期卵巢內(nèi)可見卵泡,由于卵泡細(xì)胞的增生、分化及透明帶的生長(zhǎng),卵泡明顯增大[17],子宮在胎兒著床及后期的生長(zhǎng)發(fā)育有著不可替代的作用。為了提高雌性犬生殖效率,本試驗(yàn)通過對(duì)卵巢、子宮及妊娠后胎兒的實(shí)時(shí)超聲監(jiān)測(cè),找出不同生殖時(shí)期雌性生殖器官的影像學(xué)變化。試驗(yàn)中可見超聲條件下卵巢形態(tài)、大小及卵泡大小的變化,經(jīng)過對(duì)不同生殖時(shí)期卵泡大小的實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)及對(duì)比分析,發(fā)現(xiàn)卵巢最小時(shí)直徑9 mm,最大時(shí)直徑25 mm,大小隨著發(fā)情周期的變化而變化。卵泡最早在發(fā)情前期能夠監(jiān)測(cè)到,最小直徑2.5 mm,最大直徑7.9 mm,發(fā)情后期伴有紅體和黃體的出現(xiàn)。發(fā)情間期可以清晰看到黃體的存在,發(fā)情前期黃體逐漸消失并被卵泡取代,通過監(jiān)測(cè)發(fā)現(xiàn)母犬卵巢內(nèi)卵泡個(gè)數(shù)一般在5~9,并且卵泡大小不一,同側(cè)卵巢內(nèi)相同時(shí)期卵泡大小相差不超過3 mm。彩色多普勒超聲條件下,發(fā)情間期卵巢內(nèi)幾乎不可見血流,發(fā)情前期卵泡開始出現(xiàn),卵巢內(nèi)血流出現(xiàn)并且較為豐富,圍繞卵泡分布。同時(shí),可看到由后腔靜脈和腹主動(dòng)脈分出的卵巢動(dòng)靜脈相互纏繞,彩色多普勒條件下呈紅藍(lán)條帶相互交織狀態(tài)進(jìn)入卵巢。超聲條件下對(duì)子宮在各個(gè)發(fā)情時(shí)期形態(tài)變化監(jiān)測(cè)時(shí)發(fā)現(xiàn),子宮體大體位于最后一對(duì)乳房頭側(cè),并且在距離其1 cm左右時(shí)開始分叉,形成左右子宮角。不同時(shí)期聲像圖中可見發(fā)情間期和發(fā)情前期的形態(tài)變化不大,進(jìn)入發(fā)情后期,子宮形態(tài)開始發(fā)生變化,子宮壁增厚、回聲增強(qiáng)及子宮腔形成可見有液性暗區(qū)。
試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)超聲監(jiān)測(cè)比格犬孕囊最早可在配種后23 d,監(jiān)測(cè)到孕囊第一周時(shí)間內(nèi)其發(fā)育較快,體積不斷增大,短短2 d內(nèi)胚胎細(xì)胞已逐漸分化形成各功能區(qū)。胎兒發(fā)育早期變化較大,后期觀察中變化較小,胎兒在發(fā)育過程中體積變大、骨骼逐漸鈣化,形成聲影。彩色多普勒條件下,妊娠早期子宮內(nèi)無明顯變化,不能探查到血管,僅能觀察到沿子宮前進(jìn)的子宮動(dòng)靜脈,直至孕囊出現(xiàn)以后,子宮內(nèi)血流逐漸豐富。當(dāng)孕囊內(nèi)出現(xiàn)胚胎細(xì)胞時(shí),可見細(xì)胞團(tuán)與囊壁接觸區(qū)有小血管出現(xiàn),隨著胚胎的不斷發(fā)育,心肌細(xì)胞開始出現(xiàn)并能監(jiān)測(cè)到搏動(dòng)頻率在200 次·min-1以上。胚胎發(fā)育38 d時(shí),可見其基本的血管網(wǎng)絡(luò)已經(jīng)形成,隨著胎兒發(fā)育,次級(jí)血管開始出現(xiàn)。妊娠55 d時(shí),胎兒的血管網(wǎng)絡(luò)已基本發(fā)育完善,不再有明顯變化。
超聲影像技術(shù)對(duì)犬不同生殖時(shí)期的不同生殖器官實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè),同時(shí)將獲取的聲像圖與陰道涂片進(jìn)行對(duì)比觀察分析,使得通過超聲技術(shù)鑒定雌性犬發(fā)情狀態(tài)的方法更加成熟可靠。超聲技術(shù)有著無損傷、實(shí)時(shí)性、攜帶方便和操作簡(jiǎn)單[18]的優(yōu)越性,未來寵物臨床上運(yùn)用超聲技術(shù)鑒定發(fā)情周期必將不斷得到推廣應(yīng)用。
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(編輯 白永平)
The Ultrasound Image Change of Pregnant Bitches of the Reproductive System at Different Time
WANG Lü-lin1,HE Ya-ge1,GAO Xin-yu2,XIN Chun-yan1,GAO Pei-bin1,DENG Li-xin1*
(1.CollegeofAnimalScienceandVeterinaryMedicine,HenanAgriculturalUniversity,Zhengzhou450002,China;2.ThePeople’sGovernmentofMolingTownofXiangchengcity,HenanProvince,Xiangcheng466232,China)
The aim of the present study was to explore the ultrasound image features of pregnant bitches of the reproductive system at different times.In our study,8 standard test Beagles are selected,and the color Doppler instrument was used.The uterus,ovaries and fetus were observed by real-time tracking and monitoring under the two-dimensional gray-scale and color Doppler ultrasound mode.The ultrasound images we got were summarized and analyzed,meanwhile the bitches testing by vaginal smear microscopy.The result of ultrasound image showed that the ovaries and uterus’s volume increased significantly,the line was clear,the follicle was obviously,and the womb milk like ‘thin’ in uterine cavity was visible during the heat period.We tested the fetus at the 23 d of gestation by ultrasound.The blood stream of ovaries was obviously and plentiful,the arteriovenous fistula of ovary from the back cavity vein and the abdominal aorta twisted together as red and blue strap interlace,and flow into the ovary during the estrus by color Doppler ultrasound machine;the blood of uterine was more plentiful gradually after pregnancy,internal diameter and signal intensity of blood vessel rising quickly.The size,blood stream distribution can change during physiology period,and real-time monitored regular pattern of ultrasound image of the ovary,uterus and embryo by ultrasound will provide reference information for bitches reproductive system development and clinical examination.
Doppler ultrasound;B model ultrasound;bitches;reproductive system;ultrasound image
10.11843/j.issn.0366-6964.2015.08.023
2014-11-04
王綠林(1988- ),河南項(xiàng)城人,碩士生,主要從事動(dòng)物超聲影像學(xué)研究,E-mail:wll6666666@163.com
*通信作者:鄧立新,副教授,E-mail:lx8198@sohu.com
S854.7
A
0366-6964(2015)08-1455-08