張楠，周炳娟，李玲(保定市第一中心醫(yī)院，河北保定071000)

假性濕疣和尖銳濕疣組織中VEGF、Bcl-2蛋白表達(dá)變化及臨床意義

張楠，周炳娟，李玲
(保定市第一中心醫(yī)院，河北保定071000)

摘要:目的觀察假性濕疣( PC)和尖銳濕疣( CA)組織中血管內(nèi)皮生長因子( VEGF)、Bcl-2蛋白表達(dá)變化，并探討其臨床意義。方法采用免疫組化SP法檢測100例份PC組織( PC組)、100例份CA組織( CA組)、50例份健康女性外陰皮膚(對照組)中VEGF、Bcl-2蛋白。結(jié)果PC組、CA組、對照組中VEGF陽性率分別為80%、90%、40%，PC組、CA組分別為與對照組比較，P均＜0.05; Bcl-2陽性率分別為78%、98%、40%，兩兩比較，P均＜0.05。結(jié)論P(yáng)C和CA組織中VEGF、Bcl-2蛋白表達(dá)升高，且檢測Bcl-2有助于PC和CA的鑒別診斷。

關(guān)鍵詞:假性濕疣;尖銳濕疣;血管內(nèi)皮生長因子; Bcl-2蛋白

假性濕疣( PC)是一種發(fā)生于女性陰部的顆粒狀突起性淡紅色丘疹，有時(shí)輕癢，其與尖銳濕疣( CA)在臨床表現(xiàn)上非常相似，所以常給患者帶來不必要的負(fù)擔(dān)。PC的發(fā)病機(jī)制尚不明確，國內(nèi)外學(xué)者的研究亦各不相同。2008年10月～2010年6月，我們觀察了PC和CA組織中血管內(nèi)皮生長因子( VEGF)、Bcl-2蛋白表達(dá)變化，并探討其意義。

1　資料與方法

1.1臨床資料選擇2008年10月～2010年6月保定市第一中心醫(yī)院收治的PC患者100例，均為女性，年齡22～48歲( 30.35±5.22)歲，病程7 d～6個月。CA患者100例，均為女性，年齡20～50 ( 30.35±5.79)歲，病程2 d～4個月。均經(jīng)臨床和組織病理檢驗(yàn)確診，且排除患有其他系統(tǒng)疾病，3個月內(nèi)未曾接受任何免疫治療。手術(shù)留取PC真皮和表皮組織100例份( PC組)、CA真皮和表皮組織100例份( CA組)，另選50例份子宮肌瘤手術(shù)女性患者的健康外陰皮膚作為對照組。

1.2組織VEGF、Bcl-2蛋白檢測采用免疫組化SP法，嚴(yán)格按照試劑說明步驟進(jìn)行。切片脫蠟至水化，經(jīng)3%過氧化氫甲醇固定后分別加入第一抗體鼠抗人VEGF單克隆抗體、Bcl-2單克隆抗體，然后加入第二抗體進(jìn)行染色，使得著色細(xì)胞染成棕黃色，最后沖洗復(fù)染，中性樹膠封固。結(jié)果分析方法根據(jù)改良Shimzu法。VEGF和Bcl-2蛋白陽性細(xì)胞染成棕黃色，陰性細(xì)胞未著色，= 1.9為陰性，2～2.9為弱陽性，3～3.9為陽性，=4為強(qiáng)陽性。兩種蛋白的陽性率為以弱陽性、陽性、強(qiáng)陽性細(xì)胞的總和所占的比例。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件。兩兩比較采用Kruskal-wallis H秩和檢驗(yàn)方法。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

PC組、CA組、對照組中VEGF蛋白陽性率分別為80%、90%、40%，PC組、CA組分別與對照組比較，P均＜0.05; Bcl-2蛋白陽性率分別為78%、98%、40%，兩兩比較，P均＜0.05。

3　討論

VEGF又稱為血管滲透因子，是目前被認(rèn)為與創(chuàng)傷組織的修復(fù)、缺血、炎癥及腫瘤的發(fā)生等密切相關(guān)的因子之一［1］，也是目前已知最強(qiáng)的促血管生成因子［2］。VEGF主要功能為增加血管通透性，促進(jìn)血管生成等［3］。角質(zhì)形成細(xì)胞是皮膚中VEGF的主要來源，而角質(zhì)形成細(xì)胞來源的VEGF是真皮微血管內(nèi)皮細(xì)胞特異性的有絲分裂原，可促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞生長［4］。曾抗等［5］認(rèn)為CA組織可能產(chǎn)生某種促血管物質(zhì)，并認(rèn)為這種物質(zhì)是某種形式的血管生成因子。Beqquet等［6］通過HPV16陽性細(xì)胞株體外培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)，成纖維細(xì)胞生長因子( bFGF)對VEGF的表達(dá)具有上調(diào)作用，從而使VEGF發(fā)揮促進(jìn)血管生成和表皮細(xì)胞增殖分化的作用。國外有研究［7］表明，HPV16 E6可刺激p53基因誘導(dǎo)VEGF基因的表達(dá)增加。本研究顯示，PC、CA組VEGF蛋白表達(dá)高于對照組，提示PC和CA角質(zhì)形成細(xì)胞在一定因素刺激下能產(chǎn)生和分泌過量的VEGF，在促進(jìn)PC和CA真皮血管生成方面可能起重要作用。CA的發(fā)生機(jī)制可能是由于患者HPV病毒感染后，誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生VEGF，而在CA組織中bFGF有可能誘導(dǎo)上調(diào)了VEGF的表達(dá)，使VEGF增加了皮損區(qū)血管通透性，促進(jìn)了血管形成，從而導(dǎo)致黏膜和皮膚呈現(xiàn)疣狀增生性損害。PC的發(fā)病機(jī)制是直接還是間接參與尚不明確，可能是由于PC上皮組織增生造成局部缺氧刺激引起的結(jié)果，或是由于PC本身分泌一種促血管生成物質(zhì)上調(diào)VEGF，也可能是PC皮損部位角質(zhì)形成細(xì)胞通過旁分泌作用分泌的大量VEGF與其受體結(jié)合，發(fā)揮促血管生成作用。而是否存在HPV感染仍有待于進(jìn)一步研究?？傊?，VEGF在組織中的過度表達(dá)參與了促進(jìn)PC和CA增殖及血管增多的病理過程，構(gòu)成了二者發(fā)病的病理學(xué)基礎(chǔ)。

Bcl-2是目前最受關(guān)注的與細(xì)胞凋亡關(guān)系密切的基因之一。Bcl-2對細(xì)胞凋亡具有明顯的抑制作用，但不影響細(xì)胞增殖［8］。凋亡的影響因素很多，其中病毒可能延遲或抑制細(xì)胞凋亡的發(fā)生。Tsao等［9］在HPV陽性的宮頸癌細(xì)胞株凋亡的研究中也同樣發(fā)現(xiàn)，Bcl-2過度表達(dá)對凋亡有明顯抑制作用。本研究結(jié)果表明，Bcl-2可能通過一定的形式參與了PC皮損組織細(xì)胞的凋亡調(diào)控，使皮損的凋亡受到抑制。PC的臨床和病理特點(diǎn)顯示該疾病處于增殖旺盛狀態(tài)，抑凋亡基因Bcl-2又呈現(xiàn)過度表達(dá)，增殖與凋亡在PC組織中處于失衡狀態(tài)，從而導(dǎo)致疾病的發(fā)生。本研究發(fā)現(xiàn)，CA組Bcl-2表達(dá)高于對照組，說明凋亡亦參與了CA的發(fā)病機(jī)制。病毒感染可以降低人體免疫功能，HPV使CA患者的免疫功能受到不同程度的損傷，造成其免疫力低下，臨床表現(xiàn)為病毒清除困難，造成疾病的活動性與宿主的傳染性。在病理狀態(tài)下，正常細(xì)胞凋亡會受到異常調(diào)控而使“非法身份”的細(xì)胞存活，導(dǎo)致機(jī)體病理過程進(jìn)一步發(fā)生和發(fā)展。由此推測，HPV在CA發(fā)病過程中可能促進(jìn)了Bcl-2的表達(dá)。本研究還發(fā)現(xiàn)，PC組Bcl-2表達(dá)低于CA組，說明Bcl-2對PC與CA的影響有明顯差別。這可能是大量HPV感染的結(jié)果，也可能是臨床上CA比PC增長速度快、增生更加活躍的原因之一?？傊?xì)胞凋亡參與了這兩種增生性疾病的發(fā)生、發(fā)展。

參考文獻(xiàn):

［1］劉雯蓓，馬小玲，季必華.過敏性紫癜患者血管內(nèi)皮生長因子含量測定［J］.中國皮膚性病學(xué)雜志，2003，17( 4) : 232-261.

［2］Dvorak AM，F(xiàn)eng D.The vesiculo-vacuolar organelle( VVO).A new endothelial cell permeability organelle［J］.J Histochem cytochem，2001，49( 4) : 419-432.

［3］張潤歧.腫瘤血管生成因子的研究進(jìn)展［J］.國外醫(yī)學(xué):生理、病理科學(xué)與臨床分冊，1999，19( 6) : 447-449.

［4］Bhushan M，McLaughlin B，Weiss JB，et al.Levels of endothelial cell stimulating angiogenesis factor and vascular endothelial growth factor are elevated in psoriasis［J］.Br J Dermatol，2013，141( 6) : 1054-1060.

［5］曾抗，陳炎，王瑞善，等.尖銳濕疣與基底細(xì)胞癌的促血管生長作用的比較研究［J］.第一軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，1996，16( 1) : 16-18.

［6］Beqquet RM，Lopez OO.Angiogenesis modulators expression in culture cell lines positives for Hpv-16 oncoproteins［J］.Bioche m Biophys Res Commun，2000，277( 1) : 55-61.

［7］López-Ocejo O，Viloria-Petit A，Bequet-Romero M，et al.Oncogenes and tumor angiogenesis: the Hpv-16 E6 oncoprotein activates the vascular endothelial growth factor ( VEGF) gene promoter in a p53 independent manner［J］.Oncongene，2000，19( 40) : 4611-4620.

［8］張誼之，張敏，徐利.尖銳濕疣Fas、Bcl-2、Ki-67的表達(dá)［J］.中國麻風(fēng)皮膚病雜志，2012，16( 2) : 74-76.

［9］Tsao YP，Huang SJ，Chang JL，et al.Adenovirus mediated P21 ( WAFI/SDH/CIPI) gene transfer induces apoptosis of human cervical cancer cell lines［J］.J Virol，1999，73( 6) : 4983-4985.

收稿日期:( 2015-04-22)

文章編號:1002-266X( 2015) 31-0064-02

文獻(xiàn)標(biāo)志碼:B

中圖分類號:R752.5

doi:10.3969/j.issn.1002-266X.2015.31.026