班振英，曾憲旭，張威，黨秋紅，張歡歡，杜艷敏(鄭州大學第三附屬醫(yī)院，鄭州450052)

宮頸鱗癌組織中Cripto-1蛋白的表達及意義

班振英，曾憲旭，張威，黨秋紅，張歡歡，杜艷敏
(鄭州大學第三附屬醫(yī)院，鄭州450052)

摘要:目的觀察畸胎瘤衍生生長因子(Cripto-1)在宮頸鱗癌組織中的表達變化，探討其在腫瘤發(fā)生、發(fā)展過程中的作用。方法采用免疫組化法檢測60例宮頸鱗癌組織、60例宮頸上皮內瘤變組織及24例正常宮頸組織中Cripto-1蛋白的表達，并分析宮頸癌組織中Cripto-1蛋白表達與臨床病理參數(shù)及上皮-間質轉化標記物(N-鈣黏蛋白、波形蛋白、E-鈣黏蛋白)的相關性。結果正常宮頸組織、宮頸上皮內瘤變組織、宮頸鱗癌組織中Cripto-1蛋白陽性表達率逐漸升高，且三者比較差異均有統(tǒng)計學意義(P均＜0.05)。宮頸鱗癌不同臨床分期及有無淋巴結轉移患者Cripto-1蛋白表達陽性率比較均有統(tǒng)計學差異(P均＜0.05) ;宮頸鱗癌患者Cripto-1蛋白表達陽性與N-鈣黏蛋白、波形蛋白表達均呈正相關(r分別為0.561、0.328，P均＜0.05)，與E-鈣黏蛋白表達呈負相關(r=－0.468，P ＜0.05)。結論Cripto-1蛋白表達與宮頸鱗癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關，通過上調Cripto-1蛋白表達調控上皮-間質轉化以促進腫瘤的侵襲、轉移。

關鍵詞:宮頸腫瘤;畸胎瘤衍生生長因子;上皮-間質轉化

Cripto-1基因又稱畸胎瘤衍生生長因子，是表皮生長因子家族成員之一，其編碼的Cripto-1蛋白在早期胚胎發(fā)生過程中起重要作用。Cripto-1基因作為多種腫瘤的癌基因生長因子，可促進腫瘤增殖、遷移，誘導上皮-間質轉化(EMT)［1］。EMT是失去上皮細胞極性、細胞與細胞接觸能力以及重塑細胞骨架的過程，其特征是失去上皮細胞的標志如E-鈣黏蛋白(E-cadherin)，而獲得間質細胞的標志如N-鈣黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(vimentin)等，EMT在腫瘤發(fā)生、發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用［2］。2012年1月～2014年6月，本研究對宮頸鱗癌組織中Cripto-1蛋白表達進行檢測，以探討Cripto-1在宮頸鱗癌發(fā)生、發(fā)展過程中的作用。

1　資料與方法

1.1臨床資料選取鄭州大學第三附屬醫(yī)院切除的病理學資料完整的存檔蠟塊標本144例，均經病理學檢查確診。①宮頸鱗癌組織60例，患者年齡32～65(47.14±6.25)歲，均為初治病例，術前均未接受過放療、化療或內分泌等輔助治療;根據(jù)國際婦產科聯(lián)盟(FIGO 2009)臨床分期標準分期，Ⅰ～Ⅱa期38例、Ⅱb期22例;根據(jù)2003年國際婦科病理學會組織學分級標準分級，高或中度分化(組織學Ⅰ、Ⅱ級) 37例，低度分化或未分化(組織學Ⅲ級) 23例;有淋巴結轉移25例，無淋巴結轉移35例。②宮頸上皮內瘤變(CIN)組織60例，患者年齡21～59(42.38±9.62)歲。③因子宮肌瘤切除的正常宮頸組織24例，患者年齡26～52(38.45±4.32)歲。三類患者年齡比較無統(tǒng)計學差異。

1.2檢測方法采用免疫組化SP法對不同宮頸組織中Cripto-1蛋白及宮頸鱗癌組織中E-cadherin、N-cadherin、vimentin進行檢測。Cripto-1多克隆抗體購自美國Santa cruz公司，E-cadherin、N-cadherin、vimentin單抗及免疫組化SP試劑盒、DAB酶底物顯色試劑盒均購自福州邁新生物技術開發(fā)公司。所有組織蠟塊每例連續(xù)切片4張(厚4 μm)，行常規(guī)HE染色及免疫組化SP法染色，嚴格按照說明書進行操作。隨機選取5個高倍鏡視野，每個視野計數(shù)不少于200個細胞，按陽性細胞所占百分比及著色深淺進行結果判定。分別由兩位病理科醫(yī)師進行評分，取其平均值。著色強度:無色計0分、淺黃色計1分、黃色及更深顏色計2分，陽性細胞百分比≤50% 計0分、51%～75%計1分、＞75%計2分，兩項得分相乘≥2為陽性。

1.3統(tǒng)計學方法采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件。計數(shù)資料以百分比表示，比較采用χ2檢驗;不同蛋白表達的相關性采用Pearson相關分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2　結果

2.1不同宮頸組織中Cripto-1蛋白的表達Cripto-1蛋白陽性著色主要位于上皮細胞胞質，可見少量胞膜著色。正常宮頸組織、CIN組織、宮頸鱗癌組織中Cripto-1蛋白陽性表達率分別為8.3% (2/24)、33.3% (20/60)、60.0% (36/60)，三者間Cripto-1蛋白陽性表達率比較差異均有統(tǒng)計學意義(P均＜0.05)。

2.2宮頸鱗癌組織中Cripto-1蛋白陽性表達率與臨床病理參數(shù)的關系組織學Ⅰ、Ⅱ級和組織學Ⅲ級患者Cripto-1蛋白陽性表達率分別為54.1%(20/37)和69.6%(16/23)，不同組織學分級患者Cripto-1蛋白陽性表達率比較無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。Ⅰ～Ⅱa期患者Cripto-1蛋白陽性表達率為50.0% (19/38)，Ⅱb期患者Cripto-1蛋白陽性表達率為77.3%(17/22) ;有淋巴結轉移的患者Cripto-1蛋白陽性表達率為80.0% (20/25)，不伴有淋巴結轉移患者Cripto-1蛋白陽性表達率為45.7% (16/35)。不同臨床分期及有無淋巴結轉移患者Cripto-1蛋白陽性表達率比較有統(tǒng)計學差異(P均＜0.05)。

2.3宮頸鱗癌組織Cripto-1蛋白與E-cadherin、N-cadherin、vimentin表達的相關性E-cadherin、N-cadherin、vimentin陽性著色分別位于細胞膜、細胞膜和細胞質，其陽性表達率分別為55.0% (33/60)、65.0% (39/60)、31.7% (19/60)。Cripto-1蛋白表達與N-cadherin、vimentin表達呈正相關(r分別為0.561、0.328，P均＜0.05)，與E-cadherin表達呈負相關(r=－0.468，P＜0.05)。

3　討論

多項研究發(fā)現(xiàn)，Cripto-1蛋白在惡性腫瘤(胃癌、結腸癌、肺癌、乳腺癌、皮膚黑色素瘤及口腔鱗狀細胞癌等)組織中過表達，而在正常組織中不表達或低表達［3～5］，Cripto-1可能是一種新的腫瘤特異性標志［6］。Bianco等［7］將人的Cripto-1基因轉染至小鼠體內使其過表達，發(fā)現(xiàn)小鼠轉染細胞的增殖率升高、克隆能力增強、生長失去抑制;敲除乳腺CID9系的Cripto-1基因，細胞生長率下降、凋亡率增加，提示Cripto-1可能和腫瘤的早期發(fā)生關系密切。

本研究結果顯示，Cripto-1蛋白在正常宮頸組織、CIN組織、宮頸鱗癌組織中的表達呈遞增趨勢，且三者陽性表達率比較差異均有統(tǒng)計學意義。這與徐嶸嶸等［8］的研究結果一致。提示Cripto-1可能在宮頸鱗癌的發(fā)生過程中發(fā)揮作用，檢測其表達水平可能為宮頸癌的早期診斷提供參考。

Cripto-1不僅與腫瘤的發(fā)生有關，還與腫瘤的侵襲、轉移有關。Strizzi等［9］通過轉基因技術發(fā)現(xiàn)Cripto-1不僅能促進乳腺癌的發(fā)生，而且還誘發(fā)腫瘤細胞低表達E-cadherin，高表達纖維連接素、N-cadherin等。Cripto-1在體外鼠乳房上皮細胞和體內鼠乳房腫瘤細胞中均可通過調控EMT的發(fā)生而促進腫瘤侵襲、轉移。Zhong等［10］研究發(fā)現(xiàn)，Cripto-1蛋白在腫瘤細胞中高表達，而E-cadherin在腫瘤細胞中呈完全性或不完全性表達缺失;并且Cripto-1過表達及E-cadherin表達缺失均與淋巴結轉移及腫瘤TNM分期有關。提示Cripto-1可能在胃癌的侵襲、轉移中起重要作用。本研究中Cripto-1蛋白在宮頸鱗癌組織中的表達與腫瘤的病理組織學分級無關，與患者臨床分期及有無淋巴結轉移有關。提示Cripto-1檢測對子宮頸病變的惡性程度及預后判斷有一定的參考價值。本研究對宮頸鱗癌組織中EMT相關標記物的表達情況進行檢測，并對Cripto-1與EMT標記物間的相關性進行分析。結果顯示，宮頸鱗癌組織中Cripto-1蛋白表達與N-cadherin、vimentin表達呈正相關，與E-cadherin表達呈負相關。提示Cripto-1可能通過調控間質和上皮細胞標記物的表達而促進EMT的發(fā)生，從而在宮頸癌的侵襲、轉移過程中發(fā)揮重要作用。

綜上所述，Cripto-1在宮頸鱗癌的發(fā)生、侵襲、轉移過程中均發(fā)揮重要作用，檢測Cripto-1可為腫瘤的早期診斷及預后判斷提供參考。EMT的發(fā)生是多種基因和蛋白共同作用的復雜過程，Cripto-1可能通過調控EMT共同參與腫瘤的侵襲、轉移，但具體機制尚有待進一步研究。

參考文獻:

［1］DE Castro NP，Rangel MC，Nagaoka T，et al.Cripto-1: an embryonic gene that promotes tumorigenesis［J］.Future Oncol，2010，6(7) : 1127-1142.

［2］Huber MA，Kraut N，Beug H.Molecular requirements for epithelial mensenchymal transition during tumor progression［J］.Curr Opin Biol，2005，17(5) : 548-558.

［3］Strizzi L，Bianco C，Normanno N，et al.Cripto-1: a multifunctional modulator during embryogenesis and oncogenesis［J］.Oncogene，2005，24(37) : 5731-5741.

［4］De Luca A，Lamura L，Strizzi L，et al.Expression and functional role of CRIPTO-1 in cutaneous melanoma［J］.Br J Cancer，2011，105(7) : 1030-1038.

［5］Yoon HJ，Hong JS，Shin WJ，et al.The role of Cripto-1 in the tumorigenesis and progression of oral squamous cell carcinoma［J］.Oral Oncol，2011，47(11) : 1023-1031.

［6］Strizzi L，Postovit LM，Margaryan NV，et al.Emerging roles of nodal and Cripto-1: from embryogenesis to breast cancer progression［J］.Breast Dis，2008，29(1) : 91-103.

［7］Bianco C，Normanno N，De Luca A，et al.Detection and localization of Cripto-1 binding in mouse mammary epithelial cells and in the mouse mammary gland using an immunoglobulin Cripto-1 fusion protein［J］.J Cell Physiol，2002，190(1) : 74-82.

［8］徐嶸嶸，馮定慶，雷蕾，等.Cripto-1在子宮頸癌中的表達及臨床意義［J］.臨床與實驗病理學雜志，2011，27(8) : 811-814.

［9］Strizzi L，Bianco C，Normanno N，et al.Epithelial mesenchymal transition is a characteristic of hyperplasias and tumors in mammary gland from MMTV-Cripto-1 transgenic mice［J］.J Cell Physiol，2004，201(2) : 266-276.

［10］Zhong XY，Zhang LH，Jia SQ，et al.Positive association of upregulated Cripto-1 an d down-regulated E-cadherin with tumour progression an d poor prognosis in gastric cancer［J］.Histopathology，2008，52(5) : 560-568.

Expression of Cripto-1 in cervical squamous cell carcinoma and its significance

BAN Zhen-Ying，ZENG Xian-Xu，ZHANG Wei，DANG Qiu-hong，ZHANG Huan-huan，DU Yan-min
(The Third Affiliated Hospital of Zhengzhou University，Zhengzhou 450052，China)

Abstract:Objective To observe the expression changes of Cripto-1 in the cervical squamous cell carcinoma and to explore the effects on the tumor occurrence and development process.Methods Immunohistochemistry was used to examine the expression levels of Cripto-1 in 60 cases of cervical squamous cell carcinoma，60 cases of cervical intraepithelial neoplasia and 24 cases of normal cervical epithelia.The correlations of Cripto-1 expression with the clinical pathologic parameters and the epithelial-mesenchymal transformation (EMT) markers (N-cadherin，Vimentin and E-cadherin) were also analyzed.ResultsThe expression levels of Cripto-1 protein were gradually increased in the normal cervical epithelia，cervical intraepithelial neoplasia and cervical squamous cell carcinoma; and significant difference was found among these three groups (all P＜0.05).The positive expression rate of Cripto-1 also showed significant differences in the cervical squamous cell carcinoma with or without lymph node metastasis and different clinical stages (all P＜0.05).The positive expression of Cripto-1 was positively correlated with N-cadherin and Vimentin (r=0.561，r=0.328，respectively; all P＜0.05)，while it was negatively correlated with E-cadherin (r=－0.468，P＜0.05).ConclusionThe expression of Cripto-1 is closely related to the carcinogenesis and development of cervical squamous cell carcinoma，and may promote the invasion and metastasis of carcinoma by up-regulating the Cripto-1 expression to regulate the EMT.

Key words:uterine cervical neoplasms; Cripto-1; epithelial-mesenchymal transformation

(收稿日期:2015-02-03)

作者簡介:第一班振英(1981-)，女，主治醫(yī)師，碩士，主要從事婦科腫瘤病理研究。E-mail: banzhenying@ hotmail.com

基金項目:河南省科技廳基礎研究重點項目(142300410205)。

文章編號:1002-266X(2015)21-0007-03

文獻標志碼:A

中圖分類號:R737.33

doi:10.3969/j.issn.1002-266X.2015.21.003