周莉，于秀娟，管洪在(金鄉(xiāng)縣人民醫(yī)院，山東金鄉(xiāng)700;青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院)

血清同型半胱氨酸四種檢測(cè)方法診斷腦梗死的效能比較及評(píng)價(jià)

周莉1，2，于秀娟1，管洪在2
(1金鄉(xiāng)縣人民醫(yī)院，山東金鄉(xiāng)272200;2青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院)

摘要:目的比較循環(huán)酶法、速率法及化學(xué)發(fā)光法與酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)測(cè)定血清同型半胱氨酸水平診斷腦梗死的效果，探討臨床腦梗死患者血清Hcy水平檢測(cè)的適宜方法。方法選擇腦梗死患者210例腦(梗死組)及同期體檢的健康體檢者205例(對(duì)照組)，分別采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、循環(huán)酶法、速率法及化學(xué)發(fā)光法同時(shí)檢測(cè)其血清同型半胱氨酸水平，比較各檢測(cè)方法的精密度及受試者工作特征(ROC)曲線。結(jié)果四種方法檢測(cè)腦梗死組血清同型半胱氨酸水平均高于對(duì)照組(P均＜0.01)。血清同型半胱氨酸水平變異系數(shù)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、循環(huán)酶法、速率法、化學(xué)發(fā)光法分別為5.17%、5.48%、5.86%和6.76%;循環(huán)酶法變異系數(shù)與速率法及化學(xué)發(fā)光法比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P均＜0.05)，與ELISA比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。循環(huán)酶法ROC曲線下面積大于速率法及化學(xué)發(fā)光法(P均＜0.05)。結(jié)論循環(huán)酶法與酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)血清同型半胱氨酸水平診斷腦梗死效能較高;且循環(huán)酶法操作簡(jiǎn)單，更適用于臨床大批量標(biāo)本的處理。

關(guān)鍵詞:腦梗死;酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn);循環(huán)酶法;速率法;化學(xué)發(fā)光法;同型半胱氨酸

研究顯示，血清同型半胱氨酸(Hcy)升高是心腦血管疾病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，精確測(cè)定患者Hcy水平對(duì)心腦血管疾病的早期預(yù)防及治療具有極其重要的臨床意義［1，2］。目前，血清Hcy的檢測(cè)方法有多種，但各有優(yōu)勢(shì)及不足。2014年1～7月，我們分別采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)、循環(huán)酶法、速率法及化學(xué)發(fā)光法同時(shí)檢測(cè)腦梗死患者血清Hcy水平，以評(píng)價(jià)不同方法對(duì)Hcy水平的檢測(cè)效能。

1　資料與方法

1.1臨床資料選擇同期在金鄉(xiāng)縣人民醫(yī)院救治的腦梗死患者210例(腦梗死組)，男109例、女101例，年齡48～86歲、中位年齡63.3歲;以上病例均經(jīng)顱腦CT或MRI檢查確診，符合中國(guó)急性缺血性腦卒中診治指南(2010)中規(guī)定的腦梗死診斷標(biāo)準(zhǔn)［3］。另選擇健康體檢者205例為對(duì)照組，男110例、女95例，年齡31～80歲、中位年齡58.7歲;均無高血壓、糖尿病、心臟病及肝腎功能不全等病史。兩組性別、年齡比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

1.2檢測(cè)方法所有被檢者清晨空腹抽取靜脈血3 mL，立即分離血清，置于－20℃冰箱保存。采血前2周內(nèi)避免使用葉酸、維生素B6及B12等藥物。ELISA試劑盒由廈門慧嘉生物科技有限公司提供，具體操作步驟按試劑盒說明書進(jìn)行。采用日本日立公司HITACHI7600-20全自動(dòng)生化分析儀，同時(shí)使用循環(huán)酶法、速率法、化學(xué)發(fā)光法測(cè)定被檢者血清Hcy水平，具體操作步驟依據(jù)Hcy測(cè)定試劑盒說明書進(jìn)行。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以珋x±s表示，正態(tài)分布資料組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料以百分比表示，比較采用χ2檢驗(yàn)。通過繪制受試者工作特征(ROC)曲線及計(jì)算曲線下面積(AUC)評(píng)價(jià)不同檢測(cè)方法的診斷效能。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1四種檢測(cè)方法測(cè)定兩組血清Hcy水平比較四種檢測(cè)方法均顯示腦梗死組血清Hcy水平高于對(duì)照組(P均＜0.01)。見表1。

表1　四種檢測(cè)方法測(cè)定兩組血清Hcy水平比較(μmol/L，±s)

注:與對(duì)照組比較，*P＜0.01。

組別　n　血清Hcy速率法　循環(huán)酶法　化學(xué)發(fā)光法腦梗死組210 20.72±7.52*28.83±9.27*25.73±7.83*16.33±10.34水平ELISA*對(duì)照組205 9.62±2.33　9.72±4.29　9.69±2.54　8.59±2.32

2.2四種檢測(cè)方法的精密度比較全部415例被檢者，ELISA、循環(huán)酶法、速率法、化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)血清Hcy水平分別為(15.23±7.88)、(17.81±9.93)、(19.39±12.00)、(12.51±8.46)μmol/L;四種檢測(cè)方法檢測(cè)血清Hcy水平變異系數(shù)ELISA為5.17%，循環(huán)酶法為5.55%，速率法為6.12%，化學(xué)發(fā)光法為6.76%。循環(huán)酶法變異系數(shù)與速率法及化學(xué)發(fā)光法比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P均＜0.05)，與ELISA比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。

2.3四種檢測(cè)方法的ROC曲線分析以1－特異度為橫坐標(biāo)，靈敏度為縱坐標(biāo)繪制ROC曲線，四種方法檢測(cè)血清Hcy水平診斷腦梗死的效能見表2、圖1。顯示ELISA靈敏度、特異度均較高，診斷效能最強(qiáng)。與速率法、化學(xué)發(fā)光法比較，循環(huán)酶法特異度較高，且靈敏度不低;循環(huán)酶法AUC大于速率法及光化學(xué)法(P均＜0.05)。

3　討論

1976年，Wilcken等［4］提出血清Hcy水平升高為心血管疾病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。此后，有研究證實(shí)了這一觀點(diǎn)［5］。Brattstrom［6］研究發(fā)現(xiàn)，血漿Hcy水平升高5 μmol/L相當(dāng)于膽固醇升高0.5 mmol/L，充分肯定了高同型半胱氨酸血癥是心腦血管疾病發(fā)病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。Hcy在機(jī)體內(nèi)合成代謝過程需要蛋氨酸合成酶、胱硫醚β合成酶及維生素B12、葉酸、維生素B6的參與。正常情況下，體內(nèi)Hcy的合成與代謝保持動(dòng)態(tài)平衡，血Hcy含量甚微。如果Hcy代謝過程中所需的酶活性下降或物質(zhì)缺乏，則可導(dǎo)致Hcy升高。高同型半胱氨酸血癥導(dǎo)致腦血管病有以下幾種可能機(jī)制［7］:①Hcy對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞有毒性作用;②Hcy有刺激血管平滑肌增殖的作用;③Hcy有影響凝血機(jī)制;④Hcy影響細(xì)胞凋亡和DNA損傷。目前普遍認(rèn)為，高同型半胱氨酸血癥導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化的機(jī)制涉及血管壁、血小板和凝血因子三個(gè)方面。已有研究表明，在心腦血管疾病的患者中，葉酸及維生素B12與Hcy水平呈明顯的負(fù)相關(guān)［6］，患者補(bǔ)充葉酸、維生素B6及維生素B12后，Hcy水平有不同程度下降。本文腦梗死患者血清Hcy濃度明顯高于對(duì)照組，進(jìn)一步證實(shí)了Hcy升高與腦梗死疾病的發(fā)生發(fā)展存在密切關(guān)系，與國(guó)內(nèi)外研究結(jié)論相一致［8，9］。因此，血清Hcy水平的準(zhǔn)確測(cè)定對(duì)心腦血管疾病的預(yù)防、評(píng)估及治療均具有重要的臨床意義。

血清Hcy的檢測(cè)方法有多種，如高效液相色譜

法(HPLC)、熒光法、同位素檢測(cè)法、酶法、速率法等，其中以HPLC最為精確，但因其操作繁瑣，價(jià)格昂貴且需要較多人力、物力，不易在臨床推廣。本研究選擇ELISA、循環(huán)酶法、速率法及化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)腦梗死和正常對(duì)照組的血清Hcy水平，四種檢測(cè)方法均顯示腦梗死組血清Hcy水平明顯高于對(duì)照組。進(jìn)一步對(duì)其檢測(cè)精密度進(jìn)行比較，顯示血清Hcy水平變異系數(shù)ELISA最小，循環(huán)酶法次之;循環(huán)酶法變異系數(shù)小于速率法及化學(xué)發(fā)光法。證實(shí)循環(huán)酶法檢測(cè)血清Hcy水平的精密度高于速率法及化學(xué)發(fā)光法，與ELISA相當(dāng)。

ROC曲線是以1－特異度為橫坐標(biāo)，靈敏度為縱坐標(biāo)，將靈敏度及特異度結(jié)合到一起，根據(jù)曲線形狀及AUC可以對(duì)診斷指標(biāo)進(jìn)行定量分析，以評(píng)價(jià)指標(biāo)的診斷效能［10］。AUC是衡量實(shí)驗(yàn)室生物學(xué)指標(biāo)診斷效能的重要指標(biāo)，AUC越大，診斷效能越高［11］。本文顯示ELISA靈敏度、特異度均較高，診斷效能最強(qiáng)。但是，ELISA操作過程大部分仍需手工，不適用于臨床大批量標(biāo)本的處理。與速率法、化學(xué)發(fā)光法比較，循環(huán)酶法特異度較高，靈敏度亦無明顯降低;且循環(huán)酶法AUC大于速率法及化學(xué)發(fā)光法。因此，循環(huán)酶法檢測(cè)血清Hcy水平的精確度及診斷腦梗死的效能高于速率法、化學(xué)發(fā)光法。樊兵等［12］研究證實(shí)，循環(huán)酶法與HPLC具有高度一致性，且其操作簡(jiǎn)便、結(jié)果精確。梁釋予等［13］研究也顯示，循環(huán)酶法用于檢測(cè)血Hcy精密度良好，操作簡(jiǎn)單，易于臨床推廣應(yīng)用，適用于臨床大批量標(biāo)本的處理。因此，我們建議臨床檢測(cè)腦梗死患者血清Hcy水平應(yīng)更多地采用循環(huán)酶法。

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(收稿日期:2015-03-01)

通信作者:管洪在

文章編號(hào):1002-266X(2015)21-0054-03

文獻(xiàn)標(biāo)志碼:B

中圖分類號(hào):R743.33

doi:10.3969/j.issn.1002-266X.2015.21.021