河北省邯鄲市第二醫(yī)院(邯鄲056001)

李 萍 柴靜波 姬白嫣

子癇前期患者HLA-G水平在胎盤組織、血清中表達的臨床價值分析

河北省邯鄲市第二醫(yī)院(邯鄲056001)

李 萍 柴靜波 姬白嫣

目的：探討子癇前期患者胎盤組織及血清中人類白細胞抗原G(HLA-G)的表達及其臨床意義。方法：選取子癇前期產(chǎn)婦102例，正常妊娠婦女60例作為對照(正常妊娠組)，采用實時熒光定量PCR(real-time PCR)和酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測各組胎盤組織HLA-G mRNA及血清中可溶性人類白細胞抗原G(sHLA-G)水平。結(jié)果：正常妊娠組胎盤HLA-G mRNA相對表達量明顯高于輕度子癇前期組和重度子癇前期組(P<0.05)；正常妊娠組血清sHLA-G 濃度明顯高于輕度子癇前期組和重度子癇前期組(P<0.05)；輕度子癇前期組和重度子癇前期組胎盤HLA-G mRNA相對表達量、血清sHLA-G 濃度比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；子癇前期患者血清sHLA-G 濃度與胎盤HLA-G mRNA表達呈正相關(guān)(P<0.05)。結(jié)論：子癇前期患者胎盤組織HLA-G mRNA表達以及血清sHLA-G 濃度明顯減少，且血清sHLA-G 濃度與胎盤組織HLA-G mRNA表達水平有相關(guān)性，可能與子癇前期的發(fā)生和病理生理過程有關(guān)。

子癇前期為妊娠期高血壓疾病的較為嚴(yán)重的一種類型，主要通過損傷孕婦的心血管系統(tǒng)、泌尿系統(tǒng)以及微血管內(nèi)皮，從而導(dǎo)致嚴(yán)重的臨床癥狀[1]。部分學(xué)者認(rèn)為絨毛膜外滋養(yǎng)細胞的侵襲性下降可能顯著參與到了子癇前期的發(fā)生發(fā)展過程[1, 2]，而人類白細胞抗原G作為HLA-I類分子，通過誘導(dǎo)母體與胎兒的免疫耐受參與到了妊娠期高血壓疾病的發(fā)生發(fā)展過程[3]。本研究探討在我院住院分娩的102例子癇前期產(chǎn)婦相關(guān)胎盤組織、血清中HLA-G表達水平的差異，來揭示HLA-G在子癇前期發(fā)生發(fā)展中的作用，報道如下。

資料與方法

1 一般資料 選取2013年2月至2015年3月在我院住院分娩的子癇前期產(chǎn)婦，納入標(biāo)準(zhǔn)：①診斷符合謝幸、茍文麗主編的第8版《婦產(chǎn)科學(xué)》中的標(biāo)準(zhǔn)；②均為單胎初產(chǎn)；③產(chǎn)婦及家屬知情同意，并簽署同意書。本次研究共納入子癇前期患者102例，其中輕度子癇前期組63例，重度子癇前期組39例，同時選取正常妊娠婦女60例作為對照(正常妊娠組)，年齡為21～32歲，平均年齡27.01±5.18歲，孕次(次)為1～3，平均次數(shù)為1.48±0.52。3組孕婦一般資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

2 方 法

2.1 標(biāo)本采集：采集孕婦肘部靜脈血，室溫放置30min，待血液凝固后4攝氏度3000r/min離心10 min，分離出血清，-70攝氏度保存，3d內(nèi)測定相關(guān)HLA-G值；胎盤組織排出后5min內(nèi)采集近臍帶根部的胎盤組織1.5×1.5×1.5cm大小組織，生理鹽水漂洗3次，每次5min，立即放入液氮中。

2.2 酶聯(lián)免疫吸附法:(ELISA)采用江蘇吳生生物科技有限公司生產(chǎn)的ELISA試劑盒測定HLA-G，選用MULTISKANMK3酶標(biāo)儀測定450nm吸收光度值(thermo公司)。

2.3 實時熒光定量PCR(real-time PCR):采用南京凱基生物科技有限公司生產(chǎn)的RNA提取試劑盒提取組織RNA(研磨法)，采用takara試劑(南京凱基生物科技有限公司)盒逆轉(zhuǎn)錄為cDNA(引物體系2ul)，采用takaraSYBN熒光定量PCR試劑盒(SYBN master mix QPCR 南京凱基生物科技有限公司)擴增mRNA。

結(jié) 果

1 各組胎盤組織HLA-G mRNA表達情況 正常妊娠組胎盤HLA-G mRNA相對表達量為0.69±0.14，明顯高于輕度子癇前期組和重度子癇前期組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，輕度子癇前期組和重度子癇前期組胎盤HLA-G mRNA相對表達量比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)

2 各組血清sHLA-G 濃度情況 正常妊娠組血清sHLA-G 濃度為50.13±5.39ng/ml，明顯高于輕度子癇前期組和重度子癇前期組的29.01±9.20ng/ml和27.18±8.49ng/ml，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；而輕度子癇前期組和重度子癇前期組血清sHLA-G 濃度比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)

3 子癇前期患者血清sHLA-G 濃度與胎盤HLA-G mRNA表達關(guān)系 子癇前期患者血清sHLA-G 濃度與胎盤HLA-G mRNA表達呈正相關(guān)(r=0.924，P<0.05)

討 論

近年來越來越多的基礎(chǔ)理論研究特別是病理妊娠理論的發(fā)展證實，絨毛膜外滋養(yǎng)細胞作為具有顯著侵襲性的細胞亞群，顯著參與到了妊娠期高血壓疾病的發(fā)生發(fā)展過程中[3, 4]。一般認(rèn)為，母體成功而健康的妊娠過程依賴于母體與胎兒免疫系統(tǒng)相互耐受，而部分學(xué)者認(rèn)為絨毛膜外滋養(yǎng)細胞顯著誘導(dǎo)了母體與胎兒間的免疫耐受過程[5]。部分絨毛膜內(nèi)細胞以及絨毛膜外滋養(yǎng)細胞通過參與侵襲蛻膜組織以及淺肌層，從而引起肌層纖維組織呈現(xiàn)疏松改變、促進弓狀血管擴張，引起螺旋動脈血管內(nèi)皮以及肌層的重塑性改變，從而顯著改善妊娠特別是妊娠中晚期孕婦因血流灌注增加導(dǎo)致的血流動力學(xué)異常。而人類白細胞抗原HLA-I類分子HLA-G主要表達于絨毛膜外滋養(yǎng)細胞中，部分學(xué)者認(rèn)為其通過參與侵襲蛻膜組織以及子宮淺肌層，來參與到妊娠中晚期血流動力學(xué)的改善中。

本研究發(fā)現(xiàn)，正常妊娠組胎盤HLA-G mRNA相對表達量明顯高于輕度子癇前期組和重度子癇前期組，而不同程度的子癇前期患者胎盤中HLA-G mRNA的表達并無差異。子癇前期患者胎盤中HLA-G mRNA顯著下降，胎盤中血管數(shù)量以及平均血管直徑均顯著減小，同時合體滋養(yǎng)細胞結(jié)節(jié)增多，胎盤間質(zhì)出現(xiàn)顯著的纖維化變性生長纖維素性壞死，絨毛膜小動脈特別是螺旋動脈以及弓狀血管密度顯著降低。另外，對于正常孕婦以及子癇前期患者血清sHLA-G 濃度進行研究后發(fā)現(xiàn)，正常妊娠組血清sHLA-G 濃度為50.13±5.39ng/ml，明顯高于輕度子癇前期組和重度子癇前期組，進一步提示了sHLA-G以及胎盤組織中HLA-G可能顯著參與到了子癇前期的發(fā)生發(fā)展過程中。另外，本研究發(fā)現(xiàn)子癇前期患者血清sHLA-G 濃度與胎盤HLA-G mRNA表達呈正相關(guān)，表明胎盤組織中HLA-G的表達與循環(huán)血中sHLA-G的含量具有較好的一致性變化趨勢，進一步提示了胎盤組織可能通過外分泌sHLA-G來刺激高表達CD56的自然殺傷細胞(NK)膜表面的KIR2DL4抑制性受體，進而參與到妊娠期胎盤組織特別是相應(yīng)血管的生理性改變。

總之，子癇前期患者胎盤組織HLA-G mRNA表達以及血清sHLA-G 濃度明顯減少，且血清sHLA-G 濃度與胎盤組織HLA-G mRNA表達水平有相關(guān)性，提示HLA-G可能與子癇前期的發(fā)生和病理生理過程有關(guān)。

[1] 馬艷娟，劉 陶，王 慧，等. HLA-G在子癇前期患者血清及胎盤中的表達及意義[J]. 實用婦產(chǎn)科雜志,2014,23(06):452-456.

[2] 謝瑩?dān)L，耿排力，呂同德，等. 高原地區(qū)子癇前期患者胎盤及血清HLA-G表達水平及臨床意義[J]. 青海醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2012,25(01):35-38.

[3] 彭 潔，唐 卉. 子癇前期患者血清和胎盤組織中IL-24、HLA-G蛋白的表達及意義[J]. 中國婦幼保健,2014,45(33):5478-5480.

[4] 王雅萍，徐友娣，嚴(yán)檬潔. 可溶性人類白細胞抗原G與重度子癇前期的相關(guān)性研究[J]. 臨床與病理雜志,2014,15(05):498-501.

[5] 顧雪敏，古 航，陳 雄. 蛻膜組織中樹突狀細胞DEC-205及HLA-G的表達與子癇前期的關(guān)系研究[J]. 中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志,2013,17(10):36-41.

(收稿：2015-08-06)

子癇 @人類白細胞抗原 胎盤

R714.2

A

10.3969/j.issn.1000-7377.2015.12.036