陳四平，張盼盼（河北師范大學(xué)化學(xué)與材料科學(xué)學(xué)院，河北石家莊050024）

液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)（LC-MS）分析雪花梨中化學(xué)成分

陳四平，張盼盼
（河北師范大學(xué)化學(xué)與材料科學(xué)學(xué)院，河北石家莊050024）

摘要：利用液質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)配合二極管陣列紫外數(shù)據(jù)分析雪花梨中化學(xué)成分。用Agilent 1200高效液相色譜-3200 QTRAP型質(zhì)譜聯(lián)用儀，C18色譜柱，乙腈-水為流動(dòng)相梯度洗脫，采用電噴霧負(fù)離子模式采集數(shù)據(jù)，結(jié)合二極管陣列紫外數(shù)據(jù)。經(jīng)與文獻(xiàn)檢索相關(guān)質(zhì)譜與紫外數(shù)據(jù)對(duì)比分析雪花梨中的化學(xué)成分。雪花梨提取物二氯甲烷部位和甲醇部位共監(jiān)測(cè)出7個(gè)可推測(cè)成分。通過分析對(duì)比，推測(cè)出雪花梨提取物中7個(gè)黃酮類成分。

關(guān)鍵詞：雪花梨；液質(zhì)聯(lián)用；黃酮類

雪花梨為薔薇科梨亞科植物，主要產(chǎn)地有河北、湖北、山東、遼寧、安徽、江蘇、甘肅、四川等省[1]，其中河北趙縣的雪花梨為優(yōu)良品種，每年的產(chǎn)量居全國第一，雪花梨作為大家最喜歡的水果之一，具有清咽利喉、止咳化痰、解酒等很多功效。雪花梨還常作為食用和保健品的原料，如雪梨枇杷膏、止咳梨漿、秋梨潤(rùn)肺膏等，這些產(chǎn)品均具有良好的清咽潤(rùn)喉作用[2-3]。雖其療效顯著，但其有關(guān)化學(xué)成分方面研究較少，僅在其同屬品種刺梨及軟梨中發(fā)現(xiàn)黃酮類、生物堿、多糖等成分[4-5]，Durkee等發(fā)現(xiàn)梨中含有豐富的多酚類物質(zhì)，主要為黃酮和酚酸物質(zhì)，如兒茶素、熊果苷、綠原酸等，其具有抑菌，抗氧化和清除自由基等作用[6]。因此采用現(xiàn)代方法進(jìn)行了雪花梨總黃酮的提取，并利用高效液相與質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（LC-MS）配合紫外數(shù)據(jù)對(duì)其化學(xué)成分進(jìn)行簡(jiǎn)單分析，為進(jìn)一步開發(fā)雪花梨提供研究基礎(chǔ)。

1　材料與設(shè)備

1.1材料與試劑

雪花梨：采自河北趙縣；娃哈哈純凈水：山西娃哈哈昌盛飲料有限公司；AB-8大孔樹脂：滄州寶恩化工廠；乙腈（色譜純）：天津市康科德科技有限公司；甲醇、乙醇等（分析純）：天津百世化工有限公司。

1.2儀器與設(shè)備

Agilent 1200高效液相色譜-3200 QTRAP型串聯(lián)四極桿線性離子阱質(zhì)譜聯(lián)用儀：美國Agilent公司；600-2998高效液相色譜儀-二極管檢測(cè)器：Waters公司。

2　方法與結(jié)果

2.1雪花梨黃酮的提取和粗分

挑選無腐爛的雪花梨，清洗，去皮去核，切塊，加入少量異VC-Na后，榨汁，加5倍量的60%的乙醇在75℃下水浴浸提2 h，期間不斷攪拌，過濾后對(duì)濾液進(jìn)行減壓濃縮，至濾液為原來的1/10，用稀鹽酸調(diào)pH至2～4，在5℃冰箱中放置過夜，離心，得上清液。將上清液采用AB-8大孔樹脂進(jìn)行吸附，先用大量的蒸餾水洗，后再用二氯甲烷和甲醇進(jìn)行洗脫，分別收集二氯甲烷和甲醇洗脫液，減壓濃縮洗脫液，冷凍干燥，分別得到二氯甲烷組分和甲醇組分[7-19]。

2.2測(cè)定條件

2.2.1測(cè)定波長(zhǎng)的確定

分別取二氯甲烷、甲醇組分適量，用乙腈溶解，超聲5 min后，以純乙腈為空白，在220 nm～400 nm范圍內(nèi)進(jìn)行掃描。得出二氯甲烷組分和甲醇組分在278 nm均有最大吸收波長(zhǎng)，因此測(cè)定波長(zhǎng)選為278 nm。

2.2.2色譜條件

色譜柱：Discovery C18柱；檢測(cè)波長(zhǎng)：278 nm；進(jìn)樣量：20 μL；流動(dòng)相：A（0.05%甲酸水溶液），C（純乙腈）；流速：1.0 mL/min；梯度洗脫，數(shù)據(jù)分析系統(tǒng)：Empower軟件。梯度洗脫程序設(shè)置見表1。

按表1洗脫程序分別對(duì)前述樣品二氯甲烷組分和甲醇組分進(jìn)行高效液相色譜分析，所得高效液相色譜圖見圖1、圖2。

由色譜圖中可以看出，甲醇組分中有4個(gè)主要的峰能很好地分離開，各峰出峰時(shí)間見表2。其中峰8同峰4的出峰時(shí)間一致，峰9同峰5的出峰時(shí)間一致，極可能為同一物質(zhì)。

2.2.3液質(zhì)聯(lián)用條件

液相色譜儀：Agilent 1200系統(tǒng)，并配有四元泵、自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱和在線脫氣機(jī)（美國Agilent公司）；色譜條件：色譜柱為DiscoveryC18（250×4.6mm，5μm）；流速1 mL/min；柱溫25℃；進(jìn)樣量10 μL；梯度洗脫如表1所列。質(zhì)譜條件：3200 QTRAP型串聯(lián)四極桿線性離子阱型質(zhì)譜儀（美國AB公司）；配有TurboV離子源；質(zhì)譜條件如下，離子源：電噴霧離子化源ESI；源噴射電壓（IS）：-4500V，負(fù)離子模式檢測(cè)；霧化溫度：650℃；霧化氣壓力（GS1，高純N2）：60 psi（1 psi=6.895 kPa）；輔助氣壓力（GS2，高純N2）：65 psi；氣簾氣壓力（高純N2）：30 psi；解簇電壓：-40 V；掃描方式：增強(qiáng)型全掃描（EMS）；EMS采集范圍：100 m/z～1 000 m/z；掃描速度：1 000Da/s；數(shù)據(jù)分析系統(tǒng)：Analyst1.6。

2.2.4液質(zhì)聯(lián)用試驗(yàn)

將二氯甲烷組分和甲醇組分分別用乙腈溶解后進(jìn)入到高效液相-質(zhì)譜聯(lián)用儀（HPLC—MS）中，按2.2.3所述條件進(jìn)行試驗(yàn)，所得結(jié)果見表2。

根據(jù)液質(zhì)聯(lián)用所得高效液相各色譜峰質(zhì)譜數(shù)據(jù)圖譜結(jié)合高效液相二極管陣列檢測(cè)器所得紫外數(shù)據(jù)圖譜，對(duì)雪花梨提取物二氯甲烷組分和甲醇組分中的幾個(gè)主要色譜峰進(jìn)行逐個(gè)分析，經(jīng)與文獻(xiàn)[20]的數(shù)據(jù)圖譜相對(duì)照，初步推測(cè)雪花梨提取物二氯甲烷組分和甲醇組分中的化合物成分。其中1號(hào)～7號(hào)峰確定了相應(yīng)歸屬，8、9號(hào)峰的出峰時(shí)間、MS、UV分別同4、5號(hào)峰，應(yīng)為同一化合物。

3　結(jié)論

運(yùn)用高效液相色譜-二極管陣列聯(lián)用和高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)得到二氯甲烷和甲醇兩部分的紫外圖譜和質(zhì)譜，并將其與文獻(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)圖譜進(jìn)行了核對(duì)，分析出雪花梨中可能含有5-去氧牡荊苷、5，7，8-三羥黃酮-7-葡萄糖醛苷、表兒茶素沒食子酸酯、鳶尾甲黃素A、紫黃檀素、楊梅苷、噴杜苷等黃酮成分。

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DOI：10.3969/j.issn.1005-6521.2015.24.038

收稿日期：2015-08-17

作者簡(jiǎn)介：陳四平（1963—），男（漢），研究員，碩士，研究方向：天然產(chǎn)物活性成分研究及新藥開發(fā)。

Chemical Composition of Snow Pear by Liquid Chromatography-mass Spectrometry（LC-MS）Analysis

CHEN Si-ping，ZHANG Pan-pan
（College of Chemistry and Materials Science，Hebei Normal University，Shijiazhuang 050024，Hebei，China）

Abstract：Using liquid mass spectrometry technology with diode array ultraviolet data analyzed chemical composition in the snow pear.With Agilent 1200 high performance liquid chromatography（HPLC）-3200 type QTRAP mass spectrometry instrument，C18column，acetonitrile and water as mobile phase gradient elution，using electrospray ion mode to collect data，combined with diode array ultraviolet data.The literature retrieval related mass spectrometry and ultraviolet data contrast analysis of chemical composition of snow pear.Snow pear extract methylene chloride site and methanol were monitoring 7 can be speculated that component.through the analysis comparison，and infer the snow pear extract seven flavonoids ingredients.

Key words：snow pear；LC-MS；flavonoids