張麗萍，郭長(zhǎng)青

(北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京 100029)

針刀干預(yù)對(duì)膝骨關(guān)節(jié)炎兔軟骨細(xì)胞整合素β1表達(dá)的長(zhǎng)期影響*

張麗萍，郭長(zhǎng)青△

(北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京 100029)

目的:探討針刀對(duì)KOA的長(zhǎng)期作用。方法:按隨機(jī)數(shù)字表法將48只兔分為空白組、模型組、針刀組、電針組各12只，后3組用伸直位固定制動(dòng)法造模，治療后取材檢測(cè)軟骨整合素β1mRNA、蛋白。結(jié)果:模型組整合素mRNA水平降低，較空白組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;針刀組整合素mRNA水平上升，較空白組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;電針組整合素蛋白水平上升，較空白組差異顯著。結(jié)論:針刀可上調(diào)整合素β1基因和蛋白水平，長(zhǎng)期觀察發(fā)現(xiàn)其含量接近正常，即針刀的長(zhǎng)期療效是顯著的。

膝骨關(guān)節(jié)炎;針刀;整合素β1;長(zhǎng)期影響

膝骨關(guān)節(jié)炎(knee Osteoarthritis，KOA)是一種臨床常見(jiàn)的慢性關(guān)節(jié)疾病，其主要病變是膝關(guān)節(jié)軟骨退行性改變和繼發(fā)性骨質(zhì)增生，表現(xiàn)為關(guān)節(jié)疼痛、畸形和功能障礙［1］。膝骨關(guān)節(jié)炎的發(fā)病機(jī)制目前尚未完全明確，部分學(xué)者認(rèn)為其發(fā)病途徑之一有可能是膝關(guān)節(jié)周?chē)浗M織損傷引起膝關(guān)節(jié)力學(xué)平衡失調(diào)后，力學(xué)信號(hào)刺激軟骨細(xì)胞膜上的信號(hào)傳導(dǎo)因子整合素，啟動(dòng)軟骨細(xì)胞內(nèi)一系列的生化反應(yīng)，調(diào)控細(xì)胞內(nèi)膠原、基質(zhì)金屬蛋白酶的基因表達(dá)，最終造成軟骨基質(zhì)的病變。因此，整合素在軟骨細(xì)胞內(nèi)的基因與蛋白的表達(dá)和軟骨基質(zhì)的損傷與修復(fù)有著密切的關(guān)系。針刀松解法在治療經(jīng)筋疾病方面已經(jīng)形成了一套比較完整、規(guī)范的操作技術(shù)，且臨床上我們應(yīng)用針刀松解法治療膝骨關(guān)節(jié)炎取得了良好的療效。前期的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)已經(jīng)初步研究了針刀通過(guò)松解膝關(guān)節(jié)周?chē)浗M織達(dá)到修復(fù)軟骨的短期作用機(jī)制。本實(shí)驗(yàn)以膝骨關(guān)節(jié)炎兔為研究對(duì)象，通過(guò)針刀松解法治療后，觀察膝關(guān)節(jié)軟骨中整合素β1基因及蛋白表達(dá)水平的長(zhǎng)期變化，研究針刀松解法對(duì)膝骨關(guān)節(jié)炎兔軟骨細(xì)胞內(nèi)整合素β1基因、蛋白表達(dá)的長(zhǎng)期影響，探討針刀松解法治療膝骨關(guān)節(jié)炎的長(zhǎng)期療效。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物及分組

6月齡新西蘭家兔48只，體質(zhì)量(2.25±0.25) kg，由北京市金牧陽(yáng)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物養(yǎng)殖有限責(zé)任公司提供，在北京軍區(qū)總醫(yī)院骨科研究所動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室喂養(yǎng)。按隨機(jī)數(shù)字表將家兔分為空白組、模型組、電針組、針刀組各12只，除空白組外其余3組均參加造模。

1.2 主要設(shè)備和試劑

直徑0.40 mm、長(zhǎng)40 mm的漢章牌一次性針刀，直徑0.25 mm、長(zhǎng)25 mm的環(huán)球牌一次性無(wú)菌針灸針。LH202H型HANS穴位神經(jīng)刺激儀。Real-Time PCR儀(型號(hào)IQ5，BIO-RAD)，美國(guó)。超微量核酸蛋白測(cè)定儀(型號(hào)ND2000C，Thermo)，美國(guó)。動(dòng)物組織總RNA提取試劑盒、Quant cDNA第一鏈合成試劑盒、SuperReal PreMix(SYBR Green)PCR試劑盒，天根生化科技(北京)有限公司。一抗Integrin-β1為鼠單抗(貨號(hào)MAB1981，美國(guó)MILLIPORE公司)，二抗山羊抗小鼠IgG(H+L)，HRP(貨號(hào)S001，北京天德悅生物科技有限責(zé)任公司)。

1.3 膝骨關(guān)節(jié)炎模型復(fù)制

采用改良后Videman法［2］即左后肢伸直位固定制動(dòng)法:除空白組外，另3組造模塊動(dòng)物于造模前禁食10～16 h，以3%戊巴比妥鈉溶液按30 mg/kg劑量耳緣靜脈注射麻醉，剪去左后肢踝關(guān)節(jié)以上兔毛，牽拉使其處于完全伸直位，樹(shù)脂繃帶經(jīng)65℃ ～85℃熱水浸泡軟化后，從腹股溝到趾頭固定(膝關(guān)節(jié)伸直180°，踝關(guān)節(jié)背屈60°)，留出足趾觀察血供，樹(shù)脂外以石膏固定，繼用醫(yī)用紗布包裹，加以制動(dòng)并保持其透氣性，以防止兔撕咬，共制動(dòng)6周［3］。如足趾有壞死、發(fā)黑、浮腫等情況出現(xiàn)，應(yīng)立刻拆除石膏、樹(shù)脂，待腫脹消退后再重新固定。若樹(shù)脂松動(dòng)或脫落應(yīng)及時(shí)重新固定。在整個(gè)造模過(guò)程中，若出現(xiàn)足底潰爛、咬傷、骨折、皮膚感染、腹瀉等情況均予以剔除。

1.4 干預(yù)方法

空白組不做任何處理;模型組造模后不做干預(yù)治療;電針組造模后1周，以韓氏穴位神經(jīng)刺激儀進(jìn)行電針刺激治療，分別連接內(nèi)膝眼和外膝眼、陽(yáng)陵泉和陰陵泉。波形疏密波，頻率2/100 Hz，強(qiáng)度3 mA，每次20 min，以動(dòng)物肢體微顫且無(wú)嘶叫為度。隔天治療1次，1周治療3次，共治療3周。

針刀組造模后1周，在兔膝關(guān)節(jié)針刀進(jìn)針部位，以龍膽紫定位，常規(guī)備皮、消毒，然后刺入針刀，出針并按壓片刻止血。每周1次，共3次，共治療3周。各進(jìn)針點(diǎn)具體操作如下:①內(nèi)、外側(cè)副韌帶進(jìn)針點(diǎn)操作:針刀于韌帶中點(diǎn)前緣進(jìn)針，刀口線與韌帶方向平行，刀體與皮膚切面垂直刺入，向韌帶起、止點(diǎn)方向分別松解，出刀并加壓片刻;②髕韌帶進(jìn)針點(diǎn)操作:刀口線與髕韌帶縱軸平行，刀體和髕韌帶皮膚切面垂直?？焖儇萑脒_(dá)髕韌帶下，由上而下松解，出刀并加壓片刻。

1.5 取材

各組動(dòng)物在治療結(jié)束3周后以空氣栓塞法處死進(jìn)行取材。超凈工作臺(tái)上以銳利刀片于股骨外側(cè)髁快速切取拇指指甲大小全新鮮軟骨組織，液氮冷凍，－70℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.6 指標(biāo)檢測(cè)

1．6．1 RT-PCR法檢測(cè)軟骨整合素β1基因表達(dá) 表1顯示，取10～20 mg組織，使用“動(dòng)物組織RNA提取試劑盒”進(jìn)行提取。經(jīng)檢測(cè)所有標(biāo)本RNA濃度為20～50 ng/ul，且OD260/OD280介于1.9～2.1之間。對(duì)RNA使用反轉(zhuǎn)錄試劑盒進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)使其轉(zhuǎn)換成cDNA，反應(yīng)體系為20 μL，其中RNA模板5 μL，10×RT buffer 2 μL，Oligo dT引物2 μL， dNTP Mixture 2 μL， QuantReverse Transcriptase 1 μL，RNaese-free ddH2O 8 μL;反應(yīng)程序?yàn)?7℃60 min。反應(yīng)體系為20 μL，其中cDNA模板0.4 μL，上下游引物(濃度為10 μM)各0.3 μL，2×SuperReal PreMix 10 μL，RNaese-free ddH2O 9 μL。反應(yīng)程序?yàn)?5℃變性15 min后，95℃ 10 s，60℃ 32 s共45個(gè)循環(huán)［4］。用相對(duì)定量法分析結(jié)果，用各個(gè)樣本的目的基因的Ct值-各個(gè)樣本的內(nèi)參基因(beta actin)的Ct值，得到ΔCt;用處理組的ΔCt-空白組ΔCt的均值，得到ΔΔCt;各組與空白組比較其待測(cè)基因 mRNA的相對(duì)表達(dá)水平 =2－ΔΔCt。兔Integrin-β1、GAPDH引物，以GAPDH為內(nèi)參照，各引物序列和產(chǎn)物大小如下。

表1 引物序列和產(chǎn)物值

1．6．2 Western blot法檢測(cè)軟骨整合素β1蛋白表達(dá) 預(yù)冷RIPA蛋白抽提試劑加入蛋白酶抑制劑。在蛋白抽提開(kāi)始前加入0.1 M PMSF母液，PMSF終濃度1 mM。將兔膝關(guān)節(jié)軟骨組織從液氮中取出，稱(chēng)取組織質(zhì)量:裂解液體積=1∶9比例加入裂解液，用眼科剪剪碎組織塊，F(xiàn)luka電動(dòng)組織勻漿器15000 rpm轉(zhuǎn)速進(jìn)行勻漿，每次10 s，間隔10 s，進(jìn)行3次勻漿。勻漿時(shí)EP管需要浸入冰水混合物中進(jìn)行降溫。勻漿完成后在冰上孵育20 min，4℃離心，13000 rpm，20 min。離心完成后取上清，分裝保存，用BCA法蛋白定量法測(cè)定蛋白含量后，以RIPA調(diào)整蛋白濃度，加入5×還原樣品緩沖液后樣品終濃度為4 mg/ml，煮沸變性5 min。

1．6．3 目的蛋白WB檢測(cè) 根據(jù)目的蛋白的分子量，配制12%的分離膠，濃縮膠濃度為5%，待檢測(cè)蛋白樣品上樣量20 ug/孔，電泳條件為濃縮膠恒壓90V，約20 min，分離膠恒壓160 V，通過(guò)預(yù)染蛋白marker來(lái)確定電泳停止時(shí)間。大分子量蛋白integrinβ-1300 mA恒流，0.45 um孔徑NC膜，轉(zhuǎn)膜時(shí)間2 h，轉(zhuǎn)膜完成后麗春紅染色試劑對(duì)膜進(jìn)行染色，將膜完全浸沒(méi)在3%BSA-TBST中室溫輕搖30 min。用3%BSA-TBST按比例1∶500稀釋integrin β1一抗，室溫孵育10 min，放4℃過(guò)夜。第2天從4℃拿出膜，在室溫孵育30 min，TBST洗膜5次，每次3 min。用5%脫脂奶粉-TBST稀釋二抗，山羊抗鼠IgG(H+L)HRP，1∶10000室溫輕搖40 min;TBST洗膜6次，每次3 min。

1．6．4 內(nèi)參蛋白WB檢測(cè) Stripping Buffer洗膜，37℃洗膜30 min，去離子水洗膜3次，TBST洗膜3次，每次3 min，將膜完全浸沒(méi)3%BSA-TBST中室溫輕搖30 min;加GAPDH鼠單抗，用5%奶粉稀釋抗體，1∶40000稀釋?zhuān)覝胤跤?0 min;TBST洗膜5次，每次3min。用5%脫脂奶粉-TBST稀釋二抗，山羊抗小鼠IgG(H+L)HRP，1∶10000，室溫輕搖40 min。TBST洗膜5次，每次3min。

ECL加到膜上后反應(yīng)3～5 min，膠片曝光10 s ～5 min(曝光時(shí)間隨不同光強(qiáng)度而調(diào)整)，顯影2 min，定影。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，所得數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，采用單因素方差分析。先行正態(tài)性檢驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)結(jié)果滿足正態(tài)分布，繼而采用方差齊性檢驗(yàn)，2組間比較采用LSD檢驗(yàn)，P ＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.01為統(tǒng)計(jì)學(xué)差異顯著。

2 結(jié)果

2.1 針刀干預(yù)對(duì) KOA兔軟骨中 Integrinβ1 mRNA表達(dá)的影響

表2顯示，兔膝關(guān)節(jié)軟骨中Integrinβ1 mRNA表達(dá)水平，模型組較空白組明顯下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);與模型組比較，針刀組與電針組有所上升，與之比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);針刀組與空白組比較，含量基本一致，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);電針組與空白組比較含量還是較低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);針刀組比電針組比較含量相對(duì)較多，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。

表2 各組兔軟骨Integrinβ1 mRNA表達(dá)水平比較(±s)

表2 各組兔軟骨Integrinβ1 mRNA表達(dá)水平比較(±s)

注:與模型組比較:▲▲P＜0.01;與空白組比較:☆☆P＜0.01

組別 樣本數(shù) Ct值空白組 9 1.08±0.18▲▲模型組 10 0.56±0.16☆☆電針組 9 0.76±0.12▲▲☆☆針刀組 10 0.95±0.13▲▲

2.2 針刀松解法對(duì)KOA兔軟骨中Integrinβ1蛋白表達(dá)的影響

表3圖1顯示，造模后兔軟骨中Integrinβ1蛋白表達(dá)顯著下降，模型組與空白組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);針刀及電針干預(yù)后，Integrinβ1蛋白表達(dá)水平有所回升，針刀組與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);電針組與模型組比較，含量有所提高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);與空白組比較，針刀組含量與之基本相等，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);電針組含量上升，但與空白組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);針刀組與電針組雖都有上升，但電針組明顯少于針刀組，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。

表3 各組兔軟骨Integrinβ1蛋白表達(dá)水平比較(±s)

表3 各組兔軟骨Integrinβ1蛋白表達(dá)水平比較(±s)

注:與模型組比較:▲▲P＜0.01，▲P＜0.05;與空白組比較:☆☆P ＜0.01

組 別 樣本數(shù) Integrinβ1蛋白相對(duì)表達(dá)量空白組 6 2.98±0.53▲▲模型組 6 0.83±0.33☆☆電針組 6 1.50±0.60▲☆☆針刀組 6 2.69±0.44▲▲

圖1 各組兔軟骨Integrinβ1蛋白Western blot條帶圖

3 討論

整合素是黏附分子中的一類(lèi)，由a、β亞單位經(jīng)非共價(jià)鍵連接而成的異二聚體跨膜糖蛋白［5］。在脊椎動(dòng)物中已發(fā)現(xiàn)18種不同的α亞單位和8種β亞單位，它們按不同組合構(gòu)成至少24種整合素［6］。軟骨細(xì)胞膜上主要表達(dá)整合素β1，以整合素α1β1型、整合素α3β1型、整合素α5β1型多見(jiàn)［7］。其中，α10β1則是穩(wěn)定軟骨細(xì)胞表型的最主要分子［8-9］。研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，幼年期β1整合素的缺乏會(huì)導(dǎo)致嚴(yán)重的軟骨發(fā)育不全和關(guān)節(jié)的多種異常［10］。軟骨細(xì)胞感受外在的應(yīng)力刺激并將力學(xué)信號(hào)轉(zhuǎn)化為細(xì)胞內(nèi)化學(xué)信號(hào)，進(jìn)而影響細(xì)胞各種生理活動(dòng)，改變細(xì)胞外基質(zhì)成分使軟骨適應(yīng)外在的負(fù)荷變化，這一過(guò)程稱(chēng)之為力學(xué)信號(hào)傳導(dǎo)。整合素介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)途徑按傳遞方向可分為外向信號(hào)傳導(dǎo)和內(nèi)向信號(hào)傳導(dǎo)［11］。其中，內(nèi)向信號(hào)傳導(dǎo)能影響胞內(nèi)多種靶基因表達(dá)，從而調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、凋亡、黏附、遷移等生理過(guò)程，是細(xì)胞維持正常生理代謝的關(guān)鍵所在［12］。整合素是細(xì)胞表面應(yīng)力受體之一，其通過(guò)細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix，ECM)/整合素/細(xì)胞骨架蛋白形成的黏著斑完成力化學(xué)傳導(dǎo)來(lái)調(diào)控軟骨細(xì)胞的增殖和分化功能。整合素是軟骨細(xì)胞表面感受力學(xué)刺激的受體，能將所感應(yīng)的力學(xué)刺激信號(hào)通過(guò)細(xì)胞表面特殊的分子通道傳遞至胞內(nèi)不同結(jié)構(gòu)部件上，實(shí)現(xiàn)力化學(xué)轉(zhuǎn)換，調(diào)節(jié)細(xì)胞的生理功能［13］。越來(lái)越多的研究表明，整合素對(duì)于力學(xué)信號(hào)的傳入轉(zhuǎn)化有著重要作用，但是整合素自身在力學(xué)刺激下的變化及其機(jī)制的研究目前尚未明確，還有待進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)研究。

本實(shí)驗(yàn)采取膝關(guān)節(jié)伸直位固定制動(dòng)法，其關(guān)節(jié)力學(xué)變化使關(guān)節(jié)面負(fù)重減小，給關(guān)節(jié)軟骨所施加的力量相對(duì)升高，生物力學(xué)方面的應(yīng)力平衡失調(diào)，膝關(guān)節(jié)周?chē)浗M織的積累性損傷，導(dǎo)致膝關(guān)節(jié)動(dòng)態(tài)力學(xué)平衡失調(diào)，關(guān)節(jié)周?chē)捻g帶、肌肉等軟組織長(zhǎng)時(shí)間牽拉無(wú)法收縮而受損，從而破壞膝關(guān)節(jié)內(nèi)部的力學(xué)平衡，使正常負(fù)重的力線發(fā)生變化，關(guān)節(jié)軟骨面有效負(fù)重面積減少，單位面積內(nèi)的骨小梁壓力增高，引起骨質(zhì)增生或微小骨折，導(dǎo)致膝關(guān)節(jié)發(fā)生一系列的退行性改變［14］。

通過(guò)前期實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，家兔膝關(guān)節(jié)損傷的病理改變及修復(fù)過(guò)程與人極其相似，具有良好的可重復(fù)性及相似性。造模后，兔膝關(guān)節(jié)軟骨中，整合素β1mRNA表達(dá)水平明顯下降，說(shuō)明模型制動(dòng)造成膝關(guān)節(jié)力學(xué)平衡失調(diào)，力學(xué)信號(hào)發(fā)生轉(zhuǎn)變，傳導(dǎo)到細(xì)胞膜調(diào)控了整合素的基因表達(dá)。治療之后，針刀組與空白組比較，基因表達(dá)上升，其含量基本一致;電針組與空白組比較，其基因含量也有所上升，說(shuō)明針刀松解法和電針治療對(duì)整合素β1基因表達(dá)均可產(chǎn)生長(zhǎng)期的影響。但從實(shí)驗(yàn)統(tǒng)計(jì)結(jié)果可以看出，針刀松解法的長(zhǎng)期調(diào)節(jié)作用要優(yōu)于電針治療。在整合素β1蛋白表達(dá)方面，針刀組與空白組之間含量基本相同，說(shuō)明針刀松解法通過(guò)對(duì)軟組織的松解，調(diào)節(jié)膝關(guān)節(jié)力學(xué)平衡，而調(diào)整整合素β1蛋白的表達(dá)水平;電針組與空白組比較，蛋白含量也有所上升，說(shuō)明電針對(duì)整合素蛋白表達(dá)也有一定的影響，但針刀組長(zhǎng)期提高整合素蛋白表達(dá)的能力高于電針組。以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，膝關(guān)節(jié)的制動(dòng)可以使處于靜壓力狀態(tài)下的膝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞發(fā)生嚴(yán)重的病理變化，這種應(yīng)力抑制了整合素β1基因和蛋白的表達(dá)，使軟骨發(fā)生相應(yīng)的細(xì)胞凋亡，針刀通過(guò)對(duì)膝關(guān)節(jié)周?chē)g帶等軟組織的松解，調(diào)整了關(guān)節(jié)內(nèi)部壓力，使得關(guān)節(jié)內(nèi)部的力學(xué)信號(hào)發(fā)生轉(zhuǎn)變，提高整合素β1基因和蛋白的表達(dá)水平。從針刀的影響來(lái)看，整合素介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)通路被啟動(dòng)后，在較長(zhǎng)一段時(shí)期內(nèi)，其基因和蛋白表達(dá)接近于正常組水平，且針刀松解法調(diào)整水平明顯優(yōu)于電針組，說(shuō)明針刀的長(zhǎng)期療效是值得肯定的。

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Long-range Influences of Acupotomy Therapy on Integrinβ1 of Cartilage in Rabbits with Knee Osteoarthritis

ZHANG Li-ping，GUO Chang-qing△
(College of Acupuncture and Moxibustion，Beijing University of Traditional Chinese Medicine，Beijing 100029，China)

Objective To explore the long-range mechanism of needle knife lysis on knee osteoarthritis．Methods:Sixmonth-old New Zealand rabbits were randomly divided into normal control group，model group，acupotomy group，and electro-acupuncture(EA)group．KOA model was established by videman，After modeling，acupotomy group and electroacupuncture group were treated for three weeks，once every week in acupotomy group，and three times in electroacupuncture group．After the treatment，continued to normal breeding three weeks，then testted rabbits’behavior with knee level assessment method;Expression of apoptosis genes integrinβ1 mRNA，was conducted by Real-time PCR test，and expression of apoptosis proteins integrinβ1，was conducted by Western blot test．Results The results of Real-time PCR tests :after modeling，Integrin β1 mRNA expression levels in the rabbit knee cartilage extremely reduced;compared with normal control group showed an extreme difference．After acupotomology intervention and continued to normal breeding three weeks，compared with model group，Integrin β1 mRNA expression levels rose．There was no significant difference between the normal control group and the acupotomology group．Compared with normal control group，Integrin β1 mRNA expression level rose in electro-acupuncture，showing an extreme difference．The results of western blot tests:after modeling，integrinβ1 protein levels in the rabbit knee cartilage reduced abnormally，compared with normal control group showed a significant difference．Acupotomology intervention raised the integrin β1 protein expression levels，and electricity for this regulation raised the integrin β1 protein expression levels．Conclusion:Acupotomology not only can adjust the mechanical signals stimulate cartilage cells and raise the gene and protein expression levels of integrinβ1，but also can improve cartilage matrix．In the long-term observation its content closed to normal．This illustrates the long-term efficacy of Acupotomology is positive．

Osteoarthritis of the knee;Acupotomy;Integrinβ1;Long-range Influences

R244．5

B

1006-3250(2015)10-1291-03

2015-03-17

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81173333)

張麗萍(1988-)，女，山東威海人，醫(yī)學(xué)碩士，從事針刀的臨床與研究。

郭長(zhǎng)青(1959-)，男，教授，博士研究生導(dǎo)師，從事針刀理論與臨床研究，E-mail:guochangqing66@163．com。