鄭莉明，敖海清，徐志偉

(廣州中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，廣州 510405)

腎精不足模型造模方法文獻(xiàn)分析*

鄭莉明，敖海清，徐志偉

(廣州中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，廣州 510405)

目的:全面歸納近10年腎精不足模型的各種造模方法及其理論依據(jù)、相關(guān)疾病和評(píng)價(jià)指標(biāo)，為腎精不足證及其相關(guān)疾病的研究提供文獻(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)依據(jù)。方法:電子檢索中國(guó)知網(wǎng)數(shù)據(jù)庫(kù)和萬方數(shù)據(jù)庫(kù)2004年1月至2013年10月收錄的腎精不足模型相關(guān)期刊論文、學(xué)位論文、會(huì)議論文，歸納其造模方法和相關(guān)評(píng)價(jià)指標(biāo)。結(jié)果:共納入腎精不足模型相關(guān)文獻(xiàn)38篇，其造模方法主要分為藥物干預(yù)、手術(shù)切除、物理方法和模擬中醫(yī)病因4大類;主要與生長(zhǎng)發(fā)育遲緩、不孕不育癥、骨質(zhì)疏松癥、更年期綜合征、早衰等疾病相關(guān);模型評(píng)價(jià)指標(biāo)主要反映生長(zhǎng)發(fā)育遲緩、生殖功能低下、衰老或相關(guān)疾病病理特征等。結(jié)論:各種造模方法都有其優(yōu)缺點(diǎn)，目前尚缺乏能全面反映神經(jīng)內(nèi)分泌免疫功能紊亂的腎精不足模型。

腎精不足;動(dòng)物模型;相關(guān)疾病;模型評(píng)價(jià)指標(biāo)

腎精不足是臨床常見的中醫(yī)證型，常見于臨床各大疾病，但目前較少關(guān)于腎精不足動(dòng)物模型歸納整理的文獻(xiàn)，這不利于腎精不足證型及其相關(guān)疾病的研究。本研究就目前腎精不足常用造模方法、相關(guān)評(píng)價(jià)指標(biāo)及存在的問題從文獻(xiàn)研究的角度加以探討。

1 資料與方法

1.1 資料來源

進(jìn)行電子檢索，檢索式為:FT=(腎精不足+腎精虧虛+腎精虧損+腎精虛)×動(dòng)物模型;應(yīng)用的數(shù)據(jù)庫(kù)為中國(guó)知網(wǎng)數(shù)據(jù)庫(kù)(http://www．cnki．net/)和萬方數(shù)據(jù)庫(kù)(http://c．g．wanfangdata．com．cn/);檢索時(shí)限為2004.1至2013.10;檢索文獻(xiàn)類型為學(xué)術(shù)期刊、學(xué)位論文、會(huì)議論文。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)與評(píng)估

1.2.1 納入標(biāo)準(zhǔn) 研究疾病以腎精不足為根本;研究中用到腎精不足動(dòng)物模型或討論內(nèi)容與腎精不足動(dòng)物模型有關(guān);未明確說明中醫(yī)證型，但研究疾病與中醫(yī)腎精不足相關(guān)。

1.2.2 排除標(biāo)準(zhǔn) 以人為觀察對(duì)象的研究;研究的中醫(yī)病機(jī)復(fù)雜，不是以腎精不足為主;造模方法單純模仿其他文獻(xiàn);對(duì)使用較多的造模方法，選取最具代表性的文獻(xiàn)，其余排除。

1.3 質(zhì)量評(píng)估

根據(jù)文章摘要剔除不符合納入標(biāo)準(zhǔn)者，閱讀全文剔除資料重復(fù)、文摘和資料不全者。

1.4 數(shù)據(jù)提取

共檢索到4081篇，按納入及排除標(biāo)準(zhǔn)篩選后，共納入38篇文獻(xiàn)。

2 結(jié)果

2.1 納入文獻(xiàn)

使用藥物干預(yù)造模法21篇，使用手術(shù)切除造模法4篇，使用物理造模法1篇，根據(jù)中醫(yī)病因造模12篇。

2.2 造模方法(見表1)

2.2.1 藥物干預(yù) 1)激素類藥物:①性激素:雄激素能引起低促性腺激素性性腺功能低下性無排卵。馬惠榮［1］在雌性大鼠頸背部皮下一次性注射丙酸睪丸酮0.05 ml/只制作無排卵模型，用于研究多囊卵巢綜合征;②糖皮質(zhì)激素:糖皮質(zhì)激素能使HPAT軸功能紊亂而出現(xiàn)神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫網(wǎng)絡(luò)功能失調(diào)和骨代謝抑制等?？堤鞚?jì)［2］給予大鼠肌注地塞米松和劉雁飛等［3］給大鼠灌胃強(qiáng)的松復(fù)制骨質(zhì)疏松模型。2)中藥:雷公藤具有生殖損害作用，可復(fù)制生殖功能障礙模型。黃瓊霞等［4］給予大鼠雷公藤多苷片30 mg/(kg·d)灌胃，連續(xù)30 d;諶婕［5］推薦給予雌性小鼠30 mg/(kg·d)，持續(xù)10周。3)其他:①羥基脲能抑制核苷酸代謝，使體內(nèi)生理、生化代謝功能低下和紊亂。楚生輝等［6］給予大鼠羥基脲片500 mg/(kg·d)灌胃，連續(xù)30 d，復(fù)制生殖功能障礙模型;②環(huán)磷酰胺通過干擾DNA合成而具有生殖毒性。李暉［7］持續(xù)5 d給予雄性大鼠環(huán)磷酰胺40 mg/(kg·d)腹腔注射，可用于復(fù)制生精障礙模型、男性更年期綜合征模型［8］。王浩［9］用雌性大鼠腹腔注射環(huán)磷酰胺復(fù)制卵巢早衰模型;③腺嘌呤吸收水解后，能誘發(fā)雄鼠睪丸功能損害，是目前男性不育癥造模應(yīng)用較多的方法。涂鵬［10］給予雄性大鼠腺嘌呤25 mg/(100 g·d)灌胃，連續(xù)30 d，復(fù)制生精障礙模型;④維甲酸可激活破骨細(xì)胞，促進(jìn)骨吸收。冼華［11］給予大鼠維甲酸70 mg/(kg·d)灌胃，連續(xù)2周，復(fù)制骨質(zhì)疏松模型;⑤免疫反應(yīng)誘發(fā)卵巢組織損傷。陳麗［12］用ZP3透明帶多肽粉末和大鼠卵巢組織配制免疫試劑，多點(diǎn)注射雌鼠皮下復(fù)制免疫性卵巢早衰模型;⑥酒精性更年期綜合征模型的雌激素變化及卵巢形態(tài)改變與臨床絕經(jīng)綜合征情況相吻合。夏斌［13］一次性將0.2 ml無水乙醇注射到雌性大鼠卵巢內(nèi)，增齡4周，復(fù)制更年期綜合征模型;⑦D-半乳糖能引起細(xì)胞代謝紊亂，自由基積聚，過氧化脂質(zhì)、脂褐素等增高，出現(xiàn)衰老［14］。徐叔云法:以D-半乳糖按12Omg/(kg·d)頸背部皮下注射3月齡小鼠，連續(xù)42 d，復(fù)制亞急性衰老小鼠模型［15］;⑧溴氰菊酯具有類雌激素樣作用，會(huì)影響仔鼠性器官的發(fā)育和正常生殖內(nèi)分泌功能。趙穎等［16］用溴氰菊酯(1/20LD50DM)(6.93 mg/(kg·d))給孕鼠灌胃，仔鼠作為先天不足生殖功能障礙模型;⑨煙霧中有毒物質(zhì)可影響胎兒發(fā)育，中醫(yī)學(xué)認(rèn)為煙草“辛溫，有大毒”(《滇南本草》)，耗傷孕母真陰，無以濡養(yǎng)胚胎，可致子代先天稟賦不足。蔡光先等［17］使孕鼠每天接受香煙煙熏，分娩后仔鼠用于研究先天腦部發(fā)育遲緩疾病;⑩陳云志等［18］提出維生素D為腎藏精的物質(zhì)基礎(chǔ)，用含2.5%氯化鍶的自來水喂養(yǎng)雄性小鼠并避光飼養(yǎng)，持續(xù)6周，造成小鼠體內(nèi)25(OH) D3缺乏，性激素方面改變與腎精不足證具有較高相似性。

2.2.2 手術(shù)切除 大鼠在去勢(shì)后的生理改變與更年期后相似。將雌性大鼠雙側(cè)卵巢切除增齡3個(gè)月［19］，可用于研究絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥、圍絕經(jīng)期綜合征、衰老、生殖內(nèi)分泌免疫紊亂等。邵玉等［20］手術(shù)摘除雄性大鼠雙側(cè)睪丸，增齡13周，可用于研究骨質(zhì)疏松癥、中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能下降等。骨的制動(dòng)使機(jī)械應(yīng)力對(duì)骨刺激減少，抑制骨形成和增加骨吸收，從而導(dǎo)致骨量的丟失。高俊［21］切除大鼠右側(cè)坐骨神經(jīng)5 mm，術(shù)后增齡4周，造成廢用性骨質(zhì)疏松癥。

2.2.3 物理方法 用物理方法達(dá)到骨制動(dòng)效果。張睿［22］將大鼠尾部懸吊使大鼠因后肢廢用而成骨質(zhì)疏松模型，造模8周。

2.2.4 根據(jù)中醫(yī)病因 1)單因素造模方法:①恐傷腎:孫理軍等［23］讓雄性大鼠每天接受貓的恐嚇，持續(xù)2個(gè)月;恐傷孕鼠:馮新玲［24］使孕鼠每天接受貓的恐嚇。郝蕊［25］在貓嚇孕鼠的同時(shí)，加入人為定量恐嚇造成母鼠腎精受損，使子鼠先天不足。黨照麗［26］在恐傷孕鼠后，再讓其分娩的仔鼠接受貓的恐嚇，造成先天不足、后天失養(yǎng)的模型，用于研究生長(zhǎng)發(fā)育遲緩、神經(jīng)內(nèi)分泌免疫系統(tǒng)紊亂、先天腦部發(fā)育障礙等方面;②房勞傷腎:腰向穎等［27］將雌雄鼠按一定比例同籠誘導(dǎo)房事不節(jié)，一般持續(xù)2～3個(gè)月。王丹［28］用自制電刺激儀每天刺激雄性大鼠的敏感部位，使其生殖器充血勃起并排出精液，持續(xù)10 d。此法較雌雄同籠房勞法減少了動(dòng)物成本和大大縮短了造模周期，應(yīng)進(jìn)一步研究是否值得推廣，用于研究男性不育癥、免疫功能減退等疾病;③自然衰老:選用自然老年鼠為衰老模型［29］，一般選用13～24月齡，用于研究衰老、骨質(zhì)疏松癥、圍絕經(jīng)期綜合征、神經(jīng)內(nèi)分泌免疫功能低下等。

2)復(fù)合因素造模方法:①房勞加驚恐:孫潔等［30］將雌雄鼠按一定比例同籠，雄鼠同時(shí)接受貓的恐嚇，連續(xù)21 d，復(fù)制雄鼠腎精不足模型。造模后使其與雌鼠交配致孕，分娩的雄性仔鼠可作為先天腎精不足模型，用于研究生殖障礙、生長(zhǎng)發(fā)育障礙、腎病及肝、骨代謝失衡等方面。屈婭婷等［31］先采用煙熏孕鼠法造成仔鼠矮小，再給予雄性仔鼠房勞加驚恐，復(fù)制矮小癥腎精虧虛雄性大鼠病證結(jié)合模型。②房勞加游泳:謝玲玲等［32］給予雄性小鼠房勞加力竭游泳，造模4周用于研究男性生殖功能減退。③驚恐加游泳:姚軍孝［33］給予雄性小鼠每天接受貓的恐嚇和力竭游泳，持續(xù)21 d，用于研究生長(zhǎng)發(fā)育遲緩、抗氧化能力下降等疾病。

2.3 模型評(píng)價(jià)指標(biāo)

2.3.1 一般情況 體毛枯疏、精神萎靡、倦怠嗜睡，反應(yīng)遲鈍、弓背蜷縮、擁擠扎堆、行動(dòng)遲緩，采食量、飲水量減少，且易受驚嚇，體質(zhì)量明顯下降。

表1 按疾病歸類造模方法

2.3.2 生長(zhǎng)發(fā)育遲緩 體質(zhì)量增長(zhǎng)慢，股骨長(zhǎng)度生長(zhǎng)慢，生長(zhǎng)激素(GH)降低［36］。腦部發(fā)育遲緩，腦內(nèi)細(xì)胞凋亡較正常仔鼠增加［20］。

2.3.3 生殖功能障礙 生殖器官質(zhì)量減輕，雌鼠陰道涂片見動(dòng)情周期缺失、不完整且延長(zhǎng)［5］，雄鼠精子質(zhì)量顯著性降低［11］。

2.3.4 骨質(zhì)疏松 骨密度測(cè)定較空白組顯著降低;股骨病理切片見骨小梁變細(xì)、變薄，形態(tài)結(jié)構(gòu)性差，有扭曲或斷裂，骨小梁間間隙增大［23］。

2.3.5 卵巢早衰 陰道涂片見動(dòng)情周期紊亂，表現(xiàn)為動(dòng)情前期延長(zhǎng)，漸至動(dòng)情周期缺失，僅有動(dòng)情間期的白細(xì)胞及少量黏液，并出現(xiàn)有核上皮細(xì)胞混雜［13］。

2.3.6 男性更年期綜合征 大鼠血清總睪酮(TT)、血清游離睪酮(FT)水平下降，行為學(xué)(懸尾試驗(yàn))部分改變［9］。

2.3.7 女性更年期綜合征 卵巢病理切片顯示以囊腫及部分萎縮為主，未見明顯卵泡［15］。陰道涂片呈現(xiàn)動(dòng)情周期紊亂、動(dòng)情間期延長(zhǎng)［34］。

2.3.8 衰老 自由基累積、抗氧化能力下降，表現(xiàn)為超氧化物酶(SOD)活性下降，丙二醛(MDA)含量增高［16］。Morris水迷宮行為測(cè)試，提示學(xué)習(xí)記憶能力下降［18］。雌鼠陰道涂片表現(xiàn)無動(dòng)情周期［34］。

3 討論

腎精不足模型可分為病理模型和傳統(tǒng)病因模型。不孕不育癥、骨質(zhì)疏松癥、卵巢早衰、更年期綜合征、衰老等都以腎精不足為根本，其臨床病理研究較為清晰，所以大多采用病理模型。但病理模型只能反映臨床腎精不足病理的某個(gè)或幾個(gè)方面，化學(xué)藥物造模會(huì)引起急性損傷和中毒現(xiàn)象，影響檢測(cè)指標(biāo)甚至導(dǎo)致模型動(dòng)物死亡，而手術(shù)切除法中的去勢(shì)法，除了帶來手術(shù)創(chuàng)傷，模型也不符合臨床患者內(nèi)分泌水平波動(dòng)的情況。傳統(tǒng)病因模型就是根據(jù)先天稟賦不足或后天調(diào)養(yǎng)失宜、或驚恐無度、或強(qiáng)勞無逸、或房事不節(jié)、或久病，或高年腎氣虧虛等病因，復(fù)制出腎精不足證的模型，而非病的模型。病因模型符合中醫(yī)理論，更向臨床病因靠攏，適用于中醫(yī)基礎(chǔ)和臨床的研究，有很好的發(fā)展前景。但同一病因可以導(dǎo)致不同的病證，同一病證又可以有不同的病因，二者不完全具有一對(duì)一的特異性，所以利用單純中醫(yī)病因造成動(dòng)物的病理改變并不能說明它只屬于某一個(gè)證。

另外，各種造模方法在給藥途徑、用藥劑量、造模時(shí)間、具體操作等方面差異較大，缺乏規(guī)范化、標(biāo)準(zhǔn)化，模型的可靠性因此受到質(zhì)疑。一些腎精不足的造模方法往往也用于復(fù)制腎陽虛或腎陰虛模型，而以腎精不足證為基礎(chǔ)的疾病模型，也常常兼夾其他證型。在評(píng)價(jià)腎精不足模型的指標(biāo)中，一般采用反映生長(zhǎng)發(fā)育遲緩、生殖功能低下、衰老或相關(guān)疾病病理特征的指標(biāo)，但目前的指標(biāo)都不是“金指標(biāo)”。雖有學(xué)者試圖找出腎精不足的物質(zhì)基礎(chǔ)，但結(jié)論未得到普遍認(rèn)可。腎精不足證本質(zhì)的臨床診斷指標(biāo)尚未得到特異化、數(shù)量化，導(dǎo)致其模型仍難以量化和標(biāo)準(zhǔn)化。

以上結(jié)果歸納了多種腎精不足模型造模方法，各有優(yōu)缺點(diǎn)，應(yīng)根據(jù)研究疾病的特點(diǎn)和實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪x擇較為合適的造模方法。腎精不足模型研究較腎陽虛、腎陰虛模型少，但隨著中醫(yī)養(yǎng)生文化推廣與普及，腎精不足證候的研究將越來越受到重視。

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Analysis of Literatures About Methods for Preparing Kidney Essence Insufficient Models

ZHENG Li-ming，AO Hai-qing，XU Zhi-wei
(School of Fundamental Medical Science，Guangzhou University of Chinese Medicine，Guangzhou 510405，China)

Objective:To summarize the methods，theories and types of making kidney essence insufficient model，the related diseases and evaluating factors and thus provide basis of literature statistics for researches on diseases related to the syndrome．Methods:Journals，conference papers and theses about kidney essence insufficient model published between 2004.1 and 2013.10 were searched from CNKI and WANFANG databases to analyze the model preparation methods and detective measures．Results:In total 38 papers were selected．The method consists of drug intervention，surgical resection，physical method and simulating the etiological factor of the traditional Chinese medicine．The diseases related to the model mainly include growth retardation，infertility and male infertility，osteoporosis，climacteric syndrome，premature aging，etc．Growth retardation，reproductive hypofunction，aging or changes in pathophysiology of the diseases are reflected in the evaluating factors．Conclusion:Given all the methods presented have both advantages and disadvantages，none of them can reflect neuro-endocrine-immunity dysfunction of kidney essence insufficiency in all aspects．

Kidney essence insufficiency;Animal models;Related diseases;Evaluating factors

R-332

A

1006-3250(2015)10-1323-04

2015-02-21

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81173144);教育部2010年度新世紀(jì)優(yōu)秀人才資助計(jì)劃項(xiàng)目(NCET-100088)

鄭莉明(1988-)，女，醫(yī)學(xué)博士，從事中醫(yī)藥抗應(yīng)激損傷的理論與應(yīng)用研究。