miRNAs在腫瘤基因治療中的研究進(jìn)展*

楊光華 殷保兵**

（上海復(fù)旦大學(xué)附屬華山醫(yī)院普外科 上海 200040）

摘 要成熟miRNAs是一類長度為20~23個核苷酸的非編碼單鏈小RNAs。近年來，陸續(xù)發(fā)現(xiàn)miRNAs與腫瘤的發(fā)生、分化、轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)等密切相關(guān)。miRNAs作為一種調(diào)節(jié)因子，通過與靶mRNA的完全或不完全互補結(jié)合抑制靶mRNA表達(dá)，進(jìn)而在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)節(jié)腫瘤相關(guān)基因的表達(dá)。隨著對miRNAs的基礎(chǔ)生物學(xué)和生物信息學(xué)的進(jìn)一步研究，可以預(yù)見未來miRNAs作為腫瘤基因治療的新靶點有著廣泛的應(yīng)用前景。

關(guān)鍵詞腫瘤 miRNA 基因治療

*基金項目：上海市科委納米專項基金（12nm0501502）

The advance of miRNAs in cancer gene therapy

YANG Guanghua, YIN Baobing

(Department of General Surgery, Huashan Hospital, Fudan University, Shanghai 200040, China)

ABSTRACTMature miRNAs which consist of 20–23-nucleotide single-stranded RNAs are closely related to biological processes of cancer, such as its occurrence, differentiation, metastasis and recurrence. miRNAs, as key regulators, can inhibit mRNA expression by recognizing specific mRNA targets, and further mediate post-transcriptional inhibition of cancer related genes. With the further understanding of fundamental biology and bioinformatics, miRNAs will serve as a novel cancer therapeutic target with a broad application prospect.

KEY WORDSneoplasms; microRNA; gene therapy

成熟的miRNAs是一類長20~23個核苷酸的非編碼單鏈小RNAs，其初級轉(zhuǎn)錄體在細(xì)胞核內(nèi)由加工miRNAs的微處理器復(fù)合體（Drosha-DGCR8 protein complexes）催化生成70個核苷酸的前體miRNAs。前體miRNAs由核輸出蛋白-5轉(zhuǎn)運至細(xì)胞質(zhì)中，由核糖核酸Ⅲ酶（Dicer）催化后生成miRNA：miRNA*二聚體。在RNA解旋酶作用下，其中miRNA與Argonaute 蛋白(AGO)結(jié)合后，作為核蛋白復(fù)合物的核心與靶mRNA的3'端的非編碼區(qū)完全互補或不完全互補結(jié)合，直接切割或抑制其翻譯表達(dá)，在轉(zhuǎn)錄后水平負(fù)調(diào)控基因表達(dá)，而 miRNA則釋放至細(xì)胞質(zhì)中并被降解。這些機制表明miRNAs可以通過對靶基因的調(diào)控進(jìn)而干預(yù)多種信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，在細(xì)胞生長、增殖、發(fā)育和凋亡過程中扮演重要角色。本文就miRNAs在腫瘤疾病演進(jìn)過程中異常的生源途徑及其扮演的不同角色，以及其在腫瘤基因治療中的應(yīng)用進(jìn)展進(jìn)行總結(jié)。

1 miRNAs生源途徑的異常變化

在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展進(jìn)程中，miRNAs的生源途徑會出現(xiàn)各種異常變化。miRNAs與腫瘤的生物進(jìn)程之間的關(guān)系是復(fù)雜的調(diào)節(jié)反饋環(huán)?，F(xiàn)將幾種重要的異常變化總結(jié)如下：①某些miRNA上游基因位于染色體不穩(wěn)定區(qū)域或靠近染色體斷點區(qū)域，這易導(dǎo)致miRNAs出現(xiàn)異常擴增、易位或缺失，進(jìn)而表達(dá)異常[1]。②在腫瘤細(xì)胞中會出現(xiàn)編碼Dicer1基因的半合缺失，從而導(dǎo)致DICER1表達(dá)量下降。實驗證明，通過減少DICER1表達(dá)導(dǎo)致的相關(guān)miRNA表達(dá)異?？杉铀俪梢暰W(wǎng)膜細(xì)胞瘤小鼠模型的腫瘤形成，提示DICER1可作為單倍不足的腫瘤抑制因子[2]。另外，抑制Drosha 及其輔助因子DGCR8的表達(dá)也可抑制成熟miRNAs生成。③類胚胎致死性異常視覺基因編碼蛋白、睪丸生殖細(xì)胞瘤易感基因編碼蛋白等的RNA結(jié)合蛋白(RBPs)與miRNAs的協(xié)同或競爭效應(yīng)均可導(dǎo)致miRNAs與靶mRNA結(jié)合位點異常，

進(jìn)而使相關(guān)癌基因或抑癌基因表達(dá)量異常。另外，可變聚腺苷酸化也可縮短mRNA 3'UTR，導(dǎo)致結(jié)合位點異常[3]。上述各種異常變化導(dǎo)致miRNAs表達(dá)異常和（或）miRNA-mRNA目標(biāo)識別失調(diào)，進(jìn)一步造成下游與腫瘤分化、凋亡、增殖、干細(xì)胞維護(hù)、復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移等密切相關(guān)蛋白的表達(dá)異常。

2 抑癌性miRNAs和致癌性miRNAs

根據(jù)miRNAs在腫瘤生物進(jìn)程中所扮演的不同角色可以分為抑癌性miRNAs和癌基因性miRNAs。與編碼基因相比，在腫瘤基因治療中將miRNAs作為治療靶點能更高效的發(fā)揮抑瘤作用。通過載體轉(zhuǎn)載外源性抑癌性miRNAs或反義寡聚核苷酸(AMOs)進(jìn)入腫瘤細(xì)胞，可以調(diào)節(jié)腫瘤生物進(jìn)程中相關(guān)基因的表達(dá)，達(dá)到治療腫瘤的目的。

2.1 抑癌性miRNAs

通過穩(wěn)定轉(zhuǎn)染或瞬間轉(zhuǎn)染相關(guān)外源抑癌性miRNAs，可使腫瘤細(xì)胞中抑癌性miRNAs高表達(dá)，進(jìn)而通過抑癌基因和（或）一些參與腫瘤生物進(jìn)程的相關(guān)基因，達(dá)到治療腫瘤的目的。

2.1.1 Let-7

Let-7家族的上游基因定位于染色體的9q22.3、21p11.1和3p21.1-p21.2區(qū)域，在許多惡性腫瘤中，let-7家族的表達(dá)量都顯著降低。let-7家族成員的低表達(dá)通常由miRNA上游基因在染色體對應(yīng)區(qū)域的缺失或由Dicer 1輔因子TARBP2磷酸化導(dǎo)致。Torrisani等[4]報道let-7作為抑癌基因可表達(dá)于正常胰腺細(xì)胞，但在胰管腺癌（PDAC）組織中出現(xiàn)下調(diào)。進(jìn)一步研究表明，將外源性let-7轉(zhuǎn)染胰腺癌細(xì)胞可抑制K-RAS表達(dá)和癌細(xì)胞增殖。因此，let-7被認(rèn)為是PDAC的抑癌基因。但是，研究也表明K-RAS翻譯區(qū)的靶向多態(tài)性會干擾let-7的功能，這種機制的存在可能會導(dǎo)致let-7治療效果的不確定性。Paranjape等[5]也在乳腺癌中闡述了這種機制。

2.1.2 miR-26

Ji等[6]的研究表明，在肝癌細(xì)胞中呈高表達(dá)的miR-26可顯著下調(diào)cyclin E2蛋白的表達(dá)，并抑制癌細(xì)胞增殖。此外，有研究也表明miR-26低表達(dá)的肝癌患者的總體生存期短于高表達(dá)者，而后者對干擾素的治療也更為敏感。最近的研究表明，miR-26a在膀胱癌細(xì)胞株T24中呈高表達(dá)，其可通過靶向HMGA1抑制癌細(xì)胞增殖和侵襲。這些結(jié)果表明miR-26a可作為腫瘤基因治療的重要靶點[7]。

2.1.3 其他抑癌性miRNAs

Hu等[8]的研究表明miR-141可能通過調(diào)節(jié)SIP1蛋白而抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移，這使其可能成為治療結(jié)直腸癌的新靶點。Ye等[9]的研究表明，在大多數(shù)結(jié)直腸癌組織中miR-27b表達(dá)量降低，而通過轉(zhuǎn)染外源性miR-27b可調(diào)節(jié)VEGFC的表達(dá)而進(jìn)一步抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞的增殖。

2.2 癌基因性miRNAs

在腫瘤中過度表達(dá)的內(nèi)源性miRNAs被認(rèn)為是癌基因性miRNAs（又稱oncomirs），它常通過抑制那些控制癌細(xì)胞分化或凋亡的相關(guān)腫瘤抑癌基因發(fā)揮作用。癌基因性miRNAs可以被人工合成的抗miRNAs反義寡聚核苷酸（AMOs）拮抗。此外，研究者發(fā)現(xiàn)有同時抑制多種miRNAs基因的方法，Obad等[10]發(fā)現(xiàn)將源靶向的微小鎖核酸(LNAs)轉(zhuǎn)染入細(xì)胞，會同時導(dǎo)致同系家族miRNAs被抑制。其他一些研究發(fā)現(xiàn)，在胃癌細(xì)胞系（SGC7901）中，轉(zhuǎn)染針對miR-221/21和106a的多靶點反義寡聚核苷酸(MTg-AMOs)，可以特異性的抑制多種miRNAs的表達(dá)，并且有效地抑制胃癌細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移。

2.2.1 miR-21

miR-21在多種癌組織中都有高表達(dá)現(xiàn)象[11-13]。研究發(fā)現(xiàn)在肝細(xì)胞癌組織中，miR-21通過靶向PDCD4、PTEN、RECK調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的程序性凋亡、癌細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移和侵襲能力。對miR-21的抑制或許能成為治療肝細(xì)胞癌和彌漫性B細(xì)胞淋巴瘤(DLBCL)的新療法[14-15]。另外，越來越多的證據(jù)揭示了上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）和腫瘤干細(xì)胞的生物學(xué)行為是腫瘤的侵襲性和轉(zhuǎn)移的重要因素，兩者可通過miR-21相互聯(lián)系。在對乳腺癌的研究發(fā)現(xiàn)，通過拮抗miR-21可上調(diào)PTEN表達(dá)和抑制AKT和ERK1/2通路，進(jìn)而逆轉(zhuǎn)EMT和腫瘤干細(xì)胞的表型[16]。

2.2.2 miR-10b

目前的研究表明miRNA-10b的多效性是由于其對多種抑癌基因的抑制，如TP53、FOXO3、CYLD、PAX6、

HOXD10和NOTCH1。在人膠質(zhì)瘤原位小鼠動物模型中，抑制miRNA-10b可減弱膠質(zhì)瘤細(xì)胞的間葉組織細(xì)胞生長、血管再生和侵襲性，并認(rèn)為其或許是膠質(zhì)瘤發(fā)生的多效調(diào)節(jié)因子[17]。另外，Jin等[18]也發(fā)現(xiàn)miR-10b在轉(zhuǎn)移性乳腺癌細(xì)胞中高表達(dá)，其通過抑制HOXD10靶點促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移和侵襲。借助PLL-RNA納米粒子，將反義miRNA-10b轉(zhuǎn)染入乳腺癌細(xì)胞質(zhì)中，可抑制乳腺癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移和侵襲。

2.2.3 miR-23a

Lian等[19]的研究結(jié)果表明，在79個膠質(zhì)瘤組織樣本中，miR-23a的表達(dá)水平明顯高于癌旁組織。在膠質(zhì)瘤細(xì)胞中，轉(zhuǎn)染反義miR-23a，可激活能抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞生長和促進(jìn)細(xì)胞凋亡的細(xì)胞凋亡蛋白酶激活因子-1(APAF1)，從而抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲。這個結(jié)果提示miR-23a可能成為新的神經(jīng)膠質(zhì)瘤治療靶點。

3 miRNAs與化療

腫瘤的異質(zhì)性使傳統(tǒng)化療效果不一。腫瘤可能對依靠大量信號級聯(lián)反應(yīng)的單通路靶向治療產(chǎn)生耐藥，這種固有或獲得性耐藥是導(dǎo)致化療藥物不能消除全部腫瘤組織從而引起腫瘤復(fù)發(fā)的最常見原因。miRNAs在改變腫瘤對化療藥物反應(yīng)中有很多潛在作用，包括調(diào)節(jié)DNA甲基轉(zhuǎn)移酶1(DNMT1)和多藥耐藥蛋白，改變藥物作用靶點和藥物濃度，影響化療誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，調(diào)節(jié)血管形成和腫瘤干細(xì)胞[20]。

3.1 miRNAs與DNMT1/MDR

研究表明，miR-21的過表達(dá)和凋亡相關(guān)蛋白4 （PDCD4）的下調(diào)可使細(xì)胞凋亡蛋白抑制因子（LAPs）和多藥耐藥蛋白1表達(dá)上調(diào)，進(jìn)一步導(dǎo)致乳腺癌中腫瘤細(xì)胞抗凋亡和耐藥性的產(chǎn)生。值得注意的是，轉(zhuǎn)染了反義miR-21的MCF-7細(xì)胞系（乳腺癌細(xì)胞系），對化療藥物更敏感及更易凋亡，表明這種策略可以在一定程度上克服乳腺腫瘤細(xì)胞的化療耐藥性[21]。此外，在耐藥的惡性膠質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞中也發(fā)現(xiàn)了過表達(dá)的miR-21。通過特異性反義寡核苷酸抑制miR-21的過表達(dá)，可增強半合成鬼臼毒素衍生物（VM-26）對U373 MG惡性膠質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒性作用[22]。最新的研究還表明，miR-152 或miR-185可增加順鉑耐藥卵巢細(xì)胞系SKOV3/ DDP和A2780/DDP細(xì)胞的藥物敏感性[23]。

3.2 miRNAs和Bcl-2家族

細(xì)胞對凋亡信號的反應(yīng)可能會影響療效，許多miRNAs通過抑癌基因Bcl-2參與了細(xì)胞凋亡過程。過表達(dá)miR-204可通過靶向調(diào)節(jié)Bcl-2家族成員抑制胃癌細(xì)胞的集落形成能力和遷移能力，并進(jìn)一步增加胃癌細(xì)胞對5-氟尿嘧啶和奧沙利鉑的敏感性。這些結(jié)果表明，通過miR-204的過表達(dá)抑制Bcl-2家族成員的活性，可能成為預(yù)防和治療胃癌的新策略[24]。Zhu等[25]的研究表明，miR-497在多藥耐藥的人胃癌細(xì)胞系SGC7901/長春新堿（VCR）和多藥耐藥性人肺癌細(xì)胞株A549/順鉑（CDDP）中表達(dá)下調(diào)，同時證明下調(diào)的miR-497與上調(diào)的Bcl-2蛋白具有相關(guān)性，進(jìn)一步證明了過表達(dá)的miR-497可抑制BCL-2家族成員，進(jìn)而增加SGC7901/VCR和A549/ CDDP細(xì)胞對VCR-和CDDP誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡敏感性。

3.3 miRNAs和VEGF

很多藥物可靶向腫瘤血管阻斷腫瘤的豐富血供，如貝伐單抗、索拉非尼、舒尼替尼等。然而，由于腫瘤對VEGF抑制劑產(chǎn)生的耐藥性只能使一部分患者從中獲益。Hua等[26]分析預(yù)測，至少有96種miRNA直接參與了VEGF的調(diào)節(jié)。此外，除了直接調(diào)節(jié)VEGF表達(dá)外，許多miRNAs可間接介導(dǎo)VEGF信號通路，如miR-126[27]。隨著miRNAs與腫瘤血管生成關(guān)系的進(jìn)一步研究，可能會在抗腫瘤血管生成方面提供一個優(yōu)化選擇。

3.4 miRNAs和腫瘤干細(xì)胞

腫瘤干細(xì)胞可能與腫瘤發(fā)生、耐藥性、增殖、復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移相關(guān)。近年來，let-7、miR-128和miR-34a與腫瘤干細(xì)胞之間的關(guān)系已得到證實，在乳腺癌、前列腺癌和惡性膠質(zhì)細(xì)胞瘤中，miRNAs是調(diào)控腫瘤干細(xì)胞的重要因子[28]。最近的一項研究表明，miR-34a可通過抑制CD44，進(jìn)而抑制腫瘤干細(xì)胞在前列腺癌中的形成[29]。

3.5 miRNAs和細(xì)胞間隙連接（GJIC）

另外，化療耐藥性與藥物在細(xì)胞間傳輸過程中濃度降低有關(guān)。GJIC是細(xì)胞間的重要連接方式，藥物可通過GJIC從靶細(xì)胞轉(zhuǎn)移到相鄰細(xì)胞，使更多的細(xì)胞對化學(xué)藥物產(chǎn)生效應(yīng)。但是由于間隙連接成分，如跨膜蛋白的連接蛋白類（Cx），常在癌細(xì)胞中缺失，使腫瘤和轉(zhuǎn)化細(xì)胞普遍存在GJIC缺陷，恢復(fù)GJIC能提高藥物敏感性[30]。目前已證實miR-1和miR-206可以靶向Cx，導(dǎo)

致GJIC損害[31-32]。

4 miRNAs與放療

放療利用電離輻射造成DNA雙鏈斷裂引起細(xì)胞失活和細(xì)胞死亡，因為各類腫瘤及其周圍正常組織對于輻射的敏感性不同，尋找影響腫瘤輻射敏感性的因素對于放療非常重要。而調(diào)控基因表達(dá)的miRNAs可以影響腫瘤細(xì)胞對輻射的敏感性。miRNAs對放療相關(guān)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的調(diào)控可分為三個方面：①表皮生長因子受體（EGFR）和胰島素樣生長因子受體作為上游受體；②MAPK/ERK通路、PI3K/AKT通路、PI3K/AKT通路、TGF-β通路作為中游轉(zhuǎn)導(dǎo)通路；③DNA損傷應(yīng)答基因、細(xì)胞周期和凋亡相關(guān)基因作為下游效應(yīng)因子，表明miRNAs在調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞輻射反應(yīng)和輻射敏感性中發(fā)揮了重要作用[33]。

4.1 miRNAs與EGFR

研究表明EGFR過表達(dá)或突變與腫瘤細(xì)胞對放療的抵抗力密切相關(guān)，它通過激活細(xì)胞增殖通路，如PI3K/ AKT、MAPK/ERK通路發(fā)揮作用[34-35]。除此機制之外，EGFR還參與放射誘導(dǎo)的核易位，并與DNA依賴的蛋白激酶（DNA-PK)相互作用。在人類癌細(xì)胞中，miR-7的過表達(dá)不僅使EGFR和EGFR相關(guān)信號通路（如EGFRPI3K-AKT通路）表達(dá)失活，同時也增強輻射誘導(dǎo)的γH2AX焦點形成，減少DNA-PK[36]。研究表明miR-133 以EGFR為靶標(biāo)抑制腫瘤細(xì)胞的增殖、侵襲和遷移，特別是在激素非依賴型前列腺癌細(xì)胞系中[37]。這些結(jié)果證明，靶向EGFR的DNA損傷修復(fù)功能或者阻礙其下游的信號通路可作為增加放療敏感性的可選擇的方案。

4.2 miRNAs與中游轉(zhuǎn)導(dǎo)通路

許多miRNAs與放射相關(guān)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的中游轉(zhuǎn)導(dǎo)因子相關(guān)，如miR-7 以PI3K/AKT通路為靶點抑制腫瘤發(fā)生，逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移過程[36]，miR-17-5p 以MAPK/ERK通路為靶點調(diào)節(jié)腫瘤的增殖和遷移[38]，miR-31以核因子（NF）-κB通路為靶點激活NF-κB通路，影響腫瘤細(xì)胞的增殖和凋亡[39]，miR-520c/miR-373以轉(zhuǎn)化生長因子（TGF）-β通路為靶點影響腫瘤的轉(zhuǎn)移、炎癥反應(yīng)和進(jìn)展[40]。

4.3 miRNAs與DNA損傷應(yīng)答基因

有許多miRNAs以DNA損傷應(yīng)答基因的主要組分如ATM、ATR、DNA-PK、Chk1和Chk2為靶點，這些組分也參與了癌細(xì)胞的放射敏感性和（或）化療敏感性的調(diào)節(jié)[41]。有研究表明腎細(xì)胞癌細(xì)胞在進(jìn)行電離輻射處理后，其hsa-miR-185的表達(dá)下調(diào)。實驗進(jìn)一步表明上調(diào)miR-185可抑制ATR通路，使腎細(xì)胞癌細(xì)胞在體內(nèi)外對X射線敏感，增強輻射誘導(dǎo)的凋亡，抑制增殖。這些發(fā)現(xiàn)表明miRNAs無論作為直接的癌癥治療方法還是作為增強腫瘤細(xì)胞對放療敏感的工具都具有潛在的應(yīng)用價值[42]。

4.4 miRNAs與細(xì)胞周期/凋亡相關(guān)基因

在放射相關(guān)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中，多種細(xì)胞周期和凋亡相關(guān)基因的表達(dá)都在很大程度上受相關(guān)miRNAs活性的影響。研究顯示在口腔鱗狀細(xì)胞癌中miR-125b表達(dá)下調(diào)，過表達(dá)miR-125b可以降低口腔鱗狀細(xì)胞癌的增殖速率，并通過靶向ICAM2的mRNA提高口腔鱗狀細(xì)胞癌對X射線輻射的敏感性[43]。在CL1-0肺腺癌細(xì)胞中，miR-449a的過表達(dá)可有效增強放射誘導(dǎo)的DNA損害和凋亡，改變細(xì)胞周期分布，并最終導(dǎo)致CL1-0對放射的敏感性增加[44]。此外，最近的研究表明miR-375在胃癌細(xì)胞系（AGS）中的過表達(dá)可減少P53蛋白的表達(dá)及對電離輻射和依托泊苷不敏感的細(xì)胞數(shù)[45]。

5 miRNAs在腫瘤基因治療中的載體

在腫瘤基因治療中，如何轉(zhuǎn)載包括miRNAs的外源基因進(jìn)入靶細(xì)胞，并使它們高效表達(dá)，從而達(dá)到治療目的非常重要。由于miRNAs可能被體循環(huán)和（或）細(xì)胞質(zhì)的核酸酶降解，所以使用基因載體保護(hù)miRNAs的結(jié)構(gòu)和功能完整性非常必要。理想的載體應(yīng)該能保持基因不被體內(nèi)核酸酶降解，能有效傳遞基因特異性，保持體內(nèi)外穩(wěn)定性，并可以大規(guī)模生產(chǎn)。此外，載體及其降解產(chǎn)物應(yīng)該無毒性、無免疫原性。

基因載體可分為病毒載體（腺病毒、腺相關(guān)病毒、慢病毒載體和逆轉(zhuǎn)錄病毒）和非病毒載體（脂質(zhì)體、多糖、多肽、合成聚合物）。病毒載體中的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體、腺病毒載體等，均或多或少地存在不足之處，影響了基因治療的有效性和安全性。如逆轉(zhuǎn)錄病毒載體存在無法高效轉(zhuǎn)導(dǎo)非分裂期細(xì)胞，腺病毒載體在體內(nèi)不能實現(xiàn)目的基因穩(wěn)定的長期表達(dá)，且反復(fù)應(yīng)用容易引起免疫反應(yīng)。而慢病毒載體相對于其他類型的病毒載體，不但可以感染非分裂期細(xì)胞，還具有容納外源性目的基因片段大、免疫反應(yīng)小等優(yōu)點，具有一定的應(yīng)用前景。與病毒載體

相比，非病毒載體因為有更低的免疫原性、毒性和生產(chǎn)成本，以及更強大的轉(zhuǎn)運靶向能力等優(yōu)勢，應(yīng)用更為廣泛。近年來，在非病毒載體中，研究者更青睞脂質(zhì)體，根據(jù)性能和電荷特性，脂質(zhì)體可分為普通脂質(zhì)體、熱敏感性脂質(zhì)體、光敏感性脂質(zhì)體、磁性脂質(zhì)體、pH敏感脂質(zhì)體、免疫脂質(zhì)體、中性脂質(zhì)體、陰離子脂質(zhì)體和陽離子脂質(zhì)體等。其中陽離子脂質(zhì)體是一種帶正電荷的脂囊泡，可以用作負(fù)電荷載質(zhì)的轉(zhuǎn)運載體，尤其適合轉(zhuǎn)移蛋白質(zhì)、多肽、寡核苷酸、RNA和DNA，其主要優(yōu)勢是可以直接與基因聯(lián)合而無需事先封裝基因[46]。免疫脂質(zhì)體是通過抗體或抗體片段與脂質(zhì)體表面結(jié)合制成，能在分子水平識別腫瘤靶細(xì)胞，可能比游離藥物和非靶向性脂質(zhì)體更能有選擇性地殺死腫瘤目標(biāo)，其在荷瘤動物體內(nèi)的靶向性分布可使其在腫瘤中達(dá)到更高的藥物濃度。磁性脂質(zhì)體由封裝磁性納米粒子的脂質(zhì)體制成，擁有很好的攜藥性能、磁性靶向能力和生物相容性[47]。

6 總結(jié)

隨著miRNAs生源論和生理功能等相關(guān)機制的進(jìn)一步明確，使miRNAs治療相關(guān)疾病的研究有了長足的進(jìn)步。目前，應(yīng)用miR-122相關(guān)機制治療丙型肝炎的研究已走在這方面的前列[48]。但是，將miRNAs相關(guān)理論知識向臨床應(yīng)用轉(zhuǎn)化的工作才剛剛起步，還有許多問題需要解決。首先，由于缺乏大量臨床標(biāo)本支持，miRNAs在腫瘤基因治療和診斷中的敏感性和特異性有待進(jìn)一步驗證。其次，應(yīng)用miRNAs和化療、放療等現(xiàn)有的臨床治療手段的聯(lián)合治療策略尚停留在細(xì)胞和動物實驗階段，有待進(jìn)一步發(fā)展。另外，安全有效的miRNAs載體還需要大量研究進(jìn)一步評估。在不久的將來，隨著轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)的進(jìn)一步發(fā)展，miRNAs作為腫瘤基因治療的靶點將有廣闊的應(yīng)用前景。

參考文獻(xiàn)

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收稿日期：（2015-02-26）

通訊作者**簡介:殷保兵，男，復(fù)旦大學(xué)附屬華山醫(yī)院外科副教授，碩士生導(dǎo)師，醫(yī)學(xué)博士。擅長肝、膽、胰良、惡性腫瘤、膽道結(jié)石以及外科各種疑難雜癥的診治，主攻腹腔鏡肝膽微創(chuàng)手術(shù)。E-mail:yinbaobing@126.com