張軍艷(湖北省十堰市中醫(yī)醫(yī)院檢驗(yàn)科 442012)

?

抗-HCV聯(lián)合丙型肝炎病毒核酸檢測(cè)在丙型肝炎患者中的臨床價(jià)值

張軍艷(湖北省十堰市中醫(yī)醫(yī)院檢驗(yàn)科 442012)

目的 探討抗-HCV陽(yáng)性和抗-HCV陰性與丙型肝炎核酸(HCV-RNA)載量關(guān)系及其在丙型肝炎檢測(cè)中的應(yīng)用價(jià)值。方法 回顧性分析2010年9月至2013年10月該院236例丙型肝炎患者，抽取所有患者血清標(biāo)本，采用化學(xué)發(fā)光微粒子免疫法檢測(cè)抗-HCV，實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)法檢測(cè)HCV-RNA，并對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比較。結(jié)果 抗-HCV總檢出率為83.4%(197/236)，HCV-RNA總檢出率為87.1%(207/236)，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.00)，抗-HCV和HCV-RNA聯(lián)合檢測(cè)的準(zhǔn)確率為98.7%(233/236)。HCR-RNA陽(yáng)性和陰性患者ALT陽(yáng)性率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.00)。HCR-RNA和ALT相關(guān)系數(shù)為r=0.86(P=0.00)。結(jié)論 聯(lián)合檢測(cè)抗-HCV和HCV-RNA，可早期確診HCV感染患者。

抗-HCV； HCV核酸； 丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶； 聯(lián)合檢測(cè)

丙型肝炎病毒(HCV)以輸血和血制品的使用作為主要傳播途徑，HCV感染后臨床表現(xiàn)并不明顯，如不及時(shí)采取有效治療，患者極易發(fā)展成肝硬化，甚至肝癌[1-2]。因此，如何準(zhǔn)確快速診斷HCV患者，對(duì)HCV患者治愈率和生活質(zhì)量有很大影響[3]。選取本院236例丙型肝炎患者，以分析早期發(fā)現(xiàn)HCV患者的方法，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 回顧性分析本院2010年9月至2013年10月236例丙型肝炎患者，其中男122例，女114例，年齡15～83歲，平均年齡(45.25±3.48)歲。其中24例患者表現(xiàn)為感冒發(fā)燒、體虛、惡心、嘔吐、肌肉痛、頭昏、頭痛、腹痛，而且常有黃疸。按照中華醫(yī)學(xué)會(huì)肝病學(xué)分會(huì)和中華醫(yī)學(xué)會(huì)傳染病與寄生蟲(chóng)病學(xué)分會(huì)發(fā)布的《丙型肝炎防治指南》診斷標(biāo)準(zhǔn)，明確臨床診斷。

1.2 試劑與儀器

1.2.1 儀器 貝克曼DXC800全自動(dòng)生化分析儀，最大測(cè)試速度為每小時(shí)1 440測(cè)試。測(cè)定原理：離子選擇性電極(ISE)法、比色法、速率法、糖氧化電極法、免疫透射比濁法、電導(dǎo)電極法、酶免疫法、終點(diǎn)法等。

1.2.2 試劑 丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)測(cè)定試劑盒，北京利德曼公司生產(chǎn)，產(chǎn)品性能結(jié)構(gòu)及組成試劑組成：*試劑1：L-丙氨酸(600 mmol/L)；乳酸脫氫酶(≥1.2 kU/L)；疊氮鈉(0.09%)*試劑2：a-酮戊二酸(90 mmol/L)；煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)為1.08 mmol/L；疊氮鈉(0.09%)，縮寫(xiě)：ALT，檢測(cè)方法：IFCC速率法。

1.3 檢測(cè)方法

1.3.1 抗-HCV的檢測(cè)方法 貝克曼DXC800全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血清中的抗-HCV，檢測(cè)試劑為Abbott 公司生產(chǎn)，HCV抗體測(cè)定免疫試劑盒(化學(xué)發(fā)光微粒子免疫檢測(cè)法)，產(chǎn)品批號(hào)：08013LI01，嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)上操作規(guī)范進(jìn)行，判斷標(biāo)準(zhǔn)為：S/CO 值大于或等于1.000。

1.3.2 HCV核酸的檢測(cè)方法 采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(FQ-PCR)檢測(cè)(廈門新創(chuàng)科技有限公司制作)。嚴(yán)格按試劑盒中說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。標(biāo)本在進(jìn)行PCR擴(kuò)增前要進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄。對(duì)數(shù)據(jù)相關(guān)性進(jìn)行分析，采用求對(duì)數(shù)法同時(shí)定量計(jì)算HCV-RNA的平均拷貝數(shù)。所用試劑檢測(cè)下限為小于80 Copies/mL。

1.3.3 ALT的檢測(cè)方法 采用生化方法，用貝克曼DX800全自動(dòng)生化分析儀結(jié)合ALT測(cè)定試劑盒進(jìn)行檢測(cè)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 使用SPSS17.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)數(shù)資料用百分率表示，使用χ2檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)設(shè)定為0.05，P<0.05說(shuō)明差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 抗-HCV和HCV-RNA檢出結(jié)果比較 抗-HCV(+)患者197例，檢出HCV-RNA171例，檢出率為89.5%；抗-HCV(-)患者39例，檢出HCV-RNA 36例，檢出率為92.3%?？?HCV總檢出率為83.4%(197/236)，HCV-RNA總檢出率為87.1%(207/236)，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.00)。抗-HCV和HCV-RNA聯(lián)合檢測(cè)的準(zhǔn)確率為98.7%(233/236)。

2.2 HCV-RNA和ALT關(guān)系 在HCV-RNA陽(yáng)性標(biāo)本中，ALT陽(yáng)性203例(98.0%)，ALT陰性4例(2.0%)。29例HCV-RNA陰性患者中，ALT陽(yáng)性0例，陰性率為100.0%；HCR-RNA陽(yáng)性和陰性患者ALT陽(yáng)性率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.00)。HCR-RNA和ALT相關(guān)系數(shù)為r=0.86 (P=0.00)。

2.3 抗-HCV和ALT關(guān)系 在抗-HCV(+)標(biāo)本中，ALT陽(yáng)性率為81.7%(161/197)，ALT陰性36例(18.2%)?？?HCV(-)標(biāo)本中，ALT陽(yáng)性26例(26/39，66.6%)?？?HCV陽(yáng)性組和陰性組ALT陽(yáng)性率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.07)。

3 討 論

人群中HCV感染檢出率為0.8%～5.2%，如不及時(shí)治療，約40%慢性HCV患者將發(fā)展為肝硬化，甚至肝癌[4-5]。為了提高患者治愈率和生活質(zhì)量，對(duì)早期HCV患者應(yīng)及早診斷與治療。但早期HCV患者在臨床癥狀及外在表現(xiàn)上并不明顯。因此，如何早期診斷HCV患者成為必先解決的問(wèn)題[6-7]。

抗-HCV是HCV感染或既往感染的指標(biāo)，不能作為HCV感染期的指標(biāo)，無(wú)法知曉體內(nèi)HCV病毒活動(dòng)及復(fù)制情況。在HCV感染早期即可檢測(cè)出血清中存在HCV-RNA，其靈敏度好，可作為HCV感染的可靠指標(biāo)[8-9]?？?HCV陽(yáng)性而HCV-RNA陰性是既往感染的征象，但抗-HCV陰性而HCV-RNA陽(yáng)性，可能有以下幾點(diǎn)原因：(1)HCV感染窗口期。HCV感染早期，病毒復(fù)制量大，RNA陽(yáng)性，但抗體仍未產(chǎn)生[10]；(2)HCV基因異源性高，抗-HCV檢測(cè)試劑盒不含有檢測(cè)基因的抗原，或試劑盒本身靈敏度造成[11]；(3)人類免疫缺陷病毒可攻擊感染者自身的免疫細(xì)胞，導(dǎo)致機(jī)體HCV抗體產(chǎn)生延遲或缺乏，出現(xiàn)抗-HCV假陰性[12]。導(dǎo)致HCV-RNA假陰性的原因主要是由于HCV為單鏈RNA病毒，自然界中廣泛存在的RNA酶能降解RNA[13-14]。

本研究結(jié)果表明，抗-HCV檢出HCV患者陽(yáng)性率為83.4%，HCV-RNA為87.1%。說(shuō)明采用單一檢測(cè)抗-HCV或HCV-RNA進(jìn)行丙型肝炎診斷時(shí)，無(wú)法完全確診患者。而聯(lián)合抗-HCV和HCV-RNA檢測(cè)方法，準(zhǔn)確率可達(dá)98.7%。Pereira等[9]和Calvaruso和Crani[10]的研究結(jié)果顯示，抗-HCV與HCV-RNA檢出HCV患者陽(yáng)性率分別為90.2%和91.5%，而當(dāng)結(jié)合兩種檢測(cè)方法后檢出率可達(dá)到99.8%，這與本結(jié)論基本相符。說(shuō)明聯(lián)合檢測(cè)可提高丙型肝炎的診斷率，同時(shí)也可以了解肝臟損傷的情況，具有十分重要的臨床治療和指導(dǎo)意義[15]。在207例HCV-RNA陽(yáng)性患者中，ALT陽(yáng)性患者為203例，占了98.0%，其相關(guān)系數(shù)為0.86(P<0.01)，說(shuō)明ALT與HCV 核酸之間有很大相關(guān)性[8]。

綜上所述，ALT與HCV-RNA間有極高的相關(guān)性，采用抗-HCV和HCV-RNA聯(lián)合檢測(cè)，能夠有效確診丙型肝炎患者，對(duì)早期診治和提高生活質(zhì)量有重要意義。

[1]劉昕陽(yáng)，李銳成，代瑛，等．HCV-RNA陽(yáng)性236例臨床與實(shí)驗(yàn)室特征分析[J]．陜西醫(yī)學(xué)雜志，2013，42(3)：359-360．

[2]曹翠明，王利麗．丙型肝炎病毒抗體陽(yáng)性者血清病毒載量與丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶相關(guān)性研究[J]．社區(qū)醫(yī)學(xué)雜志，2013，11(8)：37-39．

[3]陳丹丹，劉媛，姬旭慧，等．原發(fā)性肝癌發(fā)病影響因素的患者對(duì)照研究[J]．鄭州大學(xué)學(xué)報(bào):醫(yī)學(xué)版，2013，48(2)：249-253．

[4]林秀蓉，陳巧繪，林海．TaqMan-MGB探針對(duì)HCV基因的檢測(cè)及分型研究[J]．東南國(guó)防醫(yī)藥，2012，14(1)：20-22．

[5]陳瑞烈，賈永文，高勇，等．丙型肝炎病毒感染細(xì)胞模型的實(shí)驗(yàn)研究[J]．傳染病信息，2003，32(1)：8．

[6]彭劍淳，高博，王怡，等．雙熒光素酶標(biāo)記丙型肝炎病毒亞基因組復(fù)制子細(xì)胞模型的建立[J]．軍事醫(yī)學(xué)，2013，37(9)：681-684．

[7]成鍍，蔣永芳，肖新強(qiáng)，等．丙型肝炎病毒抑制DNA損傷修復(fù)相關(guān)基因生長(zhǎng)阻滯和DNA損傷誘生蛋白45α的表達(dá)[J]．中華肝臟病雜志，2012，20(11)：807-810．

[8]解瑩，謝晨．丙型肝炎病毒基因分型的研究進(jìn)展[J]．大連醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，32(4)：470-474．

[9]Pereira FM，Sant ′ana zarife MA，Gomes reis EA，et al.Indeterminate RIBA results were associated with the absence of hepatitis C virus RNA (HCV-RNA) in blood donors[J].Rev Soc Bras Med Trop，2014，47(1):12-17.

[10]Calvaruso V，Craxi A.2011 European association of the study of the liver hepatitis C virus clinical practice guidelines[J].Liver Int，2012，32(Suppl1):2-8.

[11]雷永良，紀(jì)勇平，吳麗雅，等．部分ELISA抗-HCV陰性和陽(yáng)性血清丙型肝炎抗體分片段檢測(cè)分析[J]．中國(guó)輸血雜志，2004，17(4)：252-253．

[12]周一炎，尚桂芳，楊立新，等．HCV核心抗原作為“窗口期”HCV感染標(biāo)志物的檢測(cè)[J]．中國(guó)輸血雜志，2004，17(3)：162-163．

[13]胡燕梅，孫燕燕，丁榮華，等．慢性丙型肝炎患者病毒基因型與IL-28B基因型分布[J]．實(shí)用肝臟病雜志，2013,16(6)：513-516．

[14]Mohammadali F，Pourfathollah AA.Changes in frequency of HBV，HCV，HIV and syphilis infections among blood donors in Tehran province 2005-2011[J].Arch Iran Med，2014，17(9):613-620.

[15]Klenerman P，Gupta PK.Hepatitis C virus:current concepts and future challenges[J].QJM，2012，105(1):29-32.

The clinical value of combined test of anti-HCV and HCV-RNA in patients with hepatitis C

ZHANGJun-yan

(DepartmentofClinicalLaboratory,TraditionalMedicineHospitalofShiyanCity,Shiyan,Hubei442012,China)

Objective To explore the relationship between the positive result of Hepatitis C virus antibody (anti-HCV),negative result of anti-HCV and HCV-RNA loads and its application in detecting patients with HCV.Methods A retrospective analysis was performed 236 patients with HCV from September 2010 to October 2013.The anti-HCV was detected by the method of Chemiluminescence Immunoassay.HCV-RNA was tested by real-time fluorescencequantitative polymerase chain reaction.Results The detection rate of anti-HCV was 83.4%(197/236)，and that of HCV-RNA was 87.1% (207/236),the difference in the two groups was statistical different(P=0.00).The accuracy rate of combined detection of Anti-HCV and HCV-RNA in diagnosis of HCV was 98.7%(233/236).The difference of alanine aminotransferase(ALT) level between the patients with positive result of HCV-RNA and patients with negative result of HCV-RNA was statistical significant (P=0.00)，HCR-RNA and ALT were positively correlated (r=0.86，P<0.05).Conclusion The combined detection of anti-HCV and HCV-RNA is value for early diagnosis for HCV.

hepatitis C virus antibody； hepatitis C virus RNA； alanine aminotransferase; combined detection

張軍艷，女，碩士，主管檢驗(yàn)師，主要從事醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)方法學(xué)與臨床研究。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.10.024

A

1672-9455(2015)10-1395-02

2014-10-01

2015-01-22)