包長(zhǎng)龍　薩茹拉　趙東鯤

[摘 要] 目的：測(cè)定阿日申-18中梔子苷的含量。方法：采用HPLC法，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動(dòng)相為乙腈-水（15∶85），檢測(cè)波長(zhǎng)為238nm，流速為1.0ml/min。結(jié)果：梔子苷在0.0650～0.8125μg/ml范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。梔子苷平均加樣回收率為101.7%，RSD為1.5%（n=9）。結(jié)論：該方法簡(jiǎn)便、靈敏，可用于制劑的質(zhì)量控制。

[關(guān)鍵詞] 阿日申-18；梔子苷；HPLC

[中圖分類號(hào)]R284.1 [文獻(xiàn)標(biāo)志碼] A [文章編號(hào)]1007-8517（2015）06-0013-02

阿日申-18是由楓香脂、冬葵果、決明子、黨參、草烏（制）、麻黃、苦參、黃精、梔子、文冠木、木香、五靈脂（制）、石菖蒲、訶子、川楝子、瞿麥、黑云香、人工麝香十八味藥組成的水丸，該方具有清熱、瀉火、涼血的功效[1-2]，可治療銀屑病、皮膚瘙癢、濕疹、癤腫、梅毒等各種皮膚病及風(fēng)濕病癥。該方主要成分之一梔子對(duì)本方臨床療效有重要作用，本文采用高效液相色譜法測(cè)定梔子中主要有效成分梔子苷的含量[3]。實(shí)驗(yàn)表明，該方法簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可有效的控制產(chǎn)品的質(zhì)量，可作為質(zhì)量控制的方法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Alltech高效液相色譜儀Series1500，UV201紫外檢測(cè)器，自動(dòng)進(jìn)樣器；TP-300超聲儀。

1.2 試藥 梔子苷對(duì)照品（批號(hào)：110749-200613，中國(guó)藥品生物制品檢定所提供）；阿日申-18（批號(hào)：080705、090616、090617）由內(nèi)蒙古通遼市蒙醫(yī)研究所制劑室提供。

2 方法和結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Phenomenex C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：乙腈-水（15∶85）；流速：1.0ml/min；進(jìn)樣量：10μl；柱溫：30℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：238nm。理論塔板數(shù)按梔子苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。

2.2 對(duì)照品溶液的制備 稱取梔子苷對(duì)照品16mg，精密稱定，置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml，置25ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得（制成每1ml含梔子苷30μg的溶液）。

2.3 樣品溶液的制備 取裝量差異項(xiàng)下的本品適量，研細(xì)，取約1.6g，精密稱定，置100ml碘量瓶中，加入甲醇25.0ml，稱定重量，超聲處理（功率160W，50kHz）30min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過。量取續(xù)濾液3.0ml，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。

2.4 陰性對(duì)照試驗(yàn) 按上述方法制備樣品溶液和對(duì)照品溶液。另取陰性樣品（按處方比例并以相同工藝制備的無梔子的樣品），按阿日申-18溶液制備法制得陰性對(duì)照溶液。分別精密吸取陰性溶液、阿日申-18溶液、對(duì)照品溶液各10μl，注入Alltech高效液相色譜儀Series1500，在同一色譜條件下進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果：陰性色譜圖中，在與梔子苷對(duì)照品及樣品阿日申-18色譜圖相同保留時(shí)間處無色譜峰出現(xiàn)，表明配方中的其他組分對(duì)阿日申-18中梔子苷的測(cè)定無干擾。

2.5 線性關(guān)系考察 精密吸取對(duì)照品溶液1、2、5、8、10、15、20、25μl分別進(jìn)樣，按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，以峰面積為縱坐標(biāo)（Y），以對(duì)照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)（X），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果梔子苷在0.3762～3.7620μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回歸方程為：Y=1.5E+6X+3692.7，r=0.99985。

2.6 精密度試驗(yàn) 精密量取梔子苷對(duì)照品溶液10μl，在上述色譜條件下連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定梔子苷峰面積，結(jié)果梔子苷峰面積的RSD（n=6）為1.2%。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取同一批樣品（批號(hào)：090616）6份，研細(xì)，按上述樣品制備方法制備樣品溶液，在上述色譜條件下進(jìn)行分析測(cè)定，測(cè)得每份樣品含量。結(jié)果梔子苷的平均含量（n=6）為2.11mg/g，RSD為0.1%。見表1。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液，分別于0、2、4、6、8、10、15、20h取樣10μl，按上述色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。RSD（n=6）為0.2%，表明供試品溶液20h內(nèi)穩(wěn)定。

2.9 加樣回收試驗(yàn) 取供試品（含量1.864mg/g）9份，各約0.8g，精密稱定，分別置9個(gè)具塞錐形瓶中，再分別在其中3個(gè)具塞錐形瓶中各精密加入濃度為0.1738mg/ml的梔子苷對(duì)照品甲醇溶液5ml（約相當(dāng)于供試品含有量的75%）及甲醇溶液20ml，另3個(gè)具塞錐形瓶中各精密加入上述對(duì)照品溶液12ml（約相當(dāng)于供試品含有量的100%）及甲醇溶液13ml，其余3個(gè)具塞錐形瓶中各精密加入上述對(duì)照品溶液16ml（約相當(dāng)于供試品含有量的125%）及甲醇溶液9ml，分別稱定重量，超聲處理30min，取出，再稱重，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過。各取續(xù)濾液10μl進(jìn)樣，測(cè)定每份含量，計(jì)算回收率，梔子苷平均回收率（n=6）為101.7%。RSD為1.5%。結(jié)果見表2。

2.10 樣品測(cè)定 按含量項(xiàng)下方法制備樣品溶液，在上述色譜條件下進(jìn)行測(cè)定，三批樣品的測(cè)定結(jié)果見表3。

3 討論

3.1 提取條件的優(yōu)化 根據(jù)文獻(xiàn)[4-5]，中藥梔子的梔子苷含量測(cè)定方法中，選用甲醇作為提取溶劑，故本研究也采用甲醇作為提取溶劑。分別對(duì)不同溶劑體積及不同超聲時(shí)間進(jìn)行了對(duì)比試驗(yàn)，最后得到最優(yōu)化的提取方法為：溶劑甲醇，加入量25ml，超聲處理30min。

3.2 檢測(cè)方法的優(yōu)點(diǎn) 本文中定量方法準(zhǔn)確、靈敏、專屬性強(qiáng)，可作為控制阿日申-18制劑質(zhì)量的檢測(cè)方法。

參考文獻(xiàn)

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