楊 群，韋啟鵬，周泉勇，唐艷強(qiáng)，萬明春，霍俊宏，劉林秀

（江西省農(nóng)科院畜牧獸醫(yī)研究所，江西南昌330200）

幾種豬瘟疫苗免疫效果對(duì)比研究

楊 群，韋啟鵬，周泉勇，唐艷強(qiáng)，萬明春，霍俊宏，劉林秀

（江西省農(nóng)科院畜牧獸醫(yī)研究所，江西南昌330200）

疫苗免疫是我國目前防控豬瘟最有效的手段，但是，我國如今豬瘟疫苗的生產(chǎn)廠家有幾十家，品種也多種多樣；因此，本文挑選目前市場(chǎng)占有率較高的兩種細(xì)胞苗和一種脾淋苗對(duì)同一批豬分四個(gè)組進(jìn)行免疫試驗(yàn)，隨后，檢測(cè)免疫當(dāng)天及免疫后7天、14天、21天、28天、35天、42天試驗(yàn)豬體內(nèi)的豬瘟抗體水平，從而了解免疫后一段時(shí)期內(nèi)豬體內(nèi)抗體水平的變化及比較不同疫苗之間的免疫效果。

豬瘟（Hog cholera，HC），又稱古典豬瘟（classical swine fever，CSF）是由豬瘟病毒（CSFV）引起的一種急性、熱性、高度接觸性的病毒性傳染病。以發(fā)病急、高熱稽留、小血管壁變性、全身泛發(fā)性小點(diǎn)狀出血及脾梗死等為主要特征。豬是豬瘟病毒的唯一自然宿主，傳染源主要來自病豬，而病后帶毒豬、潛伏期帶毒豬和隱性感染豬也均可成為傳染源。

在豬瘟的防制中，疫苗扮演著重要的角色，疫苗目前仍然是有利的武器，剔除豬只自身的原因，疫苗本身的效價(jià)高低是決定豬瘟免疫成敗的關(guān)鍵。低效價(jià)的疫苗免疫后豬體產(chǎn)生的抗體不足以抵抗野毒的侵襲，接種豬雖不發(fā)病，但成為終生帶毒、排毒的傳染源，給凈化豬群造成極大障礙，也是近年來溫和型、非典型豬瘟頻發(fā)的原因之一。所以目前許多豬場(chǎng)在豬瘟的防疫中，都往往采用加大免疫劑量來解決這一不足。目前市場(chǎng)上的豬瘟商品疫苗種類主要有細(xì)胞苗、組織苗和脾淋苗三種，不同疫苗種類及不同生產(chǎn)廠家之間的免疫效果也有差異，因此，在疫苗種類的選擇上也與豬瘟免疫效果密切相關(guān)。為了驗(yàn)證不同廠家豬瘟苗的免疫效果，本人通過用不同廠家生產(chǎn)的三種疫苗免疫同一批豬后用ELISA方法檢測(cè)不同時(shí)間豬體內(nèi)豬瘟抗體水平來比較彼此間的差異。

1 試驗(yàn)材料和方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 豬瘟疫苗

豬瘟細(xì)胞苗A（江西某生物制品廠，批號(hào)：20130511），簡(jiǎn)稱A苗；豬瘟細(xì)胞苗B（廣東某生物制品廠，批號(hào)：20130618），簡(jiǎn)稱B苗；豬瘟脾淋苗（福州某生物制品廠，批號(hào)：20130408），簡(jiǎn)稱C苗；免疫增強(qiáng)劑（福州某生物制品廠，批號(hào)：201304015）。

1.1.2 試驗(yàn)豬

在江西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院試驗(yàn)豬場(chǎng)選擇產(chǎn)仔日期相同4頭母豬，每窩各隨機(jī)挑選6頭仔豬，分為4個(gè)試驗(yàn)組，共計(jì)24頭，每頭豬都按順序打上耳標(biāo)，便于以后采血和記錄時(shí)區(qū)分不同豬只；4頭母豬都實(shí)行每年注射兩次豬瘟疫苗的統(tǒng)一免疫方式，劑量是每頭細(xì)胞苗8頭份。

1.1.3 檢測(cè)試劑

豬瘟抗體ELISA檢測(cè)試劑盒，由美國IDEXX公司生產(chǎn)。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 試驗(yàn)豬分組與免疫

將24頭仔豬分為4組，每頭豬在耳標(biāo)上標(biāo)上號(hào)碼，所有試驗(yàn)豬都在45日齡（2013年8月20日）首免，試驗(yàn)1組注射C苗1頭份，豬的耳標(biāo)為1～6號(hào)；試驗(yàn)2組注射A苗4頭份，豬的耳標(biāo)為7～12號(hào)；試驗(yàn)3組注射C苗1頭份+免疫增強(qiáng)劑0.5頭份，豬的耳標(biāo)為13～18號(hào)；試驗(yàn)4組注射B苗4頭份，豬的耳標(biāo)為19～24號(hào)。從試驗(yàn)當(dāng)天起每隔1周對(duì)試驗(yàn)豬采血1次，即從免疫當(dāng)天及免疫后7天、14天、21天、28天、35天、42天各檢測(cè)1次豬血清中豬瘟抗體，試驗(yàn)時(shí)間從2013年8月20日開始，至2013年10月11日結(jié)束，共計(jì)42天。

1.2.2 被檢血清采集

每次早晨用5毫升注射器對(duì)試驗(yàn)豬空腹進(jìn)行前腔靜脈采血，每頭3～5毫升，將血樣注入5毫升無菌真空采血管，采完后立即帶回所獸醫(yī)診斷實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行血清分離；分離方法就是將所采集的血樣置37℃恒溫箱中溫浴30分鐘，再經(jīng)每分鐘轉(zhuǎn)2000圈離心5分鐘，靜置后分離上層血清于0.5毫升EP管，-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.3 血清抗體檢測(cè)

按試劑盒說明書進(jìn)行操作；檢測(cè)結(jié)果用阻斷率表示，阻斷率大于或等于40％判斷為陽性，阻斷率小于30％判斷為陰性，阻斷率在30％至40％之間判斷為可疑。

2 結(jié)果與分析

對(duì)4個(gè)試驗(yàn)處理組進(jìn)行方差分析，結(jié)果F值=1.32，進(jìn)行F檢驗(yàn)，查F值表，F(xiàn)0.05（3，20）= 3.10，F(xiàn)0.01（3，20）=4.94；F值≥F0.05，表明四個(gè)試驗(yàn)組在21天抗體水平差異不顯著。

對(duì)4個(gè)試驗(yàn)處理組進(jìn)行方差分析，結(jié)果F值=2.29，進(jìn)行F檢驗(yàn)，查F值表，F(xiàn)0.05（3，20）= 3.10，F(xiàn)0.01（3，20）=4.94；所以F值≥F0.05，表明四個(gè)試驗(yàn)組在42天抗體水平差異不顯著。

3 小結(jié)與分析

3.1 各個(gè)試驗(yàn)組仔豬在注射豬瘟疫苗后，豬瘟抗體水平都呈現(xiàn)出先下降后上升的趨勢(shì)，這與豬瘟抗體水平消長(zhǎng)規(guī)律的理論一致，縱觀仔豬首免日齡的抗體水平檢測(cè)數(shù)據(jù)，可以發(fā)現(xiàn)其離散度很大，（抗體水平最高為80.1％，最低為20.0％）均勻度很差，造成這種現(xiàn)象的原因可能是接種時(shí)母源抗體過高，也可能是仔豬本身的免疫抑制。

3.2 4個(gè)試驗(yàn)組內(nèi)，試驗(yàn)1組、試驗(yàn)2組、試驗(yàn)4組的抗體水平至免疫5周后達(dá)頂峰，而后下降；而試驗(yàn)3組免疫至首免后50天一直呈現(xiàn)上升趨勢(shì)。其原因可能是疫苗與免疫增強(qiáng)劑共同作用可以緩解母源抗體對(duì)疫苗抗原的中和效應(yīng)，另一方面推斷可能是兔體脾淋成份對(duì)記憶性免疫應(yīng)答的促進(jìn)作用。

3.3 對(duì)4組仔豬21日齡及42日齡抗體平均值進(jìn)行方差分析，發(fā)現(xiàn)各處理組間差異不顯著，這與沈意興等報(bào)道的有所不同，其原因有待以后進(jìn)一步分析，但是，試驗(yàn)1組和試驗(yàn)3組的抗體保護(hù)率（抗體檢測(cè)值≥40％）明顯高于其他兩組的結(jié)果與他們的報(bào)道相符合；究其原因，可能是脾淋苗中的兔脾淋組織液含有某些免疫增強(qiáng)因子，能夠明顯增強(qiáng)活疫苗的免疫作用。