章文偉，譚秋生，任星宇，申明亮，李 玲，羅 敏，鄧才富，羅 舜

(重慶市藥物種植研究所，重慶 408435)

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墊江丹皮質(zhì)量影響因素分析

章文偉，譚秋生，任星宇，申明亮，李 玲，羅 敏，鄧才富*，羅 舜

(重慶市藥物種植研究所，重慶 408435)

目的：分析墊江丹皮乙醇浸出物、丹皮酚和芍藥苷含量的影響因素，為墊江丹皮的質(zhì)量控制提供參考依據(jù)。方法：采用2010版《中國藥典》一部“牡丹皮”標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)下規(guī)定方法測定稀乙醇浸出物含量，采用HPLC方法測定丹皮酚、芍藥苷含量。結(jié)果：所有墊江丹皮樣品均符合《中國藥典》2010版對丹皮的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求。栽培品種、生長土壤類型、采收時(shí)間均會(huì)影響墊江丹皮的內(nèi)在質(zhì)量。結(jié)論：白花單瓣品種的乙醇浸出物、芍藥苷含量在三種品種中最高，且其丹皮酚含量也較高。礦子黃泥中出產(chǎn)的丹皮乙醇浸出物和芍藥苷含量均最高，但其丹皮酚含量卻最低。9月初采收的丹皮乙醇浸出物、丹皮酚、芍藥苷含量均較高。傳統(tǒng)生產(chǎn)于9月上旬采挖丹皮暗合了科學(xué)道理。

墊江；丹皮；質(zhì)量；影響因素

牡丹(PaenoniasuffruticosaAndr.)別名丹皮，為毛莨科落葉小灌木，以根皮供藥用[1]。牡丹能清血熱、散瘀，治痛經(jīng)、衄血、潮熱、熱病發(fā)斑、發(fā)疹、吐血、癰腫?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)證明其有抗菌、催眠、鎮(zhèn)靜、降壓等功效，屬于常用中藥，《本草綱目》《中華藥典》對其均有記載[2]。重慶墊江牡丹栽培歷史悠久，墊江是原川丹皮的兩大產(chǎn)地(灌縣、墊江)之一。墊江所產(chǎn)牡丹皮具有根粗、肉厚、粉質(zhì)足、香味濃的特點(diǎn)，深受醫(yī)藥界和消費(fèi)者的好評(píng)，墊江丹皮由于其質(zhì)優(yōu)和獨(dú)有特點(diǎn)而習(xí)稱為墊丹皮。墊丹皮廣泛分布于明月山內(nèi)槽地帶海拔450～850m之間的石骨子土、礦子黃泥土和大土泥中，以墊江境內(nèi)的太平、澄溪、新民、桂溪、沙坪和長壽境內(nèi)的海棠、云臺(tái)等鄉(xiāng)鎮(zhèn)分布較為集中[3]。

近年來圍繞墊丹皮開展了丹皮酚含量變化、指紋圖譜等有關(guān)研究[4-8]，但到目前為止，缺乏對墊丹皮質(zhì)量影響因素的綜合研究。本文探討了墊丹皮栽培品種、生長土壤類型、采收時(shí)間對牡丹乙醇浸出物、丹皮酚、芍藥苷含量的影響，以期對墊丹皮的質(zhì)量影響因素進(jìn)行較為綜合的分析。

1 儀器、試劑與材料

島津LC-20AT高效液相色譜儀(含LCsoLution色譜處理軟件、CTO-20A柱溫箱、SIL-20A自動(dòng)進(jìn)樣器、SPD-M20A二極管陣列檢測器、CBM-20ALite系統(tǒng)控制器)；sartorius CPA225D型電子天平、METTLER AL104型電子天平、MoLecuLar標(biāo)準(zhǔn)智能型純水機(jī)、KQ3200DE型數(shù)控超聲波清洗器。DHG-9140A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱、HHS11-4型電子恒溫水浴鍋。

乙醇(95%分析純)：重慶川東化工(集團(tuán))有限公司，批號(hào)20120201；甲醇(色譜純) ：成都科龍化工，批號(hào)20130115；水為臨用現(xiàn)制的超純水；丹皮酚、芍藥苷對照品均購自中國食品藥品檢定研究院(批號(hào)分別為110708-200506、110736-201136)。

牡丹試驗(yàn)材料取自重慶墊江縣明月山丹皮GAP基地，該基地遠(yuǎn)離公路和工廠，灌溉水來自雨水。所有試驗(yàn)材料經(jīng)本所鄧才富副研究員鑒定為PaeoniasuffruticosaAndr.的根皮。采挖牡丹根部后，除去細(xì)根和泥沙，剝?nèi)「?，除去木心，曬干，粉碎后待測。

2 方法與結(jié)果

2.1 乙醇浸出物含量測定

取丹皮樣品2～4g，精密稱定，置于100～250mL錐形瓶中，精密加水50～100mL，密塞。按《中國藥典》2010版一部附錄ⅩA項(xiàng)下熱浸法測定，用乙醇作溶劑。以干燥品計(jì)算丹皮樣品中醇溶性浸出物的含量(%)。

2.2 丹皮酚、芍藥苷含量測定

2.2.1 對照品溶液制備 精密稱取丹皮酚對照品、芍藥苷對照品適量，加甲醇制成每1mL含丹皮酚256.10μg、芍藥苷49.84μg的混合溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液制備 取丹皮粉末0.25g，精密稱定，置于250mL具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇50mL，密塞，稱定重量，超聲處理(功率150W，頻率40kHz)30min，放冷，再稱定重量，用70%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻后過濾，取續(xù)濾液用0.45μm微孔濾膜濾過，即得供試品溶液。

2.2.3 色譜條件 Shim-pack VP-ODS色譜柱(4.6mm×250mm，5μm)；流動(dòng)相A為甲醇、B為水，梯度洗脫條件見表1，流速為1.0mL/min，柱溫為40℃，檢測波長丹皮酚為274nm、芍藥苷為230nm，進(jìn)樣量為10μL，記錄30min內(nèi)色譜圖。

表1 HPLC梯度洗脫條件 (%)

2.2.4 方法學(xué)考察 分別進(jìn)行精密度試驗(yàn)、穩(wěn)定性試驗(yàn)、重復(fù)性試驗(yàn)、加樣回收試驗(yàn)，結(jié)果均符合HPLC分析方法的要求。

(1)精密度試驗(yàn)。精密吸取同一對照品溶液10μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，采集各色譜圖并積分，計(jì)算峰面積RSD(%)，結(jié)果表明丹皮酚峰面積RSD為0.18%、芍藥苷峰面積RSD為0.65%，儀器精密度良好。

(2)穩(wěn)定性試驗(yàn)。精密吸取同一供試品溶液10μL，分別于0、12、24、36、48h進(jìn)樣，采集各色譜圖并積分，計(jì)算峰面積RSD(%)，結(jié)果表明丹皮酚峰面積RSD為0.23%、芍藥苷峰面積RSD為1.26%，樣品供試液在48h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

(3)重復(fù)性試驗(yàn)。取同一丹皮樣品粉末6份，每份0.25g，精密稱定，按照“2.2.2”項(xiàng)下方法制備，各取10μL進(jìn)樣，采集各色譜圖并積分，計(jì)算含量RSD(%)，結(jié)果表明丹皮酚含量RSD為2.91%、芍藥苷含量RSD為2.64%，樣品制備方法重現(xiàn)性良好。

(4)加樣回收試驗(yàn)。取已知丹皮酚和芍藥苷含量的同一丹皮樣品粉末6份，各0.25g，精密稱定，分別精密加入混合對照品溶液(丹皮酚0.503 6mg·mL-1、芍藥苷0.387 7mg·mL-1) 5.0mL，加入70%甲醇45mL，按照“2.2.2”項(xiàng)下方法制備，各取10μL進(jìn)樣，采集色譜圖并積分，計(jì)算丹皮酚、芍藥苷含量及其回收率(%)。結(jié)果表明丹皮酚平均回收率為95.72%，RSD為1.05% ；芍藥苷平均回收率為98.42%，RSD為1.37 % 。

2.3 墊江牡丹質(zhì)量影響因素分析

2.3.1 不同墊丹皮栽培品種質(zhì)量分析 墊丹皮主要有三個(gè)栽培品種，分別是紅花單瓣、紅花重瓣、白花單瓣。在秋季同時(shí)采收種植于同一地塊的三個(gè)品種樣品，處理完畢后分別測定乙醇浸出物含量、丹皮酚含量、芍藥苷含量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見圖1。

圖1 不同品種丹皮質(zhì)量指標(biāo)

從圖1可以看出，白花單瓣的乙醇浸出物含量、芍藥苷含量在三種品種中最高，且其丹皮酚含量也較高。以乙醇浸出物含量、芍藥苷含量、丹皮酚含量為指標(biāo)進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)，白花單瓣優(yōu)于其他兩個(gè)品種。紅花重瓣中芍藥苷含量、丹皮酚含量在三個(gè)品種中均最低。

2.3.2 不同生長土壤類型墊丹皮質(zhì)量分析 以分別種植在石骨子土、大土泥、礦子黃泥中的紅花重瓣丹皮為試驗(yàn)對象，考察不同生長土壤類型對丹皮內(nèi)在質(zhì)量的影響。同時(shí)采集樣品后進(jìn)行分析，試驗(yàn)結(jié)果見圖2。

圖2 不同生長土壤的丹皮質(zhì)量指標(biāo)

從圖2可以看出，礦子黃泥中出產(chǎn)的丹皮乙醇浸出物含量和芍藥苷含量均最高，但其丹皮酚含量卻最低。石骨子土出產(chǎn)的丹皮乙醇浸出物和芍藥苷含量在三個(gè)品種中最低。

2.3.3 不同采收期的墊丹皮質(zhì)量分析 選定同一試驗(yàn)地和同一丹皮品種，于不同時(shí)間采收樣品，進(jìn)行浸出物和有效成分含量分析。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見圖3。

圖3 不同采收時(shí)間的丹皮質(zhì)量指標(biāo)

為便于在同一個(gè)圖表中觀察采收時(shí)間對乙醇浸出物、丹皮酚、芍藥苷含量的影響趨勢，筆者將乙醇浸出物含量單位由百分含量改為每10g丹皮中乙醇浸出物的克數(shù)。從圖3可以看出，隨著采收時(shí)間的不同，乙醇浸出物含量和芍藥苷含量變化趨勢基本一致，呈現(xiàn)U形。而10月8日采收的樣品丹皮酚含量最高。9月上旬采收的丹皮其乙醇浸出物、丹皮酚、芍藥苷含量均較高，因此9月上旬采收可保證丹皮的用藥質(zhì)量，而墊丹皮的傳統(tǒng)采收期也正是9月，因此9月采收墊丹皮暗合了科學(xué)道理。

3 討論

所有墊江丹皮樣品均符合《中國藥典》2010版對丹皮的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求，即醇溶性浸出物含量均≥15.0%，丹皮酚含量均≥1.2%。

不同品種、生長土壤類型、采收時(shí)間均會(huì)影響墊江丹皮的質(zhì)量。從試驗(yàn)結(jié)果可以看出，白花單瓣這一品種的乙醇浸出物、芍藥苷含量在三個(gè)品種中最高，且其丹皮酚含量也較高。從質(zhì)量評(píng)價(jià)來講，白花單瓣是較優(yōu)的品種。礦子黃泥中出產(chǎn)的丹皮乙醇浸出物含量和芍藥苷含量均最高，但是其丹皮酚含量卻最低。9月初采收的丹皮乙醇浸出物、丹皮酚、芍藥苷含量均較高。因此，9月初采收丹皮可以保證丹皮的用藥質(zhì)量，生產(chǎn)活動(dòng)中于9月采收墊丹皮具有一定的科學(xué)道理。

[1] 國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典[M].一部.北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2010:160-161.

[2] 姜瀟.牡丹皮藥理作用的研究進(jìn)展[J].中國新醫(yī)藥,2004,3(8):110.

[3] 墊江縣醫(yī)藥管理局.墊江縣醫(yī)藥志[M].1985:44-45.

[4] 范俊安,于超,王繼生,等.重慶墊江牡丹皮丹皮酚含量動(dòng)態(tài)變化研究[J].中國藥房,2006,17(5):394-396.

[5] 范俊安,夏永鵬,邱宗蔭,等.重慶墊江牡丹HPLC指紋圖譜研究(Ⅰ)—不同因素的影響及牡丹皮最適宜種植條件選擇[J].中國藥房,2009,20(21):1667-1770.

[6] 張艷,范俊安,夏永鵬,等.重慶墊江牡丹HPLC指紋圖譜研究(Ⅱ)—原丹皮指紋圖譜[J].中國藥房,2009,20(33):2602-2605.

[7] 張艷,范俊安,夏永鵬,等.重慶墊江牡丹HPLC指紋圖譜研究(Ⅲ)—刮丹皮指紋圖譜[J].中國藥房,2010,21(21):238-241.

[8] 范俊安,張艷,夏永鵬,等.重慶墊江牡丹HPLC指紋圖譜研究(Ⅳ)—不同部位的比較及其鑒別意義[J].中國藥房,2010,21(23):2157-2159.

(責(zé)任編輯：尹晨茹)

2014-09-15

重慶市衛(wèi)生計(jì)生委中醫(yī)藥科技項(xiàng)目(渝衛(wèi)中醫(yī)藥2011-1-12)

章文偉(1976-)，男，重慶市藥物種植研究所副研究員，研究方向?yàn)橛瀹a(chǎn)道地藥材質(zhì)量分析與評(píng)價(jià)。

鄧才富(1971-)，男，重慶市藥物種植研究所副研究員，研究方向?yàn)樯鷳B(tài)環(huán)境與藥材質(zhì)量評(píng)價(jià)。

R284.1

A

1673-2197(2015)02-0013-03

10.11954/ytctyy.201502006