陶 娜(遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院,貴州 遵義 563000)

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夏枯草醇提物對(duì)急性肝損傷大鼠的保護(hù)作用

陶 娜
(遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院,貴州 遵義 563000)

目的：通過大鼠急性肝損傷模型,對(duì)夏枯草醇提物(Prunella vulgaris ethanol extracts，PVEE)的保肝作用進(jìn)行探討。方法：將SD大鼠48只隨機(jī)分為正常組、模型組、陽性對(duì)照組、PVEE高劑量組、PVEE中劑量組、PVEE低劑量組,每組8只,給藥后16h處死取肝臟,測(cè)定肝臟病理學(xué)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、超氧化物岐化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)。結(jié)果：經(jīng)藥物處理后,陽性對(duì)照組與PVEE給藥組肝損傷有不同程度改善；與模型組比較,陽性對(duì)照組、PVEE給藥組的ALT、AST顯著下降(P<0.05或P<0.01)，SOD、GSH-Px顯著上升,MDA顯著下降(P<0.05或P<0.01)。結(jié)論：PVEE對(duì)CCl4引起的肝損傷大鼠具有一定的保護(hù)作用。

急性肝損傷；夏枯草；乙醇提取物

肝損傷是因病毒感染、飲酒過量、放射性損傷等多方面因素共同影響,致使肝臟出現(xiàn)病變反應(yīng)。隨著近幾年來肝損傷病例的不斷攀升,有效防治成為了當(dāng)前國內(nèi)外研究的重點(diǎn)和熱點(diǎn)課題。有報(bào)道指出,氧化應(yīng)激是導(dǎo)致肝損傷的主要機(jī)制[1]。夏枯草(PrunellavulgarisL.)是我國一味傳統(tǒng)中草藥,具有清火明目、軟堅(jiān)散結(jié)等功效,現(xiàn)代藥理學(xué)研究證實(shí)夏枯草具有抗菌、降糖、抗炎、降壓、抗病毒、抗腫瘤及活血化瘀等功效[2]。但目前關(guān)于夏枯草對(duì)肝損傷的研究較少,特別是有關(guān)夏枯草提取物對(duì)急性肝損傷的保護(hù)作用還未有研究報(bào)道。因此，為進(jìn)一步了解夏枯草保肝的功效,本研究通過四氯化碳誘導(dǎo)大鼠急性肝損傷模型,對(duì)夏枯草乙醇提取物(Prunella vulgaris ethanol extracts，PVEE)保肝作用進(jìn)行探討，為夏枯草的臨床應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

自第三軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心購入SD大鼠48只,均為雄性,體重為180～220g。常規(guī)條件下飼養(yǎng)1周后可納入實(shí)驗(yàn)。

1.2 材料及試劑

1.2.1 試劑 四氯化碳購自重慶市九龍化學(xué)試劑廠,乙醇購于重慶川東化工(集團(tuán))有限公司,丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(alanine transaminas,ALT) 、門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶 (aspartate aminotransferas,AST) 、谷胱甘肽過氧化物酶 (glutathione peroxidase,GSH-PX) 、 超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛 (malondialdehyde,MDA) 均購自南京建成生物工程研究所,花生油市購。

1.2.2 夏枯草醇提物制備 夏枯草的干燥果穗以10倍量70%的乙醇回流提取2次,每次5h,合并提取液,然后加熱回流蒸餾收取夏枯草浸膏,浸膏經(jīng)一系列萃取蒸餾干燥等過程獲得夏枯草提取物。

1.3 儀器與設(shè)備

TU-1810紫外可見分光光度計(jì)(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司)、MODULYOD-230冷凍干燥機(jī)(Thermoelectron corporation)、TU-1810紫外可見分光光度計(jì)(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司)等。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 建模、分組與給藥 將48只大鼠隨機(jī)分為6組,每組8只,分別設(shè)定為正常組、模型組、陽性對(duì)照組(甘利欣22.5mg/kg)、PVEE高劑量組(PVEE 1.0g/kg)、PVEE中劑量組(0.5g/kg),PVEE低劑量組(0.25g/kg)。PVEE三個(gè)劑量組與陽性對(duì)照組大鼠提前預(yù)防性給藥6天,正常組運(yùn)用蒸餾水行6天灌胃。第6日給藥后1h,模型組、PVEE三個(gè)劑量組、陽性對(duì)照組經(jīng)腹腔注入0.2mL·100g-1CCl4,完成急性肝損傷模型。禁止飲食,16h后處死取肝臟。

1.4.2 樣本收集與檢測(cè)指標(biāo) 取肝左葉行病理組織學(xué)檢測(cè)；分離血清,測(cè)定AST、ALT含量；取肝右葉組織制作成肝均漿(10%),取上清液,測(cè)定SOD、MDA、GSH-Px含量。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠血清肝損傷病理學(xué)測(cè)定結(jié)果

正常組8只大鼠肝損傷程度均為0級(jí)；模型組8只大鼠肝損傷程度：6只為3級(jí),2只為2級(jí)；陽性對(duì)照組8只大鼠肝損傷程度：1只為3級(jí),4只為2級(jí),1只為1級(jí)；PVEE高劑量組8只大鼠肝損傷程度：5只為3級(jí),2只為2級(jí),1只為1級(jí)；PVEE中劑量組8只大鼠肝損傷程度：3只為3級(jí),4只為2級(jí),1只為1級(jí)；PVEE低劑量組8只大鼠肝損傷程度：1只為3級(jí),5只為2級(jí),2只為1級(jí)。

2.2 各組大鼠血清AST、ALT測(cè)定結(jié)果

模型組與正常組比較,ALT、AST測(cè)定結(jié)果均表現(xiàn)為顯著上升(P<0.01)；陽性對(duì)照組、PVEE三個(gè)劑量組與模型組比較,ALT、AST測(cè)定結(jié)果均表現(xiàn)為顯著下降(P<0.05或P<0.01),見圖1。

2.3 各組大鼠血清SOD、MDA、GSH-Px測(cè)定結(jié)果

模型組與正常組比較,SOD與GSH-Px表現(xiàn)為顯著下降(P<0.01)；陽性對(duì)照組、PVEE三個(gè)劑量組與模型組比較,SOD與GSH-Px均表現(xiàn)為顯著上升(P<0.05或P<0.01)；模型組與正常組比較,MDA表現(xiàn)為顯著上升(P<0.01)；陽性對(duì)照組、PVEE3個(gè)劑量三組與模型組比較,

MDA均表現(xiàn)為顯著下降(P<0.05),見表1。

圖1 PVEE對(duì)血清AST、ALT的影響

注：與模型組比較,*P<0.05,**P<0.01；與正常組比較,##P<0.01。

表1 PVEE對(duì)急性肝損傷大鼠SOD、MDA、GSH-Px的影響

組別劑量(mg/kg)SOD(U/mgprot)MDA(nmol/mgprot)GSH-Px(U/mgprot)正常組-154.57±22.182.51±0.57179.61±23.25模型組-78.61±12.51##5.65±0.78##76.51±12.64##陽性對(duì)照組甘利欣22.5mg/kg143.25±19.57**3.45±0.81*101.57±16.17*PVEE低劑量組PVEE62.5mg/kg95.31±17.14*3.85±0.78*97.85±19.58*PVEE中劑量組PVEE125mg/kg112.65±18.51**3.47±1.25*128.15±20.67*PVEE高劑量組PVEE250mg/kg129.21±15.57**3.51±1.17*155.24±21.24*

注：與模型組比較,*P<0.05,**P<0.01；與正常組比較,##P<0.01。

2.4 各組大鼠肝組織病理學(xué)變化

根據(jù)病理學(xué)觀測(cè)結(jié)果,正常組大鼠肝組織的排列非常整齊,并且排列非常規(guī)則有序(見圖2A)；模型組大鼠肝細(xì)胞表現(xiàn)為細(xì)胞縮小、胞漿疏松,并且呈現(xiàn)為點(diǎn)塊狀壞死,特別是肝小葉結(jié)構(gòu)的變化最為嚴(yán)重(見圖2B)；PVEE高、中、低劑量三組以及陽性對(duì)照組則病變程度和范圍均有相應(yīng)程度的改善(見圖2C、D、E、F)。陽性對(duì)照組的病變改善程度和范圍好于PVEE三個(gè)組。PVEE高、中、低組病變改善效果比較無顯著差異。

圖2 各組大鼠肝組織病理學(xué)變化

3 討論

我國是一個(gè)有著五千年文化的文明國家,其豐富的天然資源,給我們帶來諸多藥物資源,造福了歷代中國人。中草藥作為我國特有的藥物資源,其取材方便、資源豐富、價(jià)格低廉,使其一直延續(xù)至今。夏枯草性味苦寒,是一味具有散結(jié)解毒、清肝明目功效的中草藥,含有非常豐富的活性化學(xué)成分。有報(bào)道發(fā)現(xiàn)[3],夏枯草合劑可有效改善D-氨基半乳糖+脂多糖、CCl4等引起的肝損傷。因此,本文在實(shí)驗(yàn)中通過動(dòng)物模型,對(duì)PVEE的保肝作用進(jìn)行探討。研究結(jié)果顯示,經(jīng)CCl4處理后模型組大鼠肝臟血清AST、ALT顯著上升；另病理學(xué)測(cè)定結(jié)果顯示,模型組大鼠肝臟損傷程度非常嚴(yán)重,6只為3級(jí),2只為2級(jí)。相較于模型組,PVEE三組大鼠AST、ALT表現(xiàn)為顯著下降,且病理學(xué)結(jié)果顯示,肝臟受損程度均有不同程度的改善。這充分表明,PVEE對(duì)因CCl4致急性肝損傷的大鼠具有一定的保肝效果。

當(dāng)CCl4進(jìn)入到機(jī)體之后,可引發(fā)一系列的反應(yīng),在這個(gè)過程中,會(huì)導(dǎo)致抗氧化物大量消耗,引起機(jī)體氧化應(yīng)激狀態(tài)。而在CCl4致肝損傷的過程中,氧化應(yīng)激是最主要的反應(yīng),此時(shí)抗氧化系統(tǒng)與氧化系統(tǒng)失衡,引起組織受損[4]。SOD、GSH-Px可充分反映機(jī)體氧自由基的清除能力,體現(xiàn)細(xì)胞膜的功能和結(jié)構(gòu)的完整性。本研究中,相較于正常組,模型組的SOD、GSH-Px表現(xiàn)為顯著下降,MDA表現(xiàn)為顯著上升,表明CCl4可致使大鼠出現(xiàn)急性肝損傷。PVEE三組與模型組相比,SOD、GSH-Px表現(xiàn)為顯著上升,MDA表現(xiàn)為顯著下降,表明PVEE在促進(jìn)SOD、GSH-Px活性,控制MDA活性上具有顯著效果。有文獻(xiàn)報(bào)道夏枯草提取物含有許多復(fù)雜的化學(xué)成分,包括糖類、三萜類( 熊果酸、齊墩果酸) 、有機(jī)酸類、香豆素類、黃酮類(木樨草素、蘆丁、異葒草素和木樨草苷)、揮發(fā)油類等,而其中的黃酮類物質(zhì)具有很強(qiáng)的抗氧化作用。因此,以上作用可能與PVEE中含量較豐富的黃酮類物質(zhì)有關(guān)[5,6]。由此可知,PVEE可有效改善過脂質(zhì)過氧化損傷,強(qiáng)化肝臟的抗氧化功能,進(jìn)而起到有效的肝臟保護(hù)作用。

[1] 國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典[S].二部.北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005:198.

[2] 宋昊,朱璟,金梅花,等.祁州漏蘆不同溶劑提取物對(duì)急性肝損傷模型小鼠的保護(hù)作用[J].中國藥房,2014,24(3):205-208.

[3] 章圣朋,鄧子煜,黃成,等.夏枯草總?cè)茖?duì)四氯化碳致急性肝損傷大鼠的保護(hù)作用[J].安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2012,47(9):1054-1058.

[4] 楊亞軍,李慶耀,梁生林,等.車前草總?cè)茖?duì)四氯化碳致小鼠肝損傷的保護(hù)作用[J].中成藥,2012,34(1):140-142.

[5] 張淼,董寶婧,苗芳,等.夏枯草提取物的抗氧化活性[J].草業(yè)科學(xué),2012,29(9)：1477-1481.

(責(zé)任編輯：魏 曉)

2015-03-23

陶娜(1984-),女,遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院藥師,研究方向?yàn)樾难芗膊∷幚怼?/p>

R285.5

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1673-2197(2015)15-0020-02

10.11954/ytctyy.201515007