陳嬌婷, 溫慧玲, 黃 浩,羅國安，2(.贛南醫(yī)學(xué)院 藥學(xué)院，江西 贛州34000；2.清華大學(xué)分析中心，北京 00084)

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三七總皂甙磷脂復(fù)合物制備研究

陳嬌婷1, 溫慧玲1, 黃 浩1,羅國安1，2
(1.贛南醫(yī)學(xué)院 藥學(xué)院，江西 贛州341000；2.清華大學(xué)分析中心，北京 100084)

目的：制備三七總皂甙磷脂復(fù)合物，并研究其理化性質(zhì)。方法：采用溶劑揮發(fā)法制備三七總皂甙磷脂復(fù)合物，利用紫外光譜法、差示掃描量熱分析法對(duì)所得的磷脂復(fù)合物進(jìn)行鑒定；測定磷脂復(fù)合物中三七總皂甙的含量；測定不同pH體系中三七總皂甙及其磷脂復(fù)合物的表觀油水分配系數(shù)。結(jié)果與結(jié)論：復(fù)合物在不同pH的正辛醇/水系統(tǒng)中，表觀油水分配系數(shù)與三七總皂甙有較大差異，油水分配性能顯著改善。

三七總皂甙：磷脂復(fù)合物；含量測定

三七為五加科人參屬植物[1]，始載于《本草綱目》，為常用傳統(tǒng)中藥之一，主產(chǎn)于云南和廣西，是傳統(tǒng)名貴中藥材。

三七性平，味甘，微苦，含有多種類型的化學(xué)成分，藥理作用廣泛，具有化瘀止血、活血定痛之功。三七對(duì)中樞神經(jīng)有鎮(zhèn)痛作用，對(duì)缺血性腦損傷有保護(hù)作用，對(duì)心血管系統(tǒng)具有改善心肌缺血狀態(tài)、止血等作用[2-5]。已有研究表明[6]：三七的主要成分為三七總皂甙，Rb1和Rg1是人參屬植物所共有的成分，且含量最高，而Rl是三七特征皂甙成分，但其在三七生藥中含量很低，因此本文主要以三七皂甙Rg1和Rb1作為研究對(duì)象。三七皂甙Rg1和Rb1單體Caco-2細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)透過系數(shù)(Papp)極低(1×10-7～1×10-8cm/s)，黏膜透過性差，三七皂苷Rg1和Rb1的大鼠絕對(duì)生物利用度分別為0.7l%和3.29%，口服吸收差[7]。因此，其屬于口服難吸收成分，而且根據(jù)藥物溶解性及胃腸道滲透性可將其歸為BcsⅢ或Ⅳ類。

藥物磷脂復(fù)合物是將藥物與磷脂在適宜條件下進(jìn)行復(fù)合得到的一類物質(zhì)。天然活性成分磷脂復(fù)合物的理化性質(zhì)和生物藥劑學(xué)性質(zhì)較原化合物均有不同程度的改變,通過與磷脂復(fù)合形成載體系統(tǒng)或前體藥物,可改善藥物經(jīng)胃腸道或經(jīng)皮吸收,故可獲得較高的血藥濃度,且藥物在體內(nèi)消除變慢,生物利用度顯著提高[8]。為了提高三七總皂甙的生物利用度,本實(shí)驗(yàn)制備了三七總皂甙磷脂復(fù)合物,并對(duì)其性質(zhì)進(jìn)行了研究,為三七總皂甙的綜合開發(fā)利用建立一定的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

1200型高效液相色譜儀(Agilent公司)；UV-2550型紫外分光光度計(jì)(日本島津公司)；NETZSCHSTA499綜合熱分析儀(德國)。

1.2 試藥

三七總皂甙(昆明雙星科技開發(fā)有限公司提供)；乙腈(色譜純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)；超純水(實(shí)驗(yàn)室自制)；所用其他試劑均為AR級(jí)。

2 方法與結(jié)果

2.1 三七總皂甙磷脂復(fù)合物制備

利用三七總皂甙脂溶性差，不溶于四氫呋喃,而磷脂和三七總皂甙磷脂復(fù)合物均易溶于四氫呋喃的特性, 按摩爾比1∶2的比例將三七總皂甙和磷脂后混勻，磁力攪拌至澄明，減壓蒸發(fā)除去反應(yīng)溶劑,加入適量四氫呋喃充分溶解其中的剩余物質(zhì),然后進(jìn)行抽濾, 收集沉淀物。再用少量四氫呋喃洗滌沉淀物,再次減壓蒸干，收集沉淀物, 減壓干燥24h后稱重,即得未與磷脂復(fù)合的三七總皂甙。

2.2 三七總皂甙磷脂復(fù)合物復(fù)合率測定

三七總皂甙初始投藥量與沉淀量的差值即為與磷脂復(fù)合的三七總皂甙的量,通過下式可計(jì)算出三七總皂甙與磷脂的結(jié)合百分率(M):

M=(A-B) /A×100%

其中A為三七總皂甙的初始投藥量；B為沉淀量。

計(jì)算得三七總皂甙磷脂復(fù)合物的復(fù)合率為98.3%，表明工藝可行。

2.3 三七總皂甙磷脂復(fù)合物光譜學(xué)分析

取一定量的三七總皂甙、磷脂、三七總皂甙與磷脂的物理混合物及三七總皂甙磷脂復(fù)合物,分別對(duì)其進(jìn)行紫外、差示掃描量熱分析。

2.3.1 UV掃描 以體積分?jǐn)?shù)為75%乙醇做溶劑進(jìn)行紫外檢測,結(jié)果表明, 三七總皂甙、磷脂、三七總皂甙磷脂混合物和三七總皂甙磷脂復(fù)合物的紫外圖譜相同,最大吸收峰均在197nm處,只是復(fù)合物的吸光度明顯比前兩種小,表明磷脂復(fù)合物中三七總皂甙發(fā)色基團(tuán)的結(jié)構(gòu)未發(fā)生變化。由于磷脂的極性鍵與三七總皂甙發(fā)生了較強(qiáng)的相互作用,導(dǎo)致其吸光度減小了。

2.3.2 差示掃描量熱(DSC)分析 分別稱取三七總皂苷、磷脂、三七總皂苷與磷脂物理混合物及三七總皂甙磷脂復(fù)合物適量，置淺鋁皿中，程序升溫，升溫速度10℃/min，20～500℃進(jìn)行掃描，N2流速0.2mL/min，差示掃描量熱結(jié)果見圖1，可見三七總皂甙與磷脂物理混合物相變溫度圖為兩種物質(zhì)的疊加。形成復(fù)合物后,相變溫度降低,出現(xiàn)此現(xiàn)象可能是三七總皂甙的極性基團(tuán)與磷脂的極性基團(tuán)部分發(fā)生分子間相互作用，磷脂的兩條長脂肪酸鏈對(duì)三七總皂甙進(jìn)行包裹，使其高度分散于磷脂中，進(jìn)而改變了藥物相變溫度，使其特征峰明顯改變，這也證明形成了復(fù)合物，三七總皂甙磷脂復(fù)合物不同于其物理混合物。

2.4 三七總皂甙磷脂復(fù)合物中三七總皂甙含量測定

色譜條件：色譜柱：Kromasil C18(4.6mm×250mm，5μm)；流速：1.00mL/min；檢測波長：197nm；柱溫：室溫；進(jìn)樣量：20μL。采用二元梯度洗脫：A相為乙腈，B相為水，梯度洗脫:0min→5min→20min→45min→67min→82min；流動(dòng)相A∶B比例為10∶90，20∶80，35∶65，43∶57，58∶42，75∶25。

圖1 三七總皂苷(A)、磷脂(B)、三七總皂苷與磷脂物理混合物(C)、三七總皂甙磷脂復(fù)合物(D)的DSC掃描

2.5 三七總皂甙磷脂復(fù)合物油水分配系數(shù)的測定

藥物的脂溶性與其在胃腸道的滲透性密切相關(guān)，因此通過測定藥物及其磷脂復(fù)合物在不同體系中的油水分配系數(shù)，可以描述藥物脂溶性大小。

采用搖瓶法測定，分別量取pH為2、3、4、5、6的水20mL，置磨口三角瓶中，各2份，分別加入適量的三七總皂甙及其磷脂復(fù)合物，25℃振搖12h至溶解平衡，移至離心管中，3 000r·min-1離心20min。取上層液10mL，置磨口三角瓶中，分別加入正辛醇10mL，25℃振搖至溶解平衡(預(yù)試驗(yàn)表明平衡時(shí)間為24h)，3 000r·min-1離心20min。分別量取水相和正辛醇相2mL置10mL量瓶中，甲醇定容后測定，三七總皂甙及其磷脂復(fù)合物正辛醇/水分配系數(shù)測定結(jié)果見表1。

表1 三七總皂甙及其磷脂復(fù)合物正辛醇/水分配系數(shù)測定

從表1可以看出，復(fù)合物對(duì)于三七總皂甙在正辛醇中的溶解度提高了50多倍，在水中的溶解度提高了4倍多，P值提高10倍多。結(jié)果表明，磷脂能有效地提高三七總皂甙的正辛醇/水表觀分配系數(shù)，提高了三七總皂甙的溶解性能。

3 討論

三七總皂甙磷脂復(fù)合物在正辛醇/水系統(tǒng)中進(jìn)行表觀油水分配系數(shù)的測定，結(jié)果顯示藥物形成磷脂復(fù)合物后使藥物的脂溶性得到了顯著性提高。這可能是因?yàn)椋喝呖傇磉芭c磷脂的極性基團(tuán)發(fā)生了較強(qiáng)的相互作用，而磷脂的兩個(gè)長鏈脂肪酸不參與復(fù)合反應(yīng)，可以自由移動(dòng)，包裹磷脂的極性部分形成一個(gè)親脂性的表面，使復(fù)合物的脂溶性較原料藥顯著提高。

本文制備的三七總皂甙磷脂復(fù)合物很好地解決了該藥物脂溶性差的問題，同時(shí)該復(fù)合物還可以作為制劑中間體制備微丸等固體、液體制劑，為三七總皂甙制劑的開發(fā)提供了新的思路。

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(責(zé)任編輯：魏 曉)

Preparation of Total Saponins of Panax notogieng Phospholipid Complex

Chen Jiaoting1,Wen Huiling1,Huang Hao1,Luo Guoan1，2
(1.Gannan Medical University, Ganzhou 341000，China;2.Analysis Center,Tsinghua University, Beijing 100084，China)

Objective:To prepare a total saponins of panax notogieng phospholipid complex. Methods:Total saponins of panax notogieng phospholipid complex was prepared by solvent evaporation. It was analyzed by ultraviolet spectroscopy (UVS)，differential scanning calorimetry (DSC)．The content of total saponins of panax notogieng in the phospholipid complex was determined and the apparent oil-waterpartition coefficients of phospholipid complex were also examined in different systems．Results and Conclusions:The apparent partition coefficients in different systems were significantly different among the complex and bulk drug．

Total Saponins of Panax Notogieng; Phospholipid Complex; Content Determination

2015-03-17

陳嬌婷(1980-)，女，贛南醫(yī)學(xué)院講師，研究方向?yàn)樗幬镄聞┬团c新技術(shù)。

R284

A

1673-2197(2015)15-0023-03

10.11954/ytctyy.201515009