劉欣欣，楊昭婷，王麗強(qiáng)，玄延花＊

（1.延邊大學(xué)醫(yī)學(xué)院2013級(jí)預(yù)防醫(yī)學(xué)專業(yè)，吉林延吉133002；2.延邊大學(xué)醫(yī)學(xué)院病理學(xué)教研室；3.吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院內(nèi)鏡中心）

PDGFRα和PDGFRβ在食管鱗癌中的表達(dá)及臨床病理學(xué)意義

劉欣欣1，楊昭婷2，王麗強(qiáng)3，玄延花2＊

（1.延邊大學(xué)醫(yī)學(xué)院2013級(jí)預(yù)防醫(yī)學(xué)專業(yè)，吉林延吉133002；2.延邊大學(xué)醫(yī)學(xué)院病理學(xué)教研室；3.吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院內(nèi)鏡中心）

目的觀察血小板衍生生長(zhǎng)因子受體－α（platelet－derived growth factor receptor－α，PDGFRα）和血小板衍生生長(zhǎng)因子受體－β（platelet－derived growth factor receptor－β，PDGFRβ）在食管鱗癌組織中的表達(dá)，探討其在食管鱗癌發(fā)生中的表達(dá)以及與臨床病理特征及患者預(yù)后的相關(guān)性。方法 采用免疫組化EnVision法檢測(cè)PDGFRα及PDGFRβ蛋白在131例食管鱗癌組織中的表達(dá)，分析二者的表達(dá)與患者年齡、性別、腫瘤大小、分化程度、T分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、TNM分期、微血管密度、間質(zhì)是否活化、CD68、復(fù)發(fā)、化療、放療情況和生存率的關(guān)系。結(jié)果 PDGFRα和PDGFRβ主要在食管鱗癌間質(zhì)的成纖維細(xì)胞和炎癥細(xì)胞中表達(dá)。PDGFRα在食管鱗癌活化的間質(zhì)組織中的表達(dá)率明顯高于未活化間質(zhì)組織（P＜0.05）。PDGFRβ在低分化的食管鱗癌組織中陽性表達(dá)率明顯高于高分化和中分化組織（P＜0.05）；在進(jìn)展期（T2－4）組織中的表達(dá)率明顯高于早期鱗癌組織（P＜0.01）；在活化的間質(zhì)組織中的陽性表達(dá)率明顯高于未活化間質(zhì)組織（P＜0.05）。PDGFRα（P＜0.01）和PDGFRβ（P＜0.05）呈陽性的食管鱗癌患者生存率分別低于陰性者。PDGFRα和PDGFRβ蛋白在食管鱗癌組織中的表達(dá)與患者年齡、性別、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、TNM分期、微血管密度、CD68、復(fù)發(fā)、化療和放療情況均無相關(guān)。結(jié)論 PDGFRα和PDGFRβ與食管鱗癌間質(zhì)的活化、腫瘤分化程度和進(jìn)展以及患者的生存率密切相關(guān)。因此，PDGFRα與PDGFRβ在食管鱗癌中的表達(dá)對(duì)評(píng)價(jià)患者的預(yù)后有一定參考價(jià)值。

食管鱗癌；血小板衍生生長(zhǎng)因子受體－α；血小板衍生生長(zhǎng)因子受體－β

（Chin J Lab Diagn，2015，19：1642）

食管癌是最常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率位居世界第八位，死亡率位居世界第六位，中國(guó)的食管癌的新發(fā)病例和死亡率均居世界第一位［1］。在我國(guó)食管癌患者組織學(xué)類型約95%以上為鱗狀細(xì)胞癌。雖然對(duì)食管鱗癌的治療已經(jīng)達(dá)到一定水平，但大部分患者被發(fā)現(xiàn)時(shí)已是晚期且預(yù)后較差。

PDGFR可分α、β兩種類型，其屬于酪氨酸蛋白激酶受體家族的成員。PDGFRα可以激活多種蛋白質(zhì)的磷酸化途徑，傳導(dǎo)生長(zhǎng)信號(hào)給胞質(zhì)內(nèi)部，誘導(dǎo)多種基因的表達(dá)、促進(jìn)DNA合成，引起細(xì)胞的分裂及增殖，從而可以促進(jìn)腫瘤血管的生成［2］。PDGFRα和PDGFRβ在肝癌、肺腺癌、結(jié)直腸癌、膀胱癌等中都參與到了腫瘤形成的過程［3］，但是PDGFRα和PDGFRβ在食管鱗癌中表達(dá)的報(bào)道甚少，本研究采用免疫組織化學(xué)染色法觀察PDGFRα和PDGFRβ在食管鱗癌組織中的表達(dá)，并分析它們的臨床病理學(xué)意義。

1 材料和方法

1.1 材料 131例食管鱗癌組織來源于上海芯超生物公司和延邊大學(xué)附屬醫(yī)院病理科從1998年到2008年接受了手術(shù)切除治療的原發(fā)性食管鱗癌病人的組織標(biāo)本。131例患者中，男127例，女4例，年齡＜65歲34例，年齡≥65歲97例，根據(jù)AJCC 2009年腫瘤分期標(biāo)準(zhǔn)，131例食管鱗癌TNM分期：Ⅰ期20例、Ⅱ期46例、Ⅲ期47例、Ⅳ期18例。

1.2 免疫組化染色 免疫組化染色采用二步法，檢測(cè)試劑盒為中杉公司產(chǎn)品，PDGFRα抗體（1∶100）為Cell Signaling Technology公司產(chǎn)品，PDGFRβ抗體（1∶100）為Abcam公司產(chǎn)品。染色步驟按常規(guī)操作步驟進(jìn)行。為證明抗體免疫組化檢測(cè)的特異性，實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用了兔IgG代替一抗作為對(duì)照，結(jié)果為陰性。

1.3 結(jié)果判定 染色的結(jié)果根據(jù)陽性細(xì)胞所占比例，將染色結(jié)果分為陽性和陰性。陽性細(xì)胞數(shù)超過20%為陽性，陽性細(xì)胞數(shù)低于20%為陰性。腫瘤微血管密度的判定方法：在光鏡下計(jì)算在五個(gè)不同的視野內(nèi)微血管的總數(shù)＜60個(gè)為低密度，≥60個(gè)為高密度。根據(jù)未成熟的纖維細(xì)胞所占比例將食管鱗癌間質(zhì)分為活化與未活化。成熟的纖維細(xì)胞鏡下胞體較小，呈長(zhǎng)梭形；未成熟的纖維細(xì)胞胞體較大，胞核呈橢圓形。在間質(zhì)組織中未成熟纖維細(xì)胞超過50%為間質(zhì)未活化，未成熟細(xì)胞低于50%為間質(zhì)活化［4］。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SSPS 16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，PDGFR蛋白表達(dá)率與臨床病理學(xué)參數(shù)間的比較應(yīng)用χ2檢驗(yàn)，采用Kaplan－Meier法繪制PDGFRα和PDGFRβ表達(dá)與患者術(shù)后生存時(shí)間的曲線，P＜0.05差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

PDGFRα和PDGFRβ主要表達(dá)于食管鱗癌間質(zhì)的成纖維細(xì)胞和炎癥細(xì)胞中（圖1）。PDGFRα在食管鱗癌活化的間質(zhì)組織中（67／74，90.5%）表達(dá)率明顯高于未活化組織（42／57，73.7%）（P＝0.038）。PDGFRβ在低分化組織中（22／26，84.6%）陽性表達(dá)率明顯高于高分化組織（42.1%）和中分化組織（44.2%）（P＝0.014）；在進(jìn)展期（T2－4）組織中（61／106，57.5%）表達(dá)率明顯高于早期鱗癌（6／25，24.0%）（P＝0.003）；在活化的間質(zhì)組織中（45／74，60.8%）陽性表達(dá)率明顯高于未活化組織（24／57，42.1%）（P＝0.022）。PDGFRα和PDGFRβ蛋白在食管鱗癌組織中的表達(dá)與患者年齡、性別、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、TNM分期、微血管密度、CD68、復(fù)發(fā)、化療和放療情況均無關(guān)（P＞0.05）（表1）。

PDGFRα（P＝0.001）和PDGFRβ（P＝0.044）陽性的食管鱗癌患者生存率明顯低于陰性者（圖2）。

圖1 食管鱗癌組織中PDGFRα（A）和PDGFRβ（B）的表達(dá)，EnVision法

表1 PDGFRα和PDGFRβ在食管鱗癌組織中的表達(dá)與臨床病理學(xué)參數(shù)的關(guān)系

圖2 PDGFRα和PDGFRβ蛋白表達(dá)與食管鱗癌患者總生存率間的關(guān)系

3 討論

成纖維細(xì)胞在腫瘤的惡性進(jìn)程中可以被血小板衍生生長(zhǎng)因子等轉(zhuǎn)化為癌相關(guān)成纖維細(xì)胞（cancerassociated fibroblast，CAFs），CAFs可以進(jìn)一步促進(jìn)腫瘤的發(fā)生、生長(zhǎng)、侵襲和轉(zhuǎn)移［5］。PDGFRα和PDGFRβ是CAFs的兩個(gè)重要的生物學(xué)標(biāo)記，參與腫瘤細(xì)胞增殖與遷移的過程。PDGFRα在多種惡性腫瘤中呈異常的高表達(dá)，如肺癌、前列腺癌和乳腺癌等。易村犍等［6］報(bào)道PDGFRα在卵巢上皮性癌間質(zhì)細(xì)胞中的陽性表達(dá)率顯著高于癌細(xì)胞中的陽性表達(dá)率。在本研究中，PDGFRα在食管鱗癌活化的間質(zhì)組織中表達(dá)率明顯高于未活化組織，說明PDGFRα可能通過加速間質(zhì)增生與微血管的生長(zhǎng)進(jìn)而促進(jìn)腫瘤的增殖與遷移過程。

PDGFRβ是CAFs另一重要生物學(xué)標(biāo)記物，近些年研究發(fā)現(xiàn)，PDGFRβ在胃癌、結(jié)腸癌、肺癌等惡性腫瘤間質(zhì)的成纖維細(xì)胞中呈異常高表達(dá)［7］。PDGFRβ蛋白表達(dá)與非小細(xì)胞肺癌的分化程度密切相關(guān)；PDGFRβ在Ⅱ、Ⅲ期肺癌組織中的表達(dá)情況顯著高于Ⅰ期的肺癌患者，說明PDGFRβ的過表達(dá)與肺癌的臨床分期呈正相關(guān)［8］。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果，在食管鱗癌組織中，PDGFRβ表達(dá)隨腫瘤惡性程度增加而增高，提示PDGFRβ可能作為預(yù)測(cè)食管鱗癌進(jìn)展的參考標(biāo)志。

研究表明，PDGFRα和PDGFRβ蛋白可以初步預(yù)測(cè)卵巢癌、結(jié)直腸癌、乳腺癌的預(yù)后，即PDGFRα和PDGFRβ過表達(dá)的腫瘤患者生存期短、預(yù)后差［4］。朱浩圖等［9］在122例結(jié)直腸癌組織中檢測(cè)到PDGFRβ蛋白表達(dá)，且PDGFRβ的過表達(dá)提示結(jié)直腸癌患者的預(yù)后不良。本研究發(fā)現(xiàn)PDGFRα和PDGFRβ蛋白過表達(dá)與食管鱗癌患者的較短生存期關(guān)系密切，即PDGFRα和PDGFRβ陽性患者生存時(shí)間明顯短于陰性患者，以上結(jié)果提示，PDGFRα和β蛋白過表達(dá)可作為食管鱗癌惡性潛能及腫瘤進(jìn)展的有效分子指標(biāo)。

綜上所述，PDGFRα和PDGFRβ與食管鱗癌間質(zhì)的活化、腫瘤分化程度和進(jìn)展以及患者的生存率密切相關(guān)。因此，PDGFRα與PDGFRβ在食管鱗癌中的表達(dá)對(duì)評(píng)價(jià)患者的預(yù)后有一定參考價(jià)值。

［1］孫 波，張 蕾，李穎霞，等.Smo和Gli1蛋白在食管鱗狀細(xì)胞癌組織中的表達(dá)及臨床意義［J］.世界華人消化雜志，2011，19（5）：483.

［2］徐欣華，李曉琴，楊 榮，等.血小板衍生生長(zhǎng)因子受體－α在骨肉瘤中的表達(dá)及意義［J］.甘肅醫(yī)藥，2012，31（11）：1004.

［3］Tefferi A.Molecular drug targets in myeloproliferative neoplasms mutant ABL 1，JAK2，MPL，KIT，PDGFRA，PDGFRB and FGRl［J］.Cell Mol Med，2009，13（2）：215.

［4］Sang Yun Ha，So－Young Yeo，Yan－h(huán)iua Xuan，et al.The Prognostic Significance of Cancer－Associated Fibroblasts in Esophageal Squamous Cell Carcinoma［J］.PLoS One，2014，9（6）：e99955.

［5］崔 演，劉勝男，玄延花，等.食管鱗癌間質(zhì)中FAP、CD68的表達(dá)及意義［J］.臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志，2014，30（1）：1001.

［6］易村犍，李 莉，陳克明，等.C－Kit和PDGFR－α在卵巢上皮性癌腫瘤細(xì)胞及腫瘤間質(zhì)中的表達(dá)差異［J］.中國(guó)全科醫(yī)學(xué)，2010，13（23）：1007.

［7］齊立鋒.腎透明細(xì)胞癌中血小板衍生生長(zhǎng)因子BB和微血管密度的檢測(cè)及臨床意義［J］.中華腫瘤雜志，2013，35（9）：672.

［8］吳麗娜，秦曉松，李 強(qiáng).血小板衍生生長(zhǎng)因子－B鏈及受體－α鏈在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及意義［J］.免疫學(xué)雜志，2011，27（1）：66.

［9］朱浩圖，韓 軍，馬 琳.結(jié)直腸癌組織中PDGFRα和PDGFRβ的表達(dá)及意義［J］.癌癥，2008，27（6）：654.

The significance of PDGFRαand PDGFRβin esophageal squamous cell carcinoma expression and clinical pathology

IU Xin－xin，YANG Zhao－ting，WANG Li－qiang，et al.（A level 2013 Preventive Medicine Specialty，Yanbian University College of Medicine，Yanji 133002，China）

ObjectiveTo observe the expression of PDGFRαand PDGFRβproteins in esophageal squamous cell carcinoma（ESCC），and to explore the role of them in ESCC and prognosis.Methods The expression of PDGFRαand PDGFRβwere detected in 131cases of ESCC by immunohistochemical stain，and analysed the relationship between the expression of PDGFRαand PDGFRβand patient＇s age，gender，tumor size，differentiation，T stage，lymph node metastasis，distant metastasis，TNM stage，microvascular density，interstitial whether activation，recur，CD68，chemotherapy，RT and survival.Results PDGFRαand PDGFRβmainly expressed in the stromal fibroblasts and inflammatory cells of ESCC.The expression rate of PDGFRαin the activated interstitial tissue of ESCC was obviously higher than the non－activated tissue（P＜0.05）.The positive rate of PDGFRβwas higher in poorly differentiated ESCC than in well and moderately differentiated cases（P＜0.05）.The positive rate of PDGFRβprotein was higher in advanced－stage（T2－4）ESCC than in early－stage cases（P＜0.01）.Similarly，the positive rate of PDGFRβprotein was higher in the activated interstitial tissue than in the non－activated tissue（P＜0.05）.PDGFRα（P＜0.01）and PDGFRβ（P＜0.05）expression positive patients survival rate were lower than the negative groups.There was no significant relation between the expression of PDGFRαor PDGFRβand patient＇s age，gender，tumor size，lymph node metastasis，distant metastasis，TNM stage，microvascular density，recur，CD68，chemotherapy and RT.Conclusion PDGFRαand PDGFRβexpression were closely correlated with the activated interstitial tissue，differentiation degrees，evolvement，survival of ESCC.Therefore，PDGFRαand PDGFRβoverexpression could be as the effective biomarker for poor prognosis of ESCC.

esophageal squamous cell carcinoma；PDGFRα；PDGFRβ

R735.1

A

2014－11－17）

1007－4287（2015）10－1642－04

國(guó)家自然科學(xué)基金（81160315，81460390）；延邊大學(xué)大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目基金（ydbksky2015065）

＊通訊作者