崔文賢，陳桂金

（常州市第七人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，江蘇常州213011）

常州老年人載脂蛋白E基因型與膽囊結(jié)石病的相關(guān)性研究

崔文賢，陳桂金

（常州市第七人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，江蘇常州213011）

載脂蛋白E是機(jī)體內(nèi)最主要的載脂蛋白，具有遺傳上的多態(tài)性［1，2］。在分析膽囊結(jié)石的研究中發(fā)現(xiàn)載脂蛋白E基因多態(tài)性與膽囊結(jié)石具有一定的相關(guān)性［3，4］。本研究對(duì)2010年2月至2014年2月期間診治的120例膽囊結(jié)石患者進(jìn)行分析，采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)－限制性片段長度多態(tài)性分析患者載脂蛋白E基因型與膽囊結(jié)石的相關(guān)性，并分析不同載脂蛋白E基因型與患者血脂水平的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

對(duì)本院2010年2月至2014年2月期間診治的膽囊結(jié)石患者進(jìn)行分析。120例患者男性67例，女性53例，年齡51－69歲，平均（58.7±6.9）歲。所有膽囊結(jié)石患者均經(jīng)過手術(shù)證實(shí)。排除標(biāo)準(zhǔn)：糖尿病、高脂血癥、肥胖、心腦血管疾病及肝腎功能異常和惡性腫瘤患者。以同期健康體檢者120例為對(duì)照組。兩組一般資料差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2 儀器與試劑

PCR擴(kuò)增儀購自美國BIO－RAD公司；凝膠成像儀購自美國BIO－RAD公司；離心機(jī)購自德國Eppendorf公司；HhaI限制性內(nèi)切酶購自TAKARA公司；引物由上海生物工程公司合成；其余試劑為市售分析純。

1.3 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)－限制性片段長度多態(tài)性分析

DNA提取試劑盒購自北京天根生物有限公司。PCR擴(kuò)增引物序列：F－5’－TAAGCTTGGCACGGCTGTCCAAGGA－3’，R－5’－ACAGAATTCGCCCCGGCCTGGTACAC－3’。擴(kuò)增程序：95℃－5 min；94℃－30s，63℃－30s，72℃－30s，30個(gè)循環(huán)；72℃延伸5min。PCR產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳純化后用HhaI限制性內(nèi)切酶酶切，分析酶切片段。

1.4 血清脂蛋白分析

高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、總膽固醇和甘油三酯檢測試劑盒購自南京建成生物工程中心。所有的檢測過程均按照說明書進(jìn)行操作。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)采用SPSS19.0處理。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，兩組間比較采用單因素方差分析。P＜0.05認(rèn)為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異性。

2 結(jié)果

2.1 膽囊結(jié)石患者載脂蛋白E基因型頻率分析

在對(duì)膽囊結(jié)石患者載脂蛋白E基因型頻率分析時(shí)發(fā)現(xiàn)膽結(jié)石組患者E3／4基因型頻率明顯高于健康對(duì)照組，有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），而其余基因型頻率在兩組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異性（P＞0.05），見表1。

表1 膽囊結(jié)石患者載脂蛋白E基因型頻率分析

2.2 膽囊結(jié)石患者載脂蛋白E等位基因頻率分析

在對(duì)膽囊結(jié)石患者載脂蛋白E等位基因頻率分析時(shí)發(fā)現(xiàn)E4基因型頻率明顯高于E2和E3等位基因頻率，具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表2。

表2 膽囊結(jié)石患者載脂蛋白E等位基因頻率分析

2.3 不同載脂蛋白E基因型與血清脂蛋白水平相關(guān)性分析

分析不同載脂蛋白E基因型與血清脂蛋白水平相關(guān)性發(fā)現(xiàn)E3／4基因型患者血清中高密度脂蛋白明顯低于其他基因型患者，而低密度脂蛋白、總膽固醇和甘油三酯水平明顯高于其他基因型患者（P＜0.05，P＜0.01），見表3。

表3 不同載脂蛋白E基因型與血清脂蛋白水平相關(guān)性分析

3 討論

載脂蛋白E主要在肝臟細(xì)胞內(nèi)合成，且其基因在人類體內(nèi)具有多態(tài)性。載脂蛋白E可能通過調(diào)節(jié)機(jī)體內(nèi)血脂水平參與了膽結(jié)石的發(fā)病過程。本研究在對(duì)常州老年人載脂蛋白E基因型與膽囊結(jié)石病的相關(guān)性進(jìn)行研究時(shí)發(fā)現(xiàn)膽結(jié)石組患者E3／4基因型頻率明顯高于健康對(duì)照組，且膽結(jié)石組患者的E4基因型頻率明顯高于E2和E3等位基因頻率；E3／4基因型患者血清中高密度脂蛋白明顯低于其他基因型患者，而低密度脂蛋白、總膽固醇和甘油三酯水平明顯高于其他基因型患者。因此，載脂蛋白E3／4基因型與膽囊結(jié)石發(fā)病密切相關(guān)，且E4等位基因可能是膽結(jié)石發(fā)生的易感因子。

載脂蛋白及血脂的異常與膽囊功能及膽結(jié)石密切相關(guān)［5，6］。在分析載脂蛋白B基因EcoRI多態(tài)性與膽石癥關(guān)系的相關(guān)性研究中發(fā)現(xiàn)波蘭人群中載脂蛋白B基因與膽結(jié)石的發(fā)病密切相關(guān)，且其等位基因E－／－是膽結(jié)石的保護(hù)因子［7］。在對(duì)異常黑膽質(zhì)與載脂蛋白E基因多態(tài)性的關(guān)聯(lián)分析中也發(fā)現(xiàn)載脂蛋白E多態(tài)性位點(diǎn)rs405509與異常黑膽質(zhì)密切相關(guān)［8］。分析載脂蛋白B基因XbaI多態(tài)性與膽石癥相關(guān)性的研究中也證實(shí)亞洲人群中膽結(jié)石的發(fā)病與載脂蛋白B基因Xbal多態(tài)性密切相關(guān)，且X＋是膽結(jié)石獨(dú)立的危險(xiǎn)因素［9］。本文在對(duì)膽囊結(jié)石患者載脂蛋白E基因型頻率分析時(shí)發(fā)現(xiàn)膽結(jié)石組患者E3／4基因型頻率明顯高于健康對(duì)照組，且兩組之間有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而其余基因型頻率在兩組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異性，表明載脂蛋白E多態(tài)性也與本地區(qū)膽囊結(jié)石患者的發(fā)病相關(guān)。

載脂蛋白是機(jī)體內(nèi)最主要的載脂蛋白，且與膽固醇、高密度脂蛋白和低密度脂蛋白的代謝過程相關(guān)。本文在分析不同載脂蛋白E基因型與血清脂蛋白水平相關(guān)性時(shí)也發(fā)現(xiàn)E3／4基因型患者血清中高密度脂蛋白明顯低于其他基因型患者，而低密度脂蛋白、總膽固醇和甘油三酯水平明顯高于其他基因型患者，表明E3／4基因型可能是通過調(diào)節(jié)血脂水平異常參與了膽結(jié)石的發(fā)病過程。在對(duì)血脂水平與膽囊結(jié)石發(fā)病關(guān)系的研究中也發(fā)現(xiàn)血糖及血脂水平異常是慢性膽囊炎合并膽結(jié)石發(fā)病的重要原因，且可以作為疾病診斷和嚴(yán)重性判斷的重要指標(biāo)［10］。

因此，載脂蛋白E3／4基因型與膽囊結(jié)石發(fā)病密切相關(guān)，且E4等位基因可能是膽結(jié)石發(fā)生的易感因子。

［1］王秀云，耿立軒，張 超，等.人性化護(hù)理在改善急診膽結(jié)石患者心理及疼痛中的應(yīng)用價(jià)值［J］.世界華人消化雜志，2015，21（13）：2149.

［2］馬 彪，楊 勇，孟憲海，等.2型糖尿病伴輕度認(rèn)知功能減退與載脂蛋白Eε4等位基因等因素的關(guān)系［J］.中國慢性病預(yù)防與控制，2014，4（1）：81.

［3］李榮年，楊 光，王長淼.血清脂類、載脂蛋白指標(biāo)異常與膽囊膽固醇結(jié)石病例對(duì)照分析［J］.中國誤診學(xué)雜志，2011，8（10）：2305.

［4］羅家柱，梁倩花.膽囊膽固醇結(jié)石患者血脂、脂蛋白、載脂蛋白水平及相關(guān)性研究［J］.中國醫(yī)藥科學(xué)，2011，11（20）：64.

［5］范培云，羅 瑋，姚勇利.阿托伐他汀對(duì)糖尿病合并膽囊結(jié)石者脂代謝的影響［J］.現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2011，9（4）：767.

［6］李前春，鐘立明.血脂與膽囊結(jié)石的相關(guān)性分析［J］.安徽醫(yī)藥，2015，8（5）：937.

［7］冀 軍，劉 揚(yáng).載脂蛋白B基因EcoRI多態(tài)性與膽石癥關(guān)系的相關(guān)性評(píng)價(jià)［J］.臨床醫(yī)藥實(shí)踐，2014，10（3）：173.

［8］拉扎提·鞏沙哈提，冷愛枝，劉建波，等.異常黑膽質(zhì)與載脂蛋白E基因多態(tài)性的關(guān)聯(lián)分析［J］.新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2014，8（6）：672.

［9］劉照國，劉 雷，盧海明，等.載脂蛋白B基因XbaI多態(tài)性與膽石癥關(guān)系的Meta分析［J］.中國普通外科雜志，2013，12（8）：1011.

［10］陳子廣.血糖、血脂水平與膽囊結(jié)石發(fā)病的關(guān)系分析［J］.醫(yī)學(xué)理論與實(shí)踐，2015，10（7）：910.

2015－03－29）

1007－4287（2015）10－1775－03