齊珊珊 胡麗萍

廣藿香葉揮發(fā)油抗炎作用機(jī)制實(shí)驗(yàn)研究

齊珊珊 胡麗萍

目的 對(duì)廣藿香葉揮發(fā)油抗炎機(jī)制進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究。方法 通過(guò)研究廣藿香葉揮發(fā)油對(duì)角叉菜膠致大鼠足腫炎癥模型組織和血清中前列腺素E2(PGE2)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)含量的影響, 探討廣藿香葉抗炎作用機(jī)理。結(jié)果 廣藿香葉揮發(fā)油能明顯降低大鼠角叉菜膠性炎癥模型組織和血清中的PGE2和MDA的含量, 能降低角叉菜膠致大鼠足腫炎癥模型血清中NO的含量。結(jié)論 廣藿香葉揮發(fā)油抗炎作用機(jī)制與抑制炎癥組織PGE2合成、減少炎癥組織中MDA堆積, 降低NO含量有關(guān)。

廣藿香葉揮發(fā)油；抗炎；前列腺素E2；丙二醛；一氧化碳

廣藿香為唇形科刺蕊草屬植物, 味辛、性微溫, 是我國(guó)重要常用中藥之一, 含有揮發(fā)油、黃酮、生物堿等化學(xué)成分,其中主要成分為揮發(fā)油。葉中揮發(fā)油的相對(duì)含量是各類藥用部位中最高的［1］, 研究報(bào)道廣藿香全草揮發(fā)油有明顯的抗炎、抗菌、抗過(guò)敏等作用［2-5］。本文對(duì)廣藿香葉揮發(fā)油的抗炎作用機(jī)制進(jìn)行了研究?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 昆明種小鼠, Wistar大鼠, 由沈陽(yáng)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供, 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK(遼)2004-0018。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)藥品及制備 實(shí)驗(yàn)用廣藿香購(gòu)自海南萬(wàn)寧廣藿香GAP生產(chǎn)基地, 批號(hào)：20060918。把廣藿香葉粉碎成粗粉,加入10倍量的蒸餾水浸泡30 min后按《中國(guó)藥典》一部附錄方法提取揮發(fā)油, 回流時(shí)間為4 h, 充分靜置后分離揮發(fā)油,出油率為4%。臨用時(shí)每4 ml揮發(fā)油加入1 ml吐溫-80混勻,用蒸餾水配制為相應(yīng)濃度的廣藿香揮發(fā)油乳劑。醋酸潑尼松：天津藥業(yè)焦作有限公司, 批號(hào)：07070211。瓶裝：5 mg/片。

1.1.3 試劑 吐溫-80：天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司,批號(hào)：20070406；營(yíng)養(yǎng)瓊脂：上海伊華醫(yī)學(xué)科技有限公司,批號(hào)：20021011；氫氧化鉀：沈陽(yáng)正信高科技研究所試劑部,批號(hào)：20040605；甲醇：山東禹王實(shí)業(yè)有限公司禹城化工廠,批號(hào)：20071026；丙二醛試劑盒：南京建成生物工程研究所,批號(hào)：20080919；一氧化氮試劑盒:南京建成生物工程研究所,批號(hào)：20080919。

1.1.4 儀器 BS223S型電子天平：北京賽多利斯儀器有限公司；MLS-3780型高壓蒸汽滅菌器：成都泰盟科技有限公司生產(chǎn)；T6新世紀(jì)型紫外分光光度計(jì)：北京普析通用儀器有限責(zé)任公司。

1.2 方法

1.2.1 廣藿香葉揮發(fā)油對(duì)大鼠角叉菜膠性炎癥組織PGE2含量的影響［6-8］取130～150 g雄性大鼠50只, 按體重隨機(jī)分五組, 空白對(duì)照組、廣藿香葉揮發(fā)油高劑量組(0.56 ml/kg)、中劑量組(0.28 ml/kg)、低劑量組(0.14 ml/kg)、醋酸潑尼松組(20.00 mg/kg), 每組10只。灌胃給藥, 1次/d, 連續(xù)給藥7 d,空白對(duì)照組灌胃給予體積濃度為20%的吐溫-80蒸餾水溶液。末次給藥30 min后, 將1%角叉菜膠0.1 ml注入每只鼠的左后足掌心皮下致炎4 h后, 處死大鼠, 立即自踝關(guān)節(jié)上0.5 cm處剪下炎性腫脹足, 致炎足剝皮, 剪碎置于5 ml生理鹽水中浸泡1 h, 取上清液0.3 ml, 并加入0.5 mol/L KOH 2 ml,然后在50℃水浴中異構(gòu)化20 min, 加入甲醇5ml后, 用紫外分光光度計(jì)測(cè)定前列腺素E2的含量(波長(zhǎng)278 nm)。

1.2.2 廣藿香葉揮發(fā)油對(duì)大鼠角叉菜膠性炎癥血清中PGE2含量的影響［9］取130～150 g 雄性大鼠50只, 按體重隨機(jī)分五組, 分組及給藥劑量、時(shí)間同“1.2.1”。模型對(duì)照組灌服等容積蒸餾水。末次給藥30 min后, 將1%角叉菜膠0.1 ml注入每只鼠的左后足掌心皮下致炎4 h后, 摘眼球取血, 靜置3000 r/min離心10 min得血清, 取血清0.3 ml, 并加入0.5 mol/L KOH 2 ml, 然后在50℃水浴中異構(gòu)化20 min, 加入甲醇5 ml后,用紫外分光光度計(jì)測(cè)定前列腺素E2的含量(波長(zhǎng)278 nm)。

1.2.3 廣藿香葉揮發(fā)油對(duì)大鼠角叉菜膠性炎癥血清中MDA含量的影響 取130～150 g 雄性大鼠50只, 按體重隨機(jī)分五組, 分組、給藥劑量、時(shí)間同“1.2.1”。末次給藥30 min后,將1%角叉菜膠0.1 ml注入每只鼠的左后足掌心皮下致炎4 h后, 摘眼球取血, 靜置后3000 r/min離心10 min得血清, 按試劑盒說(shuō)明測(cè)定MDA含量。

1.2.4 廣藿香葉揮發(fā)油對(duì)大鼠角叉菜膠性炎癥血清中NO含量的影響 取130～150 g雄性大鼠50只, 按體重隨機(jī)分五組, 分組、給藥劑量、時(shí)間同“1.2.1”。末次給藥30 min后,將1%角叉菜膠0.1 ml注入每只鼠的左后足掌心皮下致炎4 h后, 摘眼球取血, 靜置后3000 r/min離心10 min得血清, 按試劑盒說(shuō)明測(cè)定NO含量。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差( x-±s)表示, 采用t檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 廣藿香葉揮發(fā)油對(duì)大鼠炎癥組織中PGE2含量的影響 廣藿香葉揮發(fā)油對(duì)大鼠角叉菜膠性炎癥組織PGE2生成有抑制作用, 高劑量組吸光度值與空白對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見(jiàn)表1。

2.2 廣藿香葉揮發(fā)油對(duì)大鼠炎癥血清中PGE2含量的影響 廣藿香葉揮發(fā)油對(duì)大鼠角叉菜膠性炎癥血清中PGE2生成有抑制作用, 高劑量組吸光度值與空白對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05), 見(jiàn)表2。

2.3 廣藿香葉揮發(fā)油對(duì)大鼠炎癥血清中MDA含量的影響 廣藿香葉揮發(fā)油對(duì)大鼠角叉菜膠性炎癥血清中MDA生成有抑制作用, 高劑量組含量與空白對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見(jiàn)表3。

2.4 廣藿香葉揮發(fā)油對(duì)大鼠炎癥血清中NO含量的影響 廣藿香葉揮發(fā)油能降低大鼠角叉菜膠炎癥血清中NO含量,其中高劑量組與空白對(duì)照組比較NO含量差異有顯著意義(P＜0.05)。見(jiàn)表4。

表1 廣藿香葉揮發(fā)油對(duì)大鼠炎癥組織中PGE2含量的影響

表1 廣藿香葉揮發(fā)油對(duì)大鼠炎癥組織中PGE2含量的影響

注：與空白對(duì)照組比較,aP＜0.05,bP＜0.01

組別劑量吸光度(OD)空白對(duì)照組0.116±0.058醋酸潑尼松組20.00 mg/kg 0.042±0.013b低劑量組0.14 ml/kg0.076±0.033中劑量組0.28 ml/kg0.097±0.047高劑量組0.56 ml/kg 0.059±0.024a

表2 廣藿香葉揮發(fā)油對(duì)大鼠炎癥血清中PGE2含量的影響

注：與空白對(duì)照組比較,aP＜0.05,bP＜0.01

組別劑量吸光度(OD)空白對(duì)照組0.452±0.051醋酸潑尼松組20.00 mg/kg 0.389±0.030b低劑量組0.14 ml/kg0.431±0.041中劑量組0.28 ml/kg0.408±0.068高劑量組0.56 ml/kg 0.404±0.030a

表3 廣藿香葉揮發(fā)油對(duì)大鼠炎癥血清中MDA含量的影響

注：與空白對(duì)照組比較,aP＜0.05

組別劑量含量(nmol/L)空白對(duì)照組3.90±0.69醋酸潑尼松組20.00 mg/kg2.97±0.82低劑量組0.14 ml/kg3.19±0.98中劑量組0.28 ml/kg3.16±0.95高劑量組0.56 ml/kg 3.01±0.93a

表4 廣藿香葉揮發(fā)油對(duì)大鼠炎癥血清中NO含量的影響

表4 廣藿香葉揮發(fā)油對(duì)大鼠炎癥血清中NO含量的影響

注：與空白對(duì)照組比較,aP＜0.05

組別劑量含量(μmol/L)空白對(duì)照組3.54±0.68醋酸潑尼松組20.00 mg/kg2.96±0.40低劑量組0.14 ml/kg3.32±1.03中劑量組0.28 ml/kg3.34±0.86高劑量組0.56 ml/kg 2.86±0.76a

3 討論

按炎癥介質(zhì)的來(lái)源、性質(zhì)、作用主要可以分為細(xì)胞釋放的炎性介質(zhì)和體液中的炎性介質(zhì)。其中細(xì)胞釋放的炎性介質(zhì)包括：血管活性胺、花生四烯酸代謝產(chǎn)物(有前列腺素和白細(xì)胞三烯)、NO等。丙二醛是脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物, 與自由基的生成有密切關(guān)系, 自由基在炎癥的發(fā)展過(guò)程中起重要作用。在本實(shí)驗(yàn)中采用角叉菜膠致炎, 激活了花生四烯酸的代謝通路, 產(chǎn)生炎癥過(guò)程中的自由基。故可通過(guò)對(duì)炎癥血清MDA含量的測(cè)定來(lái)研究藥物抑制MDA產(chǎn)生的程度, 從而探討藥物的抗炎作用機(jī)理。

廣藿香葉揮發(fā)油抗炎作用機(jī)制實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：廣藿香葉揮發(fā)油能降低炎癥組織和血清中前列腺素E2和NO的含量,推測(cè)廣藿香葉揮發(fā)油對(duì)炎癥的對(duì)抗作用是通過(guò)抑制了炎癥組織和血清中炎性介質(zhì)的合成、釋放而實(shí)現(xiàn)的。實(shí)驗(yàn)結(jié)果同時(shí)表明, 廣藿香葉揮發(fā)油能減少血液中脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物-丙二醛的堆積, 縮短炎癥過(guò)程。

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10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.02.182

2014-08-25］

253012 德州市立醫(yī)院(齊珊珊)；遼寧中醫(yī)藥大學(xué)(胡麗萍)

胡麗萍