趙曉倩

組蛋白去乙?；福╤istone deacetylases，HDACs）作為催化組蛋白去乙?；饔玫年P鍵酶類，以其參與腫瘤細胞生長增殖與表達調(diào)控等諸多過程，在腫瘤發(fā)生發(fā)展的表觀遺傳學研究中日益引起學術界的關注與重視。HDACs乙?；煌N類的細胞核轉(zhuǎn)錄因子和蛋白等，抑制多種抑癌蛋白的表達且與多種癌基因密切關聯(lián)，導致細胞過度增殖和腫瘤發(fā)生。

一、誘導染色質(zhì)重塑，抑制基因轉(zhuǎn)錄

HDACs催化的核心組蛋白N-末端尾部區(qū)域賴氨酸殘基的去乙?；谡T導基因沉默中發(fā)揮重要作用，其通過去乙?；揎検菇M蛋白帶正電荷，從而與帶負電荷的DNA緊密結合，染色質(zhì)呈致密卷曲的阻抑結構，抑制轉(zhuǎn)錄。研究證實，t（15;17） （q22;q21）是急性早幼粒細胞白血?。ˋPL）最常見的染色體易位，編碼的融合蛋白PML-RARα能異常募集HDACs而抑制RA反應基因的轉(zhuǎn)錄，導致髓系細胞成熟障礙。RAR是核內(nèi)激素受體超家族，與RA的另一受體RXR形成RAR/RXR異二聚體，異二聚體與DNA結合以后能募集轉(zhuǎn)錄抑制復合物N-CoR-mSin3-HDAC而抑制RA反應基因的轉(zhuǎn)錄，進而導致RA反應基因發(fā)生沉默。Ⅰ類HDACs中的HDAC1及HDAC2與RbAp48、Sin3A/Sin3B、SAP18 、SAP30共同構成Sin3復合物而發(fā)揮作用，TGF-β/BMP信號通路基因即以此復合物作為靶點。BMP信號系統(tǒng)可致Smad1蛋白發(fā)生磷酸化，在小鼠軟骨細胞中其促使與Smad4蛋白發(fā)生作用，Sin3復合物此時即與Smad蛋白作用而抑制TGF-β/BMP信號系統(tǒng)中的目的基因。

二、作用于細胞周期的相關因子，影響細胞增殖與分化

腫瘤的發(fā)生通常表現(xiàn)為細胞周期失去正常的信息調(diào)控而處于紊亂無序的狀態(tài)。在細胞周期中，細胞G1期向S期進展和G2期進入M期是細胞周期的兩個限制點（restrict point），腫瘤細胞的異常增殖的順利進行需要以下3個條件：一是p21WAFI/CIP1 抑制因子（一種重要的細胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑CDKI）低水平;二是細胞周期素（cyclin）及周期蛋白依賴激酶（cyclin-dependent kinase，CDK）及激酶系列的活性，如CDK2等;三是人類視網(wǎng)膜母細胞瘤相關基因（RB）的含量足夠并磷酸化激活，因為RB是G1期cyclin/CDK特異性的底物。HDACs可通過影響以上腫瘤細胞異常增殖的3種作用因子而對腫瘤細胞的增殖分化產(chǎn)生重大影響。

1.抑制p21WAFI/CIP1基因表達，調(diào)控腫瘤細胞增殖分化。研究發(fā)現(xiàn)Ⅱ類HDACs的重要成員HDAC4在小腸和盲腸增生部位表達而其分化時期明顯減少，在體外培養(yǎng)的克隆癌細胞HCT116中運用的SiRNA干擾技術下調(diào)HDAC4的表達，發(fā)現(xiàn)可誘導其生長抑制、延緩異種嫁接的腫瘤的生長而增加P21的轉(zhuǎn)錄。此外，利用免疫共沉淀及序列免疫共沉淀作用分析闡明HDAC4依賴Sp1與P21鄰近啟動子結合，可能直接通過HDAC4-HDAC3-N-COR/SMRT共阻遏復合物來完成，而HDAC4或SMRT的下調(diào)提高了鄰近的P21啟動子基因座的組蛋白H3乙酰化水平，證實了HDAC4通過抑制P21的表達而成為一個新型的克隆癌細胞生長增殖的調(diào)控因子。此外，依賴SP家族對P21的負性調(diào)控作用也有證實表現(xiàn)在Ⅰ類HDACs（如HDAC1、HDAC2及HDAC3）等的分子生物學功能中。

2.作用于細胞周期蛋白及蛋白激酶，影響腫瘤發(fā)生發(fā)展。研究發(fā)現(xiàn)在乳腺癌細胞系中SMAR1（一種基質(zhì)相關蛋白）160-350位點通過募集作用與HDAC1的一種復合物結構-SIN3及視網(wǎng)膜母細胞瘤袋蛋白結合，新形成的復合物通過對cyclin D1的啟動子上游長達5 kb的基因座去乙酰化而發(fā)揮cyclin D1啟動子的抑制作用，且發(fā)現(xiàn)在此乳腺癌細胞系中cyclin D1的高誘導表達與SMAR1水平的降低有明顯關聯(lián);而Iguchi等在胰島素瘤細胞中用染色質(zhì)免疫沉淀法顯示：增長的sex-determining region Y-box 6（即SOX6）表達可明顯誘導cyclin D1的啟動子的H3與H4的乙酰化水平，用HDACs抑制劑和免疫共沉淀分析顯示SOX6通過與HDAC1及β-連珠蛋白作用而抑制cyclin D1的活性。說明Ⅰ類HDACs中的重要成員HDAC1在影響腫瘤細胞周期方面有重要作用。

3.與Rb基因相互作用，影響腫瘤細胞周期。研究發(fā)現(xiàn)，激活Rb基因蛋白產(chǎn)物視網(wǎng)膜母細胞瘤相關基因抑制蛋白（RB）調(diào)介cyclin A、cdc2、拓撲異構酶Ⅱα等的啟動子的去乙?；癄顟B(tài)，且此去乙?；蕾嘓DACs而發(fā)揮作用，證實RB不僅與轉(zhuǎn)錄因子E2F結合，且通過LXCXE基序與多重共抑制分子（如HDACs）發(fā)生相互作用。

三、作用于細胞凋亡相關蛋白，影響細胞凋亡過程

研究發(fā)現(xiàn)，在Jurkat細胞（人T細胞淋巴瘤細胞）中，Ⅰ類HDACs中的HDAC3作為多種促凋亡基因的核抑制子，其易以一種細胞和物種非依賴性的方式發(fā)生蛋白水解分裂，此分裂依賴于半胱天冬酶（caspase）且導致HDAC3的C-末端部分的缺失。HDAC3的此種分裂激活了一種靶向于HDAC3的抗凋亡基因-Fas編碼基因的組蛋白乙?；c轉(zhuǎn)錄活性，進而通過死亡受體途徑而誘導Jurkat細胞凋亡。另Zhu等發(fā)現(xiàn)，HDAC2在大部分克隆腫瘤組織與APC抑癌基因不足的小鼠的正常黏膜及腺瘤中高水平表達，由于在APC缺失的HT-29腫瘤克隆細胞中，小分子RNA（siRNA）對高表達的HDAC2的干擾作用可足夠誘導凋亡，表明此同工酶（HDAC2）在抑制HT-29腫瘤克隆細胞的凋亡中發(fā)揮特殊作用。

四、聯(lián)合血管生成因子，影響腫瘤組織血管移行與形成

研究發(fā)現(xiàn)血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）在內(nèi)皮細胞中通過一種VEFG受體2-磷脂酶Cγ-蛋白激酶C（PKC）-蛋白激酶D（PKD）依賴的途徑刺激Ⅱ類HDACs中的HDAC5的磷酸化與核內(nèi)輸出，在PKD依賴的磷酸化中一HDAC5特異性缺失的突變體抑制VEGF介導的NR4A1（一種血管生成中的寡核受體）的表達、內(nèi)皮細胞的移行與體外血管的形成。運用siRNA技術沉默HDAC5，發(fā)現(xiàn)成纖維細胞生長因子2（FGF2）與包括Slit2在內(nèi)的血管生長導向因子的表達受到明顯抑制，說明HDAC5亦可通過抑制對血管內(nèi)皮細胞的毛細管式“芽生”起重要作用的血管生成基因（如FGF2與Slit2）發(fā)揮抗血管形成作用。

研究發(fā)現(xiàn)Ⅱ類HDACs中的HDAC7通過PKC/PKD依賴的途徑完成由VEGF介導的磷酸化及核內(nèi)輸出，此種由VEGF介導HDAC7的分子反應的信號通路對于VEGF誘導的內(nèi)皮細胞的分化與移行是必需的，其通過抑制依賴或不依賴肌細胞促進因子2（MEF2）基因的表達而調(diào)控內(nèi)皮細胞的功能;除此之外，Ⅱ類中的HDAC4、HDAC5亦可由VEGF介導完成磷酸化，其核內(nèi)輸出過程可不完全依賴于VEGF完成，提示其可能作用于不同的靶點而在VEGF誘導的血管生成過程中發(fā)揮作用。

此外，研究發(fā)現(xiàn)HDACs是S1P（鞘氨醇膦酸酯）在細胞內(nèi)的直接靶標，其最初是一種存在于細胞核中具有生物活性的脂質(zhì)信使，由2型鞘氨醇激酶（sphK2）產(chǎn)生。SphK2選擇性聚集在編碼細胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑p21或轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子c-fos的基因啟動子上。S1P通過特異性結合HDAC1和HDAC2，抑制其活性，進而保護組氨酸末端賴氨酸不被去乙?；瑥亩岣呓M蛋白H3乙?；某潭龋龠M轉(zhuǎn)錄。