劉濤 王瑞 曲哲會(huì) 趙瑜

2015年9月中旬，河南省駐馬店市上蔡縣某400頭母豬場，體重在35～45kg階段豬群發(fā)生頑固性拉稀、糞便潛血或鮮紅。據(jù)畜主描述，該場有一棟存欄200多頭該階段豬只，已發(fā)病近半個(gè)月，發(fā)病率在40%，病程持續(xù)一周左右即可死亡。發(fā)病期間，該場使用過痢菌凈、阿莫西林和柴胡注射液，但效果不佳。

1 免疫背景

該場豬瘟、偽狂犬、藍(lán)耳病、圓環(huán)病毒病疫苗均為國產(chǎn)疫苗，母豬按季度普免，商品豬豬瘟斷奶前免疫一次，保育后期免疫一次，偽狂犬出生滴鼻，45日齡加強(qiáng)一次，圓環(huán)與藍(lán)耳病疫苗均在15日齡免疫一次。

2 臨床癥狀

發(fā)病豬只出現(xiàn)嚴(yán)重的咳嗽、喘氣現(xiàn)象，眼結(jié)膜潮紅，皮膚顏色蒼白，膘情差，行走時(shí)步履蹣跚。地面清晰可見紅色或水泥色糞便，個(gè)別嚴(yán)重豬只肛門處粘有紅色稀糞。大群豬只打堆，采食量明顯下降。

3 病理變化

對(duì)發(fā)病豬只處死后解剖可見，皮膚表面有明顯鐵銹色出血孔，皮下漿膜面有出血斑點(diǎn)，全身各處淋巴結(jié)有腫大現(xiàn)象，斷面有出血。腸系膜淋巴結(jié)呈索樣腫大，肺臟膨隆不全，部分肺葉質(zhì)地堅(jiān)實(shí)，可見因組織增生而形成的灰白色斑塊。肝腫脹淤血；胃黏膜脫落、潰瘍；腸壁淋巴小結(jié)腫脹隆起，突出于腸漿膜和黏膜表面。腎臟腫大，色澤變淡，表面散有灰白色大小不一的病灶。

4 實(shí)驗(yàn)室檢查

4.1 主要試劑及培養(yǎng)基

引物由上海生工公司合成。動(dòng)物總RNA快速提取試劑盒購自上海捷瑞生物工程有限公司。基因組RNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒購自Thermo公司。2XPowerPCR MasterMix（北京百泰克生物技術(shù)公司）。DNAMarker（寶生物工程（大連）有限公司）。細(xì)菌培養(yǎng)基（杭州天和微生物試劑有限公司）。

4.2 引物設(shè)計(jì)與合成

應(yīng)用PrimerPremier5.0軟件，根據(jù)GenBank已發(fā)表的序列，分別設(shè)計(jì)豬瘟、豬繁殖與呼吸綜合征病毒、偽狂犬病毒、圓環(huán)病毒引物如下：上游引物：5'-CCTGCACCCCGTAGAACTG-3，下游引物：5'-GCGAAACGCCTCGTAAGC-3。上游引物5'-CTCCCTGCGTGGTCTAAG-3，下游引物：5'_GCITCCTCCACTCCCArITG_3。上游引物：5'-ATGGGCATCGCCGACTACCT-3；下游引物：5'- GCCAGAAGAGCTCCCAGTGCA-3。上游引物：5'-GITATCGTATGGCGGGAGG-31；下游引物：5'- CCCCTCTCTCCCCrrTGA_3'.

4.3 細(xì)菌分離鑒定

采集病死豬的淋巴結(jié)、脾臟、腸道內(nèi)容物接種于營養(yǎng)瓊脂和普通肉湯、麥康凱瓊脂平板、亞硫酸鉍瓊脂平板上，37℃培養(yǎng)24h，然后挑取單個(gè)菌落涂片、革蘭氏染色。

在無菌條件下，將分離純化的細(xì)菌，接種于細(xì)菌微量生化微反應(yīng)管中，在37℃下培養(yǎng)24～48h，觀察結(jié)果。

4.4 藥敏試驗(yàn)

采用瓊脂紙片擴(kuò)增法。將細(xì)菌密度為1.5×108cfu/mL的菌液，用滅菌棉拭子蘸取，在營養(yǎng)瓊脂平板上均勻涂布，藥敏紙片貼到培養(yǎng)基表面，37℃條件下培養(yǎng)16-18h。

5 結(jié)果與分析

5.1 PCR與RT-PCR檢測結(jié)果（如圖1）

5.2 分離培養(yǎng)特性

在普通營養(yǎng)瓊脂上，形成圓形、半透明、光滑、濕潤、邊緣整齊的灰白色菌落，在麥康凱瓊脂形成細(xì)小、無色半透明、光滑、圓整菌落，在亞硫酸鉍瓊脂平板上，呈黑色菌落。取分離菌純培養(yǎng)物涂片，呈兩端鈍圓或卵圓形，不運(yùn)動(dòng)，不形成芽孢和莢膜的革蘭氏陰性小桿菌。

5.3 生化試驗(yàn)結(jié)果

生化試驗(yàn)結(jié)果表明，能還原硝酸鹽、能利用葡萄糖產(chǎn)氣、賴氨酸和鳥氨酸脫羧酶反應(yīng)陽性。尿酸酶試驗(yàn)陰性。不發(fā)酵蔗糖、水楊苷、肌醇和苦杏仁苷。不發(fā)酵阿拉伯糖。

5.4 藥敏試驗(yàn)結(jié)果

分離出的豬霍亂沙門氏菌對(duì)18種抗菌藥的敏感性試驗(yàn)結(jié)果（見表1）。

6 鑒別診斷

1）慢性豬瘟與慢性副傷寒的臨床癥狀有相似地方，容易混淆，但豬瘟皮膚常有小出血點(diǎn)，精神高度沉郁，不食，各種藥物治療無效，病死率極高，剖檢時(shí)，脾臟不腫大，無壞死灶，但常有出血性梗死，回盲瓣口有紐扣狀潰瘍，淋巴結(jié)出血明顯。

2）豬痢疾持續(xù)性下痢，糞便帶血和黏液，呈棕色、褐色或紅色。剖檢時(shí)可見大腸黏膜主要病變是彌漫性出血和壞死，腸黏膜及腸內(nèi)容物多呈暗紅色，涂片染色，可見本病病原體——蛇形螺旋體。

3）由彎曲桿菌引起的壞死性腸炎，可見急性腸出血或下痢，剖檢可見回腸出血壞死，而大腸病變較輕微，其他臟器無明顯變化。

7 控制措施

建議將病豬與疑似感染病豬與健康豬只隔離，及時(shí)將糞便進(jìn)行清理，并對(duì)圈舍進(jìn)行消毒。病豬注射恩諾沙星，灌服蒙脫石散。緊急接種偽狂犬疫苗，豬群健康狀況改善后，添加七清敗毒顆粒。

8 討論

1）根據(jù)發(fā)病情況、臨床癥狀、病例剖檢、實(shí)驗(yàn)室檢查確診為豬圓環(huán)病毒病、豬偽狂犬、仔豬副傷寒的混合感染。

2）發(fā)病原因分析：PCV-2和PRV主要侵害機(jī)體的免疫系統(tǒng)，可以造成機(jī)體的免疫抑制，豬只對(duì)其它疫病的易感性增加。養(yǎng)殖場隨著運(yùn)行時(shí)間延長，病原微生物在環(huán)境當(dāng)中會(huì)逐漸蓄積起來，如果豬場自身在環(huán)境衛(wèi)生和消毒工作上懈怠，必然加大豬群發(fā)病的風(fēng)險(xiǎn)。該場已運(yùn)行11年，加之生產(chǎn)條件一般，能明顯在現(xiàn)場看到地面潮濕、污穢的情況。仔豬副傷寒是一種條件性傳染病，外界各種應(yīng)激因素造成豬體抵抗力降低，可促進(jìn)本病發(fā)生。

3）臨床治療需要結(jié)合實(shí)驗(yàn)室工作該場發(fā)病是有10余天后，之前，技術(shù)員只是單一看到豬群糞便帶有血色，懷疑有豬痢疾，而使用乙酰甲喹進(jìn)行治療無效，豬群開始出現(xiàn)一定傷亡已無法控制時(shí)，才來到實(shí)驗(yàn)室作診斷。

4）疫苗免疫工作有漏洞PCV2近幾年從檢測情況分析可知，國內(nèi)豬場野毒感染率較高。目前市場所用疫苗均為滅活疫苗，理論上將需要兩次免疫，將刺激機(jī)體產(chǎn)生高水平IgG抗體，持續(xù)時(shí)間長。但豬場為了節(jié)約成本和降低勞動(dòng)強(qiáng)度，多為一次免疫，免疫效果將打折扣。

2011年以來，偽狂犬在國內(nèi)豬場感染的發(fā)病率有明顯反彈態(tài)勢，應(yīng)加強(qiáng)中大豬抗體檢測，這個(gè)階段的豬群臨床癥狀不十分明顯，容易被忽視，形成免疫防控的漏洞，致使中大豬持續(xù)感染排毒，造成野毒在場內(nèi)反復(fù)循環(huán)。當(dāng)豬群野毒陽性率達(dá)到一定水平時(shí)，則會(huì)導(dǎo)致豬場疾病的暴發(fā)。因此豬場偽狂犬的免疫在100日齡左右還應(yīng)加強(qiáng)一次。

5）仔豬副傷寒一年四季均可發(fā)生，尤其是在多雨季節(jié)的發(fā)生率較高。6月齡以內(nèi)的仔豬較易感染，2～4月齡斷奶仔豬感染率很高。雖然導(dǎo)致該病發(fā)生的原因較多，但最主要的還是由于養(yǎng)殖戶飼養(yǎng)管理不到位所致，例如豬舍內(nèi)環(huán)境臟亂差、日光照射不足、圈舍環(huán)境潮濕、飼料配方不當(dāng)，影響機(jī)體發(fā)育而抵抗力降低等；氣溫忽然變冷等諸多因素都是引發(fā)仔豬副傷寒病發(fā)生的主要因素。通常仔豬副傷寒病都是由病豬以及帶菌豬傳染，并且主要是通過糞便排泄進(jìn)行傳染，沒有進(jìn)行隔離的病豬通過排泄糞便，污染了整個(gè)圈舍的飼養(yǎng)環(huán)境，由于都是多頭仔豬同住一個(gè)圈舍，因此，其他的健康仔豬很容易被感染，嚴(yán)重者甚至?xí)腥镜剿械呢i欄圈舍，引發(fā)大規(guī)模的仔豬發(fā)病。

6）樹立“防”重于“治”思想，做好免疫工作。在規(guī)?；B(yǎng)殖中，在對(duì)仔豬接種必要的疫苗以后，還要加強(qiáng)豬舍的綜合管理，如清掃圈舍、定時(shí)消毒、通風(fēng)干燥，使仔豬生長在良好的環(huán)境之中，不斷增強(qiáng)仔豬機(jī)體的抵抗力。