譚安軍

(重慶市永川區(qū)中醫(yī)院，重慶 402160)

健陽片是衛(wèi)生部《藥品標(biāo)準中藥成方制劑(第八冊)》(WS3－B－1604－93)收載品種，由淫羊藿提取物、蜈蚣粉、甘草提取物、蜂王漿精制而成的中藥復(fù)方制劑，功效為補腎益精、助陽興萎，用于腎虛陽衰引起的陽萎、早泄等性功能低下癥。其質(zhì)量標(biāo)準項目下只有簡單的顏色反應(yīng)和薄層鑒別試驗。為有效控制產(chǎn)品質(zhì)量，筆者采用高效液相色譜(HPLC)法測定本制劑組方中君藥淫羊藿主要成分淫羊藿苷的含量，為完善、提升該制劑質(zhì)量控制提供理論依據(jù)。

1 儀器與試藥

Waters Alliance 2695/2996型高效液相色譜儀，Empower色譜工作站(美國Waters公司)。淫羊藿苷對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為110737－200414);乙腈為色譜純、水為純化水;健陽片(市售，批號為 140501，140502，140503)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:Waters Symmetry C18柱(250 mm × 4.6 mm，5 μm);流動相:乙腈 －水(30∶70);流速:1.0 mL/min;檢測波長:270 nm。理論板數(shù)按淫羊藿苷峰計算應(yīng)不低于3 000。

2.2 溶液制備

稱取淫羊藿苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含0.12 mg的溶液，作為對照品溶液。取重量差異項下的本品20片，除去糖衣層，研細，取0.3 g，精密稱定，置100 mL容量瓶中，加甲醇80 mL超聲提取20 min，放冷，用甲醇定容至刻度，搖勻，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。按健陽片制備工藝，制備缺淫羊藿的陰性樣品，照供試品溶液制備方法制成陰性對照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

專屬性考察:照上述色譜條件，取2.2項下3種液溶液各10 μL，進樣測定。供試品溶液色譜中，在與淫羊藿苷對照品溶液色譜圖相應(yīng)位置上有一相應(yīng)色譜峰，陰性對照品溶液則無此峰，表明陰性樣品對測定無干擾，選擇性較好。色譜圖見圖1。

線性關(guān)系考察:精密吸取對照品溶液 2，4，8，16，20 μL，注入液相色譜儀，以淫羊藿苷進樣量(μg)為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)(Y)進行回歸分析，得回歸方程 Y=210 729X－13 213，r=0.999 9(n=5)。結(jié)果表明，淫羊藿苷進樣量在 0.24 ～2.40 μg 范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

圖1 高效液相色譜圖

精密度試驗:精密吸取同一對照品溶液10 μL，重復(fù)進樣5次。結(jié)果淫羊藿苷峰面積的 RSD為0.94%(n=5)，表明儀器精密度好。

穩(wěn)定性試驗:取同一供試品溶液，分別于 0，1，4，8，14 h進樣。結(jié)果淫羊藿苷峰面積的 RSD為1.10%(n=5)，表明供試品溶液在14 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

重復(fù)性試驗:按擬訂的含量測定方法，取同一批樣品(批號為20140501)6份測定，計算含量。結(jié)果樣品中淫羊藿苷平均含量為每片含 10.72 mg，RSD 為 1.04%(n=6)。

加樣回收試驗:取已知含量的樣品(批號為20140501)6份，分別加入淫羊藿苷對照品，按擬訂色譜條件，依法測定淫羊藿苷含量，計算回收率。結(jié)果見表1。

表1 淫羊藿苷加樣回收試驗結(jié)果(n=6)

2.4 樣品含量測定

取3批樣品，按供試品溶液制備方法，并依法測定樣品中淫羊藿苷含量。結(jié)果批號為140501，140502，140503樣品每片含量分別為 10.72，10.97，10.66 mg。

3 討論

[1]，選用乙腈－水系統(tǒng)作為流動相，基線平穩(wěn)，經(jīng)多次試驗，該流動相能使樣品中淫羊藿苷峰與相鄰色譜峰達到基線分離且分離良好，峰形對稱，陰性對照無干擾。

供試品溶液制備方法參考文獻[2－5]，分別對提取溶劑的種類、提取次數(shù)、超聲處理時間進行了考察。試驗結(jié)果表明，供試品制備方法采用超聲提取20 min，淫羊藿苷的含量趨于穩(wěn)定，運用平行測定方法，計算含量的 RSD符合相關(guān)規(guī)定。

根據(jù)文獻[6－9]報道，分別對不同廠家、不同規(guī)格的色譜柱進行篩選試驗。結(jié)果表明，采用Waters Symmetry C18柱色譜圖基線平穩(wěn)，峰形對稱。

采用高效液相色譜法測定制劑中淫羊藿苷的含量，方法快速、準確、峰形對稱，可用于健陽片的質(zhì)量控制。

參考文獻:

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:306.

[2]秦郁文，唐富麗.HPLC法測定補腎防喘薄膜衣片中淫羊藿苷的含量[J].中國藥房，2013，24(24):2 290 －2 291.

[3]盛華剛.HPLC同時測定骨愈注射液中三七總皂苷和淫羊藿苷含量[J].中國實驗方劑學(xué)雜志，2013，19(13):78 －81.

[4]付成國，高紅梅，白 冰，等.RP－HPLC法測定藤黃健骨丸中淫羊藿苷的含量 [J].海峽藥學(xué)，2013，25(7):118－119.

[5]劉寶磊，孫佳石.高效液相色譜法測定補腎口服液中淫羊藿苷含量[J].中國藥業(yè)，2013，22(18):56 －57.

[6]鄧 瑩，李 寧，郭興杰，等.骨疏丹膠囊的薄層鑒別和含量測定[J].沈陽藥科大學(xué)學(xué)報，2013，30(3):186－190.

[7]雷永濤，梁 妍，郝小燕，等.不同產(chǎn)地淫羊藿中4種活性成分含量的高效液相色譜法測定[J].時珍國醫(yī)國藥，2013，24(6):1 404－1 405.

[8]王 芳，石 悅，曹 健.高效液相色譜法測定延腎膠囊中淫羊藿苷含量[J].中國藥業(yè)，2014，23(4):37－38.

[9]田 晗，劉 敏，楊艷羚，等.丹七明目散提取物中淫羊藿苷與木犀草素含量的測定[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2013，33(15):1 289－1 291.