宋小俊，李玉琴，雷 立，李惠民，高吉仁

商洛職業(yè)技術學院，陜西 商洛 726000

商洛不同產地連翹中連翹苷含量比較*

宋小俊，李玉琴，雷 立，李惠民，高吉仁

商洛職業(yè)技術學院，陜西 商洛 726000

目的：比較商洛不同產地連翹果實中有效成份連翹苷(C27H34Ol l)的含量。方法：采用高效液相色譜法對不同區(qū)縣連翹中連翹苷含量進行檢測。結果：不同產地連翹果實中連翹苷含量相差較大，山陽石頭梁所采樣品連翹苷含量最高，山陽趙川所采樣品連翹苷含量較高，洛南靈口所采樣品連翹苷含量最低。結論：不同產地連翹中連翹苷含量有明顯差異；主要由連翹生產地生態(tài)環(huán)境因子及生產管理措施不同導致。

高效液相色譜法；連翹苷；含量；商洛

連翹為木犀科植物連翹屬連翹 Forsythia suspensa(T h un b.)V a h l的干燥果實，因采收季節(jié)不同分為青翹和老翹，青翹指秋季連翹果實初熟呈綠色時采收所得，老翹指秋季果實完全成熟后采收而得。連翹在我國已有兩千多年的藥用歷史，是最常見的中藥材之一，性味苦，微寒，歸心、肺、脾經［1］，具有清熱解毒、散結消腫之功效，用于風熱感冒、溫病初起、溫熱入營、熱淋尿閉［2］、丹毒、斑疹等［3-4］的治療，被視為瘡家要藥［5］。近年來，對連翹藥理學作用的報道不斷增多，連翹有效成份有連翹酚、揮發(fā)油類［6-7］、連翹酯苷、連翹苷、黃酮類［8-9］、熊果酸等［10］，其中連翹苷是連翹抗菌和抗病毒作用的活性成分［11］。連翹的果實和葉子均可入藥，連翹葉在我國河北等地被制成茶葉作為保健飲料，有較好的保健價值［12］；以連翹為主要原料的中成藥也較多，如連翹敗毒丸、連翹敗毒膏、雙黃連口服液、銀翹解毒片、雙黃連膠囊等。

商洛是我國大宗藥材連翹的主要產區(qū)，連翹也是商洛市確定的五大商藥之一，蘊藏量大，分布區(qū)域廣。本課題組在商洛連翹主要產區(qū)采樣，確定商洛五個縣區(qū)的14個樣方點，根據朱壽東、周紅敏等［13-14]研究報道，結合實際，按照(4×10)m2確定樣方。以連翹苷含量為指標，按照藥典標準，采用高效液相色譜法對不同區(qū)縣連翹中連翹苷含量進行比較，明確商洛連翹優(yōu)質產區(qū)與主要群落分布區(qū)域。為商洛連翹藥用資源開發(fā)利用和進一步規(guī)范化種植提供理論依據。

1 材料

1.1 藥材與試劑 青翹采自商洛5個縣區(qū)14個樣方點，確定樣方時間為2011年3月，采集藥材時間為2011年7月，經西北農林科技大學梁宗鎖教授鑒定為正品。將所采青翹蒸熟、曬干，備用；連翹苷標準品(中國藥品生物制品鑒定所)；甲醇、乙腈等化學試劑均為色譜純；純凈水。藥材分析試驗地點為商洛學院生物醫(yī)學工程系分析實驗室，試驗時間為2012年6月。

1.2 主要儀器 L C-10A T島津高效液相色譜儀；S P D-10A紫外-可見檢測器；浙江大學N2000色譜工作站；高速中藥粉碎機(青州市精誠機械有限公司，W K-1000A型)；萬分之一電子天平(S A R T OO-R I U S公司，A U W220型)；超聲波清洗儀器(昆山市超聲儀器有限公司，K Q5200B型)；旋轉蒸發(fā)儀(無錫市星海王生化設備有限公司，R501B型)；數(shù)顯恒溫水浴鍋(金壇市科析儀器有限公司，HH-4型)；電熱恒溫鼓風真空干燥箱 (上海森信實驗儀器有限公司，D GG-9203A D型)。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 參照中國藥典方法［2］，并適當調整。色譜柱：C18(250mm×46mm，10μm)；流動相：乙腈∶水=30∶70；檢測波長：277 n m；流速：1.0m L/m in；柱溫：室溫，見圖1。

圖1 連翹苷標準品及供試品的HPLC圖譜

2.2 對照品溶液與供試品溶液的制備 精密稱取連翹苷標準品4.66 m g加少量甲醇，于10 m L容量瓶中精確定容至刻度線，得0.466 m g/m L連翹苷對照品溶液，備用；供試品溶液的制備：精密稱取采自不同產地的連翹果實干燥粉末(過5號篩)各1.000g，至50m L錐形瓶中，加70%甲醇20m L，過夜，超聲波提取30分鐘，搖勻，濾過，靜置，取上清液移入10m L容量瓶中，稀釋至刻度，待測。

2.3 標準曲線的繪制 精密吸取0.466m g/m L連翹苷對照品溶液，加甲醇稀釋成0.023 3、0.031 1、0.0466、0.0923、0.186 4 m g/m L的連翹苷對照品溶液，依次吸取上述溶液10μL，注入H P L C色譜儀，記錄峰面積，以峰面積(A)為橫坐標，濃度(C)為縱坐標，繪制標準曲線，經回歸處理得回歸方程：

表明連翹苷含量和峰面積之間有良好的線性關系。

2.4 藥材供試品含量的測定 精密吸取藥材供試品溶液10μL進樣，采用外標法計算。結果顯示不同產地連翹苷平均含量高低順序為：山陽石頭梁＞山陽趙川＞商南＞商州＞洛南石門＞丹鳳＞洛南靈口。其中山陽石頭梁所采樣品連翹苷含量最高，均值達0.862%，其次是山陽趙川所采樣品連翹苷含量為0.782%，洛南靈口所采樣品連翹苷含量最低，為0.175%，RS D值均小于1.5%，說明山陽石頭梁所選樣方生理、生態(tài)環(huán)境最適宜連翹藥材生長，見表1。

表1 不同產地青翹中連翹苷含量測定結果(n=3)

2.5 精密度實驗 取連翹苷對照品溶液10μL，重復進樣6次，根據中藥指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)，結果均大于0.9；相對峰面積比值RS D均小于1.624%。

2.6 穩(wěn)定性實驗 取連翹藥材樣品適量，精密稱定，制備供試品溶液，分別靜置0、2、4、8、16、24小時，各吸取10μL注入色譜柱，記錄色譜峰面積，連翹苷質量分數(shù)的RS D=1.0%，說明樣品在24小時內穩(wěn)定性良好。

2.7 重現(xiàn)性實驗 取連翹藥材樣品制備供試品溶液6份，依次進樣，記錄峰面積，各主要色譜峰相對保留時間RS D均小于0.20%，相對峰面積比值的RS D均小于1.20%。

2.8 回收率實驗 精密稱取樣品1.000 g，加入連翹苷標準品適量，按照“2.2”項下方法測定，計算回收率平均值，結果RS D=1.38%。

2.9 生態(tài)環(huán)境因子 不同產地連翹苷含量差異較大，可能與各地生態(tài)環(huán)境因素及生產管理措施不同有關，山陽樣方溫度適宜，光照充足，植物光合作用較強，連翹植株株高、單株產量較高；而洛南地處中國秦嶺-淮河南北地理氣候分界線秦嶺東段，橫跨黃河、長江兩大流域，氣候涼、爽、潤，尤其作為華山之南的陽坡是一張?zhí)熨n“避暑涼床”，縣域平均溫度低于商州2～3℃，也遠低于其余各縣，見表2。

表2 不同產地生態(tài)環(huán)境因子比較

3 結論

本研究所采樣品連翹苷含量均大于中國藥典規(guī)定的0.15%［2］，且最高含量達中國藥典規(guī)定近6倍。本研究通過商洛連翹主產區(qū)不同區(qū)縣所采連翹果實的連翹苷含量比較，明確了山陽石頭梁所選樣方為商洛連翹優(yōu)質產區(qū)與主要群落分布區(qū)域。

本研究采用H P L C-R P B P CF法對連翹藥材的主成份連翹苷含量進行了測定，采用外標法進行定量計算，并進行了精密度、穩(wěn)定性、重現(xiàn)性和回收率實驗，RS D值均小于2.0%，說明藥材穩(wěn)定性好，精密度、重現(xiàn)性和回收率良好。

連翹的藥用成份較多，關于研究方法的報道也逐年增加。崔洋等［15］對連翹進行了高效液相色譜指紋圖譜研究；袁敏等［16］利用氣相色譜對連翹藥材進行了指紋圖譜研究，連翹藥材的主成份連翹苷的含量能夠反映連翹藥材的基本質量，是評價連翹藥材質量的重要指標［17-18］；朱小強等［19-20］對商洛連翹G A P栽培技術和增產效果進行了研究，有力推動了商洛連翹的規(guī)范化種植。本研究按照中國藥典，采用科學分析方法，明確商洛連翹優(yōu)質產區(qū)與主要群落分布區(qū)域。然而，商洛連翹藥材主成份連翹苷優(yōu)質產區(qū)的土壤養(yǎng)分等相關影響因素研究及連翹其他藥用成份對比研究有待進一步展開。

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Com parison of Phillyrin Contents in LianQiao from D ifferent Areasof Shangluo

SONG Xiaojun,LIYuqin,LEILi,LIHuimin,GAO Jiren
Shangluo Vocational and Technological College,Shangluo 726000,China

Objective:To compare the effective contents of phillyrin(C27H34Oll)in LianQiao(forsythia suspensa vahl)of differentplaces in Shangluo.Method:High Performance Liquid Chromatography(HPLC)wasused to detect the phillyrin contents in Lianqiao from different producing areas.Results:The phillyrin contents in LianQiao fruits of differentareas varied sharply;the contents in the samplesof Shitouliang in Shanyang county were the highest,in the samplesof Zhaochuan in Shanyang countywere the higherand in the samplesof Lingkou in Luonan countywere the least.Conclusion:Thegreatdifferencesare presented in thephillyrin contentsof LianQiao of differentareas,induced by ecologicalenvironment factorsof LianQiao's different producing placesand the differentproducing managementmeasurement.

HPLC;phillyrin;content;Shangluo

R284.1

A

1004-6852(2015)03-0029-03

2014-04-02

陜西省商洛市科技局科技項目(編號SKJ2010-07)。

宋小俊(1966—)，女，碩士學位，副教授。研究方向：中草藥有效成分提取、分離、鑒定及分析。