隆旭紅，金文麗，劉光斌

1嘉峪關(guān)市食品藥品檢驗(yàn)所，甘肅 嘉峪關(guān) 735100；2酒泉醫(yī)院

HPLC法測(cè)定香菊膠囊中總黃酮的含量

隆旭紅1，金文麗1，劉光斌2△

1嘉峪關(guān)市食品藥品檢驗(yàn)所，甘肅 嘉峪關(guān) 735100；2酒泉醫(yī)院

目的：建立HPLC測(cè)定香菊膠囊中總黃酮含量的方法。方法：采用Unimicro Technologies, Inc.4.6×250 Daiso SP-120-5-ODS-AP色譜柱，梯度洗脫，流動(dòng)相A為甲醇，B為0.05mol/L磷酸溶液，流速為0.8mL/min,檢測(cè)波長(zhǎng)為257nm，室溫下進(jìn)樣量20μL。結(jié)果：線性范圍分別為10.34～165.36μg/mL(R2=0.9999),平均回收率為100.6%，RSD為0.56%(n=9)。結(jié)論：該方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、靈敏、重現(xiàn)性好，可作為香菊膠囊中總黃酮含量的測(cè)定方法。

高效液相色譜法；香菊膠囊；總黃酮；含量測(cè)定

香菊膠囊是治療急慢性鼻竇炎、鼻炎的特效中成藥。化香樹(shù)果序是該藥治療鼻竇炎以及傷風(fēng)鼻塞、鼻窒(急慢性鼻炎)的主藥，具有清熱解毒、活血化瘀、消腫排膿、通竅止痛的功效，主要化學(xué)成分為黃酮類(lèi)化合物，具有抗菌、消炎、抗突變、降壓、鎮(zhèn)靜、利尿、抗氧化等功效［1］?，F(xiàn)代研究表明鼻竇炎的病因是病菌感染，致病菌多為化膿性桿菌如肺炎雙球菌、溶血性鏈球菌等，其次為桿菌，如流感桿菌、大腸埃希菌等，多數(shù)為混合感染，而黃酮類(lèi)化合物具有較強(qiáng)的抗菌作用［2］。因此建立定量檢測(cè)總黃酮含量的方法，用于香菊膠囊質(zhì)量控制是非常必要的。

1 儀器與試藥

L C-20A T高效液相色譜儀；U-3900H紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)；M E TT L ERE L204-I C、M E TT L ER M S205D U電子天平。甲醇為色譜純；磷酸為分析純；水為超純水；蘆丁對(duì)照品(100080-200707)購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定所；樣品香菊膠囊由山東步長(zhǎng)制藥股份有限公司生產(chǎn)(批號(hào)：130451)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn) 色譜柱：U ni m i cro T ec h n o l o g i es，I n c.4.6×250 D a i so S P-120-5-O D S-A P；流動(dòng)相：甲醇為流動(dòng)相A，0.05m o l/L磷酸為流動(dòng)相B；流速：0.8 m L/m in，檢測(cè)波長(zhǎng)：257 n m，進(jìn)樣體積：20μL，梯度洗脫；理論板數(shù)以蘆丁峰計(jì)，應(yīng)不低于3 000，見(jiàn)表1、圖1。

表1 梯度洗脫程序

圖1 色譜圖

2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱(chēng)取120℃減壓干燥至恒重的蘆丁對(duì)照品25.84 m g，置25 m L量瓶中，加甲醇約20m L水浴微熱使溶解，放冷，再用甲醇稀釋至刻度，搖勻，備用。

2.3 對(duì)照品溶液的制備 精密量取對(duì)照品溶液2.0m L置50m L量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻。

2.4 供試品溶液的制備 取供試品60粒的內(nèi)容物，精密稱(chēng)定，混勻，取內(nèi)容物約3 g，精密稱(chēng)定，置索氏提取器中，加乙醚120m L，加熱回流2小時(shí)，放冷，棄去乙醚液。再加甲醇90m L，加熱回流2小時(shí)，移至100m L量瓶中，用甲醇洗滌容器，洗液并入量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。

2.5 線性關(guān)系考察 取上述對(duì)照品溶液，分別進(jìn)樣5、10、20、40、60、80μL，記錄色譜圖，以濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程為A=8.70×105C-4.07×105(r2=0.9999)，表明濃度與峰面積在10.34～165.36μg/m L范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.6 檢出限與定量限 精密量取對(duì)照品溶液，用甲醇逐級(jí)稀釋后取20μL在“2.1”項(xiàng)色譜條件下測(cè)定，記錄色譜圖，并對(duì)色譜系統(tǒng)進(jìn)行基線檢測(cè)。分別以信噪比3∶1與10∶1考察檢測(cè)限和定量限。檢出限為0.02μg/g，定量限為0.06μg/g。

2.7 精密度實(shí)驗(yàn) 精密量取對(duì)照品溶液20μL，連續(xù)進(jìn)樣5次，記錄色譜圖，以峰面積計(jì)算，RS D為0.47%。結(jié)果表明儀器的精密度良好。

2.8 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取混合對(duì)照品溶液，按“2.1”項(xiàng)色譜條件，于0、2、4、8、12、24小時(shí)進(jìn)樣，記錄色譜圖，結(jié)果峰形無(wú)改變，峰面積的RS D為0.64%，表明對(duì)照品溶液在24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。

2.9 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 取已測(cè)總黃酮含量的同一批號(hào)(130451)約3 g，共9份，3份為1組，分別精密加入對(duì)照品溶液3.2、4.0、4.8 m L，即按對(duì)照品溶液濃度的80%、100%、120%配制，置100m L量瓶中，按“2.4”項(xiàng)制備，在“2.1”項(xiàng)色譜條件下，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算回收率，平均回收率為100.6%，RS D為0.56%(n=9)。結(jié)果表明本法有良好的回收率。

2.10 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 選取市售同一批號(hào)(130451)樣品60粒的內(nèi)容物，精密稱(chēng)定，混勻，精密稱(chēng)取約3 g共5份，按“2.4”項(xiàng)制備。分別精密量取混合對(duì)照品溶液和供試品溶液20μL，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算其含量，結(jié)果分別為：10.26、10.47、10.44、10.41、10.36m g/粒，RS D為0.79%。

2.11 耐用性實(shí)驗(yàn) 對(duì)照品溶液和供試品溶液于“2.1”項(xiàng)色譜條件下，分別用下列色譜柱測(cè)定：T h er m o O D S-2 H YP ERS I L 250mm×4.6mm，5μm色譜柱；I n erts i l O D S(250 mm×4.6 mm，5μm)色譜柱，結(jié)果表明含總黃酮分別為10.42 m g/粒，RS D=0.68%(n=5)；10.34m g/粒，RS D=0.82%(n=5)，且峰形良好，各性能參數(shù)均達(dá)實(shí)驗(yàn)要求，說(shuō)明本法耐用性好。

3 討論

3.1 波長(zhǎng)的選擇 通過(guò)紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)在190～330 n m的波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，在257 n m波長(zhǎng)處均有良好的吸收，故本研究選擇在257 n m測(cè)定。

3.2 色譜條件的選擇 先采用乙腈-水為流動(dòng)相，不斷改變比例，出峰時(shí)間太快且峰形不好，再選擇甲醇-水為流動(dòng)相，不斷改變比例，峰面積不穩(wěn)定，且峰形不好。故本研究選擇甲醇-0.05 m o l/L磷酸溶液，進(jìn)行梯度洗脫，能夠保證各參數(shù)的要求，并能保證供試品中被檢成分與相鄰峰之間的分離度。

3.3 樣品的預(yù)處理［3］先采用甲醇超聲30分鐘提取，過(guò)濾，測(cè)定，得到的總黃酮量少，提取不完全，且雜質(zhì)較多，分離不好。本研究先用乙醚加熱回流提取2小時(shí)，棄去乙醚液，再用甲醇加熱提取2小時(shí)，使黃酮類(lèi)化合物被提取到甲醇液中，保證了提取液成分的較單一性和提取的完全性，達(dá)到含量的準(zhǔn)確性，且分離度符合要求。

［1］ 黃河勝，馬傳庚，陳志武.黃酮類(lèi)化合物藥理作用研究進(jìn)展［J].中國(guó)中藥雜志，2000，25(10)：589-592．

［2］ 高蓉，李穩(wěn)宏，劉明霞，等.化香樹(shù)果序中總黃酮不同提取方法對(duì)比研究［J].食品科學(xué)，2007，28(8)：230-232．

［3］ 李冬，李穩(wěn)宏，廉媛媛，等.化香樹(shù)果序總黃酮提取動(dòng)力學(xué)研究［J].天然產(chǎn)物研究與開(kāi)發(fā)，2011，23(4)：689-708.

The HPLC Determ ination of Total Flavonoids in XiangJu Capsules

LONG Xuhong1,JINWenli1,LIU Guangbin2△
1 Jia Yuguan Institute for Food and Drug Control,Jia Yuguan 735100,China;2 Jiugang Hospital

Objective:To establish a HPLCmethod for determ ination of total flavonoids in XiangJu capsules. Methods:The HPLC conditionswere follows:chromatographic column:unimicro technologies,Inc.4.6×250 Daiso SP-120-5-ODS-AP;gradient elution;mobile phase:A wasmethanol and B was 0.05 mol/L phosphoric acid;flow rate:0.8m L/m in;detection wavelength:257 nm;injection volume under room temperature:20μL.Results:The linear range of total flavonoidswas from 10.34 ug/m L to 165.36μg/m L(R2=0.999 9),the average recovery ratewas 100.6%and RSD was0.56%(n=9).Conclusion:Themethod iseasy,accurate and sensitivew ith good reproduction, therefore itcan beused to determ ine the contentsof total flavonoids in XiangJu capsules.

HPLC;XiangJu capsule;total flavonoids;contentdeterm ination

R284

A

1004-6852(2015)03-0032-03

2014-02-22

隆旭紅(1968—)，男，副主任藥師。研究方向：藥物分析。

△通訊作者：劉光斌(1970—)，男，主任藥師。研究方向：藥物分析、醫(yī)院制劑及臨床藥學(xué)。