潘程程，李 巖

健脾消食1號(hào)對(duì)脾虛大鼠胃排空及胃腸激素的影響

潘程程，李 巖*

目的 建立功能性消化不良脾虛大鼠的模型，研究健脾消食1號(hào)對(duì)其胃排空及血清胃腸激素的影響，探討該方可能的作用機(jī)制。方法 60只SD大鼠，隨機(jī)分為4組：空白對(duì)照組、模型恢復(fù)組、莫沙必利組、健脾消食1號(hào)組。除空白對(duì)照組外，其余大鼠均采用勞倦過(guò)度加飲食失節(jié)法建立脾虛證大鼠模型，連續(xù)25 d，各組分別進(jìn)行生理鹽水、莫沙必利、健脾消食1號(hào)灌胃，連續(xù)1周，取材，測(cè)量胃排空率、胃腸激素。結(jié)果 與模型恢復(fù)組比較，健脾消食1號(hào)組胃排空增加，血清GAS增加，SS下降。結(jié)論 健脾消食1號(hào)可影響脾虛大鼠血清胃腸激素釋放，促進(jìn)胃排空，這可能是其臨床作用的機(jī)制之一。

健脾消食1號(hào)；功能性消化不良；脾虛；胃腸激素；胃排空率

0 引言

功能性消化不良(Functional dyspepsia,FD)指上腹部疼痛和/或燒灼感、餐后飽脹不適和早飽感的癥狀源于胃十二指腸區(qū)域,但缺乏可能解釋上述癥狀的器質(zhì)性、系統(tǒng)性和代謝性疾病的一組臨床綜合征。不同國(guó)家的流行病學(xué)研究調(diào)查顯示,FD發(fā)病率高，療效不佳，已成為困擾人們生活和工作的疾病[1-3]。其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，與胃動(dòng)力異常、內(nèi)臟高敏感性、幽門(mén)螺桿菌感染、心理因素、胃腸激素、胃酸分泌過(guò)多、基因因素等多種因素相關(guān)，其中胃腸動(dòng)力異常和胃腸激素在發(fā)病過(guò)程中起重要作用[4-5]。本文以FD脾虛大鼠為研究對(duì)象，觀察健脾消食1號(hào)對(duì)其胃排空及血清胃泌素(GAS)、P物質(zhì)(SP)、生長(zhǎng)抑素(SS)的影響，從而探討該方治療FD脾虛證的可能作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動(dòng)物 健康SPF級(jí)雄性SD大鼠60只，體重(200±20)g，由中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供[許可證號(hào)：SCXK(遼)2003-0013]。

1.1.2 藥物與制備 健脾消食1號(hào)，由太子參10 g、茯苓20 g、炒白術(shù)15 g、炙甘草10 g、砂仁10 g、炒雞內(nèi)金10 g、厚樸15 g、炒麥芽10 g、焦山楂10 g組成，購(gòu)于遼寧中醫(yī)藥大學(xué)藥局，按照中藥常規(guī)煎法制成相當(dāng)于生藥1.1 g/mL的煎劑，4 ℃冰箱保存?zhèn)溆茫?枸櫞酸莫沙必利，5 mg/片，住友制藥有限公司，批號(hào):2814C，每日給藥前用蒸餾水配制成0.15 g/L的溶液； 硫噴妥鈉，上海新亞藥業(yè)有限公司，批號(hào)：020102，使用前用滅菌注射用水配制成2.5%溶液。

1.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑與儀器 羧甲基纖維素，宜興市通達(dá)化學(xué)有限公司，批號(hào):1107013； 營(yíng)養(yǎng)性半固體糊的制備[6]：取5 g羧甲基纖維素溶于100 mL蒸餾水中，分別加入奶粉8 g、糖4 g、淀粉4 g,2 mL碳素墨水及蒸餾水，配成半固體糊150 mL，置冰箱中冷藏保存，使用前2 h取出，恢復(fù)常溫。Rat GAS Elisa 試劑盒(R&D Systems Inc.,USA)；Rat SS Elisa 試劑盒(R&D Systems Inc.,USA)；Rat SP Elisa 試劑盒(R&D Systems Inc.,USA)；電子天平(0.01 g)：TE612-L，北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司；低速離心機(jī)：SC-3612，安徽中科中佳科學(xué)儀器有限公司； 吸收光酶標(biāo)儀：ELx808，Biotek,USA。

1.2 方法

1.2.1 造模方法 采用飲食失節(jié)+力竭游泳方法造模：雙日自由進(jìn)食水，喂飼精煉豬油(1.5 mL/100 g)1次，單日禁食不禁水，喂飼甘藍(lán)10～15 g/只，以達(dá)到飲食不節(jié)；并在單日將大鼠置于盛有溫水[水溫(22±1) ℃，水深50 cm]的塑膠桶中游泳至力竭(大鼠水中旋轉(zhuǎn)、運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)性明顯下降，水淹沒(méi)鼻尖，身體下沉，至再次浮出水面超過(guò)10 s，連續(xù)3次[7-8])1次，以達(dá)到勞倦過(guò)度，共25 d。大鼠出現(xiàn)活動(dòng)減少、倦臥少動(dòng)、扎堆、瞇眼、拱背、反應(yīng)遲鈍、皮毛干枯欠光澤,捉拿時(shí)反抗無(wú)力,進(jìn)食減少、漸見(jiàn)體型瘦弱、體重下降或增長(zhǎng)緩慢，軟便或便溏,造模成功[9]。

1.2.2 分組及處理 大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，隨機(jī)分為空白對(duì)照組、模型恢復(fù)組、莫沙必利組和健脾消食1號(hào)組,每組15只。除空白對(duì)照組正常飼養(yǎng)外,其余三組均造模，造模成功后給藥，健脾消食1號(hào)、莫沙必利根據(jù)人和鼠給藥劑量換算公式[10]進(jìn)行計(jì)算，健脾消食1號(hào)組予健脾消食1號(hào)7.2 mL/(kg·d)，莫沙必利組予莫沙必利7.2 mL/(kg·d)，模型恢復(fù)組和空白對(duì)照組予生理鹽水7.2 mL/(kg·d)，共1周。

1.2.3 觀察指標(biāo)及方法 胃腸激素測(cè)定:末次給藥后禁食不禁水，24 h后予半固體糊2 mL灌胃，1 h后硫噴妥鈉(40 mg/kg)腹腔內(nèi)注射麻醉,迅速打開(kāi)腹腔，于腹主動(dòng)脈采血,靜置,3 000 r/min離心15 min,取上清液,-20 ℃保存。參照試劑盒步驟用ELISA法檢測(cè)血清中GAS、SP、SS的濃度。胃排空率測(cè)定: 采血后立即結(jié)扎賁門(mén)和幽門(mén),剪取胃,稱(chēng)胃全質(zhì)量,沿胃大彎剪開(kāi)胃體,洗去胃內(nèi)容物后,拭干后稱(chēng)胃凈質(zhì)量。按公式：胃排空率=1-[(胃全質(zhì)量-胃凈質(zhì)量)/灌胃質(zhì)量]×100%。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠胃排空率比較 與空白對(duì)照組比較，模型恢復(fù)組胃排空率降低(P<0.01)；莫沙必利組、健脾消食1號(hào)組雖略有降低，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。與模型恢復(fù)組比較，莫沙必利組、健脾消食1號(hào)組胃排空率提高(P<0.01，P<0.05)。莫沙必利組與健脾消食1號(hào)組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

表1 各組大鼠胃排空率比較

注：與空白對(duì)照組比較，**P<0.01；與模型恢復(fù)組比較，#P<0.05，##P<0.01

2.2 各組大鼠血清胃腸激素比較 與空白對(duì)照組比較，模型恢復(fù)組的血清GAS、SP降低(P<0.05)，SS升高(P<0.01)。與模型恢復(fù)組比較，莫沙必利組的GAS、SP升高(P<0.01，P<0.05)，SS降低(P<0.05)；健脾消食1號(hào)組的GAS升高(P<0.05)，SS降低(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 各組大鼠血清胃腸激素比較

注：與空白對(duì)照組比較，*P<0.05，**P<0.01；與模型恢復(fù)組比較，#P<0.05，##P<0.01

3 討論

FD是臨床常見(jiàn)的功能性胃腸疾病，包括餐后飽脹不適、早飽、上腹痛、上腹燒灼感，可分為餐后不適綜合征(PDS)和上腹痛綜合征(EPS)。一項(xiàng)全球性調(diào)查統(tǒng)計(jì)顯示，以上腹痛為診斷標(biāo)準(zhǔn)的消化不良患病率為7%～34.2%，以上消化道癥狀為標(biāo)準(zhǔn)的消化不良患病率高達(dá)23%～45%[11]。因其病情反復(fù)、療效欠佳，嚴(yán)重影響人們生活質(zhì)量并增加患者的精神及經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。FD的發(fā)病機(jī)制亦成為學(xué)者們研究的熱點(diǎn)，目前認(rèn)為主要與胃動(dòng)力異常、心理因素、胃酸分泌過(guò)多、內(nèi)臟高敏感性、幽門(mén)螺桿菌感染、基因因素、成長(zhǎng)環(huán)境、飲食、生活方式等因素有關(guān)，治療上主要為促動(dòng)力藥、抑酸藥、抗抑郁藥等[12-13]。

現(xiàn)代中醫(yī)認(rèn)為，F(xiàn)D可歸于嘈雜、胃脘痛、痞證等范疇[14]，其病位在胃，涉及肝、脾，目前研究多認(rèn)為FD與脾胃關(guān)系最為密切，因勞倦傷脾、飲食傷胃等多因素使脾胃運(yùn)化失職、脾胃氣機(jī)升降失常所致，脾胃虛弱是發(fā)病基礎(chǔ)，因而補(bǔ)益脾胃應(yīng)貫穿本病整個(gè)治療過(guò)程[15-18]。我們根據(jù)多年的臨床經(jīng)驗(yàn)以及既往的藥理研究[19-23]、參照《太平惠民和劑局方》的經(jīng)典方劑四君子湯加減組方，擬定健脾消食1號(hào)，本方以太子參、白術(shù)、茯苓健脾益氣，焦山楂、炒麥芽、雞內(nèi)金健胃消食，砂仁、厚樸行氣導(dǎo)滯，炙甘草調(diào)和諸藥，共奏健脾滲濕、消食行氣之功效，使脾氣健運(yùn)，恢復(fù)脾胃受納與健運(yùn)之職，進(jìn)而改善脾虛癥狀。 胃腸激素是由胃腸內(nèi)分泌細(xì)胞合成和釋放的多種活性物質(zhì),對(duì)胃腸運(yùn)動(dòng)調(diào)節(jié)的機(jī)制比較復(fù)雜，主要通過(guò)內(nèi)分泌、旁分泌、自分泌方式及神經(jīng)遞質(zhì)作用調(diào)節(jié)胃腸運(yùn)動(dòng)，其分泌紊亂是功能性胃腸病的發(fā)病機(jī)制之一。GAS是調(diào)節(jié)胃腸動(dòng)力的一種激素[24]，其既可以增強(qiáng)食管下括約肌的收縮活動(dòng)[25]，減少胃食管反流，又可以促進(jìn)胃蠕動(dòng)[26]。有研究發(fā)現(xiàn)，內(nèi)源性胃泌素的釋放可升高餐后胃電頻率，進(jìn)而增強(qiáng)胃收縮性[27-28]。胃泌素對(duì)胃體、胃竇、幽門(mén)均有收縮作用，其中胃竇最強(qiáng)，胃體最弱[29-30]，這與近端胃保持緊張性收縮、遠(yuǎn)端胃的節(jié)律性收縮相吻合，進(jìn)而促進(jìn)胃排空[31]。SP作為神經(jīng)遞質(zhì)調(diào)節(jié)因子發(fā)揮作用，其對(duì)胃腸縱行肌和環(huán)行肌有雙重收縮效應(yīng)[32-33]，有研究表明，SP能顯著增加大鼠的內(nèi)臟敏感性，促進(jìn)排泄[34],進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，SP主要是作用于小腸Cajal細(xì)胞(ICC)[35]，通過(guò)NK-1受體[36]影響小腸移行性復(fù)合運(yùn)動(dòng)(MMC)的發(fā)生頻率和持續(xù)時(shí)間[37]，發(fā)揮對(duì)胃腸運(yùn)動(dòng)的調(diào)節(jié)作用，進(jìn)而促進(jìn)糞便排泄。SS是一種廣泛分布于消化道系統(tǒng)的腦腸肽，對(duì)多種生理功能均具有抑制性作用。其既可以通過(guò)神經(jīng)內(nèi)分泌作用直接起效，還可通過(guò)抑制其他胃腸激素而間接性抑制胃腸[38]。大量研究證實(shí)，生長(zhǎng)抑素可延緩胃排空，對(duì)全腸道推進(jìn)活動(dòng)有強(qiáng)大的抑制效應(yīng)，進(jìn)而降低排便次數(shù)[39-42]。Abdu等[43]通過(guò)鼠離體空腸研究發(fā)現(xiàn)，生長(zhǎng)抑素可通過(guò)影響啟動(dòng)胃腸運(yùn)動(dòng)的腸道神經(jīng)元電活動(dòng),減少小腸的移行性復(fù)合運(yùn)動(dòng)。

本研究結(jié)果顯示，模型恢復(fù)組大鼠胃排空率減慢，血清GAS、SP含量明顯下降，血清SS含量明顯升高，與空白對(duì)照組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，這與文獻(xiàn)報(bào)道一致[30-31，44]，而經(jīng)1周治療后,健脾消食1號(hào)組、莫沙必利組胃排空率顯著增加，血清GAS、SP含量增加，SS含量下降，除血清SP外，均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。綜上所述，F(xiàn)D的發(fā)病與胃腸動(dòng)力障礙和胃腸激素分泌紊亂有關(guān)，健脾消食1號(hào)可以調(diào)節(jié)脾虛大鼠血清GAS、SP、SS含量，這可能是其治療FD的作用之一，為臨床上應(yīng)用健脾消食1號(hào)治療FD提供了一定的理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)，但其具體是通過(guò)哪條調(diào)節(jié)通路而發(fā)揮作用有待于進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)探討。

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Effect of Jianpixiaoshi Ⅰ decoction on gastrointestinal hormones and gastric emptying rate of rat with spleen deficiency

PAN Cheng-cheng, LI Yan*

( Department of Gastroenterology, Shengjing Hospital of China Medical University,Shenyang 110004,China)

Objective To observe the effect of Jianpixiaoshi I decoction (JPXS-1)on serum levels of gastrin (GAS),substance P(SP),somatostatin(SS) and gastric emptying rate (GER) in ratswith spleen deficiency-functional dyspepsia (FD),and to analyze the mechanisms.Methods Sixty male SD rats were randomly divided into four groups: blank control group(BCG,n=15),model recovery group(MRG,n=15),mosapride group(MG,n=15),Jianpixiaoshi I group(JPXSG,n=15).Except the BCG,FD was induced in rats of another groups by swimming to exhaustion every other day and alternative feeding of cabbage and lard for 25 d.MG and JPXSG rats were then intragastrically administered with mosapride and JPXS-1 for 7d (once daily),BCG and MRG rats were given equal volume of physiological saline.All rats were fasted for 24h with free access to water when the treatment was discontinued.The GER was detected,the concentration of serum GAS,SP and SS were measured by ELSIA.Results The GER and level of GAS in JPXSG were higher than those of MRG (P<0.05),and the level of SS in JPXSG was lower than that of MRG (P<0.05).Conclusion JPXS-1 could influence the release of gastrointestinal hormones (included GAS and SS)and promote gastric emptying in FD rats,and it might be the mechanism for the treatment of FD.

Jianpixiaoshi I(JPXS-1);Functional dyspepsia(FD);Spleen deficiency; Gastrointestinal hormones;Gastric emptying rate (GER)

2014-12-23

中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院消化內(nèi)科，沈陽(yáng) 110004

遼寧省科學(xué)技術(shù)廳藥物源頭科研基金

10.14053/j.cnki.ppcr.201506003

*通信作者