鄭新元,王 杰,周 軍, 劉 冰，劉雪瑩

(1.天津市藥品檢驗(yàn)所，天津 300070；2.天津市市場(chǎng)和質(zhì)量監(jiān)督管理委員會(huì)，天津 300070)

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HPLC法測(cè)定白術(shù)配方顆粒中白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ的含量

鄭新元1,王 杰1,周 軍1, 劉 冰1，劉雪瑩2

(1.天津市藥品檢驗(yàn)所，天津 300070；2.天津市市場(chǎng)和質(zhì)量監(jiān)督管理委員會(huì)，天津 300070)

目的:建立高效液相色譜法測(cè)定白術(shù)配方顆粒中白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ的含量。方法：采用HPLC法，流動(dòng)相為甲醇-水(68∶32)，流速為1.0 ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為220 nm，柱溫為35 ℃。測(cè)定處方中白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ的含量。結(jié)果：6個(gè)廠(chǎng)家12批次的白術(shù)配方顆粒中白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ含量介于0.017 9～0.090 1 mg/g之間。結(jié)論：該方法操作簡(jiǎn)便，結(jié)果穩(wěn)定可靠，可用于白術(shù)配方顆粒的質(zhì)量評(píng)價(jià)。

白術(shù)配方顆粒，HPLC，白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ

白術(shù)是我國(guó)常用中藥之一，為菊科植物白術(shù)(AtractylodesmacrocephalaKoidz)的干燥根莖，性溫，味甘、苦，具有健脾益氣、燥濕利水、止汗、安胎的功效[1]，用于治療脾虛食少、腹脹泄瀉、痰飲眩悸、水腫、自汗、胎動(dòng)不安。白術(shù)配方顆粒是將單味白術(shù)飲片經(jīng)現(xiàn)代提取技術(shù)及制劑工藝精制而成的，是供中醫(yī)臨床代替飲片用的配方顆粒。白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ是白術(shù)中主要內(nèi)酯類(lèi)成分之一，且含量較高[2]，對(duì)其進(jìn)行含量測(cè)定，可以保證臨床用藥的安全、有效，目前尚無(wú)白術(shù)配方顆粒中白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ含量測(cè)定方法的報(bào)道。因此，為有效地控制本品質(zhì)量，本文采用HPLC法對(duì)白術(shù)配方顆粒中白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ進(jìn)行含量測(cè)定。該方法操作簡(jiǎn)便、重現(xiàn)性好、專(zhuān)屬性強(qiáng)、靈敏度高、結(jié)果科學(xué)準(zhǔn)確，適合作為該品種的含量測(cè)定方法。

1 儀器與試藥

LC-10A型高效液相色譜儀；SPD-10A紫外檢測(cè)器；Anastar色譜工作站；甲醇為色譜純，水為蒸餾水，其他試劑均為分析純。白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ對(duì)照品(天津丹溪國(guó)藥研究所，含量>98%)。白術(shù)配方顆粒由廣東一方制藥有限公司(廠(chǎng)家1，批號(hào)1109054、1109055)、江陰天江藥業(yè)有限公司(廠(chǎng)家2，批號(hào)1110123、1108142)、四川新綠色藥業(yè)股份有限公司(廠(chǎng)家3，批號(hào)1108041、1110134)、北京康仁堂藥業(yè)有限公司(廠(chǎng)家4，批號(hào)101101、110601)、華潤(rùn)三九醫(yī)藥股份有限公司(廠(chǎng)家5，批號(hào)1111001s、1108012s)、培力(南寧)藥業(yè)有限公司(廠(chǎng)家6，批號(hào)A110757-02、A110288-02)提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的確定 取適量白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ對(duì)照品，加入甲醇制成一定質(zhì)量濃度的對(duì)照品溶液，以甲醇為空白，用紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)于200～400 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行波長(zhǎng)掃描。掃描結(jié)果表明，白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ在220 nm附近有最大吸收，故選定220 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。

2.2 色譜條件 色譜柱：迪馬公司Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動(dòng)相：甲醇-水(68∶32)；流速：1.0 ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：220 nm；柱溫：35 ℃；進(jìn)樣量：20 μl。理論板數(shù)按白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ計(jì)算應(yīng)不低于3 000。

2.3 溶液制備

2.3.1 對(duì)照品溶液的制備 取白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加甲醇制成每1 ml含0.088 mg的溶液，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液。再精密吸取3.0 ml至50 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.3.2 供試品溶液的制備 取白術(shù)配方顆粒，研細(xì)，取適量(相當(dāng)于2 g飲片)，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 ml，密塞，稱(chēng)定重量，超聲處理30 min，放冷，再稱(chēng)定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。分別取對(duì)照品溶液、供試品溶液各20 μl注入液相色譜儀，按“2.2”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，記錄色譜圖，見(jiàn)圖1。

2.4 線(xiàn)性關(guān)系考查 取0.088 mg/ml白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ對(duì)照品儲(chǔ)備液，精密吸取0.5、1.0、2.0、3.0、4.0和5.0 ml分別置50 ml量瓶中，以甲醇稀釋至刻度，搖勻。按上述色譜條件分別進(jìn)樣，測(cè)定峰面積值。以樣品濃度為橫坐標(biāo)，相應(yīng)的峰面積值為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線(xiàn)性回歸，得回歸方程Y=1 647 705.3X-2 574.14(r=0.999 8)。結(jié)果表明白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ在0.88～8.8 μg/ml范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好。

1.白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ

2.5 精密度試驗(yàn) 取線(xiàn)性關(guān)系試驗(yàn)項(xiàng)下的濃度為0.005 28 mg/ml的對(duì)照品溶液，按上述色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積值，其RSD值為0.76%，結(jié)果表明儀器精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取白術(shù)配方顆粒(批號(hào)1108041)供試品溶液，按上述色譜條件分別于0、2、4、6、8和24 h測(cè)定峰面積值，其RSD值為0.96%，結(jié)果表明供試品溶液在24 h內(nèi)測(cè)定是穩(wěn)定的。

2.7 重現(xiàn)性試驗(yàn) 取上述同一批號(hào)白術(shù)配方顆粒6份，按供試品溶液制備方法制得，依法測(cè)定峰面積值。結(jié)果RSD為0.98%。

2.8 加樣回收率試驗(yàn) 取上述同一批次白術(shù)配方顆粒，精密稱(chēng)取300 mg，平行6份，分別精密加入白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ對(duì)照品溶液(濃度為0.058 2 mg/ml)1.0 ml，補(bǔ)加甲醇至25 ml，按供試品溶液的制備方法操作，按上述色譜條件進(jìn)樣，測(cè)定峰面積值，計(jì)算回收率。結(jié)果平均回收率為100.52%，RSD為1.84%，見(jiàn)表1。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.9 樣品測(cè)定 取白術(shù)配方顆粒各廠(chǎng)家各批次樣品，按供試品溶液的制備方法制成供試品溶液。按上述色譜條件分別進(jìn)樣，測(cè)定峰面積值，計(jì)算相當(dāng)于每1g飲片的白術(shù)配方顆粒含白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ的量(mg/g)，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果(n=3)

3 討論

3.1 據(jù)報(bào)道[3，4]，白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ是白術(shù)中的化學(xué)成分之一，其能顯著抑制大鼠離體回腸的自發(fā)運(yùn)動(dòng)，致收縮力明顯降低，是抑制胃腸運(yùn)動(dòng)的有效成分，與白術(shù)的功能主治相符，可作為含量測(cè)定的指標(biāo)成分。目前中檢院尚不能提供供含測(cè)用的白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ的對(duì)照品。筆者從白術(shù)藥材中提取、分離、純化得到白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ，經(jīng)理化及紫外、紅外、質(zhì)譜、13C核磁等光譜分析，確證其結(jié)構(gòu)。通過(guò)高效液相色譜歸一法，檢測(cè)其純度為99.44%，可以作為含測(cè)用的對(duì)照品。為白術(shù)配方顆粒中白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ含量測(cè)定方法的建立奠定了基礎(chǔ)。

3.2 本研究測(cè)定了6個(gè)廠(chǎng)家12批次的白術(shù)配方顆粒中白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ的含量，其中最小值為0.017 9 mg/g，最大值為0.090 1 mg/g，平均含量為0.038 3 mg/g。從結(jié)果上看各批次之間差異較大，這可能是由于白術(shù)飲片中無(wú)白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ的含量測(cè)定的方法及標(biāo)準(zhǔn)造成的，因此制定白術(shù)飲片中白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ含量測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)勢(shì)在必行。關(guān)于這方面的研究在今后的工作中進(jìn)一步探討。

1 中國(guó)藥典[S].一部.2010：95

2 梁志遠(yuǎn)，冉曉燕，周世康.白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的化學(xué)研究進(jìn)展[J].貴州師范學(xué)院學(xué)報(bào)，2013，29(9)：29-33

3 董海燕，董亞琳，賀浪沖,等.白術(shù)抗炎活性成分的研究[J].中國(guó)藥學(xué)雜志，2007，42(14)：1055-1059

4 趙桂枝，洪學(xué)智，戴詩(shī)文，等.白術(shù)內(nèi)酯的藥理學(xué)研究進(jìn)展[J].中國(guó)藥房，2009，20(3)：230-231

Determination content of atractylenolide Ⅲ in atractylodes formula granule by HPLC

Zheng Xinyuan1, Wang Jie1, Zhou Jun1, Liu Bing1, Liu Xueying2

(1.Tianjin Institute for Drug Control, Tianjin 300070; 2.Tianjin Market and quality supervision and Management Committee, Tianjin 300070)

Objective:To establish an HPLC method for the determination of atractylenolide Ⅲ in Atractylodes Formula Granule.Methods: HPLC was performed on Dikma Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)column at 35 ℃ with a mobile phase consisting of methanol-water (68∶32). The flow rate was 1.0 ml/min. the detection wavelength was at 220 nm. Results: The contents of atractylenolide Ⅲ in Atractylodes Formula Granule from twelve batches of the products of six manufacturers ranged from 0.017 9 mg/g to 0.090 1 mg/g. Conclusion: The method is simple and reliable, and can be used for the quality evaluation of atractylodes formula granule.

atractylodes formula granule, HPLC, atractylenolide Ⅲ

2015-08-24

天津市科技支撐計(jì)劃重點(diǎn)項(xiàng)目(No.12ZCZDSY01000)

R927.2

A

1006-5687(2015)06-0020-03