林淑嫻，任麗娜，孫安盛

(1.遵義醫(yī)學(xué)院 藥理學(xué)教研室暨貴州省基礎(chǔ)藥理學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，貴州 遵義 563099；2.遵義醫(yī)學(xué)院 藥學(xué)院2011級(jí)實(shí)習(xí)生, 貴州 遵義 563099)

基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究

吳茱萸堿、吳茱萸次堿和吳茱萸總堿的小鼠急性毒性

林淑嫻1，任麗娜2，孫安盛1

(1.遵義醫(yī)學(xué)院 藥理學(xué)教研室暨貴州省基礎(chǔ)藥理學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，貴州 遵義 563099；2.遵義醫(yī)學(xué)院 藥學(xué)院2011級(jí)實(shí)習(xí)生, 貴州 遵義 563099)

目的 觀察吳茱萸堿、吳茱萸次堿和吳茱萸總堿的急性毒性，為吳茱萸堿類的深入研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法 昆明種小鼠，清潔級(jí)，雌雄兼用，隨機(jī)分為4組：空白對(duì)照、吳茱萸堿、吳茱萸次堿和吳茱萸總堿組。各給藥組分別單次灌胃給藥2 g/kg，無小鼠死亡。然后進(jìn)行單次灌胃最大給藥量(5g/kg)實(shí)驗(yàn)，連續(xù)觀察14 d。觀察小鼠一般指標(biāo)及體重變化；分別在給藥后2 h、8 h、1 d、7 d和14 d測定血清谷氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、肌酐(Crea)和尿素(Urea)的濃度；同時(shí)進(jìn)行心、肝、脾、肺、腎和腦組織病理學(xué)觀察，并計(jì)算臟器指數(shù)。結(jié)果 在觀察的14 d內(nèi)無小鼠死亡。與空白對(duì)照組比較，吳茱萸3種生物堿給藥小鼠的皮毛、行為活動(dòng)、呼吸、精神狀態(tài)、飲食等均未見明顯異常改變。測定藥后2 h、8 h、24 h、7 d和14 d ALT、AST、Crea、Urea 及主要臟器指數(shù)，與對(duì)照組沒有明顯差異。肉眼及組織病理學(xué)觀察沒有異常發(fā)現(xiàn)。吳茱萸堿組于給藥后7 d 和14 d 時(shí)，體重較對(duì)照組呈下降趨勢，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論 小鼠分別單次灌胃吳茱萸堿、吳茱萸次堿或吳茱萸總堿最大給藥量5g/kg，連續(xù)觀察14 d，未見明顯毒性。

吳茱萸堿；吳茱萸次堿；吳茱萸總堿；急性毒性；小鼠

吳茱萸是我國常用中藥，為蕓香科植物吳茱萸Euodiarutaecarpa(Juss)Benth、石虎Euodiarutaecarpa(Juss.)Benthvar.officinalis(Dode)Huang或疏毛吳茱萸Euodiarutaecarpa(Juss.)Benth.Var.bodinieri(Dode)Huang干燥近成熟果實(shí)，其味苦，性辛熱，有小毒，具有散寒止痛，降逆止嘔，助陽止瀉等功效[1]。在我國用其治療頭痛、腹痛、產(chǎn)后出血、痢疾等病癥已有數(shù)百年的歷史[2]。近年來國內(nèi)外對(duì)吳茱萸的化學(xué)成分和藥理作用進(jìn)行了大量的研究，發(fā)現(xiàn)吳茱萸所含生物堿是其藥理活性的主要成分[3-4 ]。近期報(bào)道，吳茱萸水和醇提組分具有明顯的肝毒性，其對(duì)肝臟的損害呈現(xiàn)“量-毒”關(guān)系[5-8 ]。有關(guān)吳茱萸生物堿類的毒性，目前尚未見有報(bào)道，我們對(duì)吳茱萸所含主要生物堿，吳茱萸堿、吳茱萸次堿和吳茱萸總堿進(jìn)行了小鼠急性毒性的研究，為吳茱萸的深入研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試藥 吳茱萸總堿(批號(hào)：ZL140410593，純度98.2%)，吳茱萸堿(批號(hào)：ZL140215968，純度98.6%)和吳茱萸次堿(批號(hào)：ZL140308269，純度98.5%)均購自南京郎澤醫(yī)藥科技有限公司。

1.2 儀器 電子天平(德國賽多利斯公司)，PUZS-300全自動(dòng)生化分析儀(德國貝朗醫(yī)療有限公司)。

1.3 動(dòng)物 昆明種小鼠(SPF級(jí))，雌雄各半，體重18～22g，6周齡，由第三軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量合格證號(hào)SCXK-(軍)2012-0003。

1.4 預(yù)實(shí)驗(yàn)及最大給藥量實(shí)驗(yàn) 小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)3 d，給藥前禁食、自由飲水12 h。受試小鼠雌雄各半，隨機(jī)分為4組，空白對(duì)照組、吳茱萸總堿組、吳茱萸堿組和吳茱萸次堿組。預(yù)實(shí)驗(yàn)各組小鼠5只，雌雄兼用，各給藥組小鼠1次灌胃給藥2 g/kg，觀察14 d無小鼠死亡，然后進(jìn)行最大給藥量實(shí)驗(yàn)[9]。小鼠最大灌胃給藥濃度及給藥容量(0.4 mL/10 g體重)5 g/kg體重，空白對(duì)照組灌胃等容量生理鹽水。

1.4.1 急性毒性一般指標(biāo)觀察及體重變化 每組小鼠10只，觀察各組小鼠的外觀、行為活動(dòng)、呼吸、精神狀態(tài)、飲食、粘膜、排泄物、體重及死亡情況。給藥后2 h內(nèi)，每15分鐘觀察1次；3～6 h內(nèi)，每30分鐘觀察1次；7～12 h內(nèi)，每1小時(shí)觀察1次；此后每天觀察1次，連續(xù)14 d。給藥后1、7和14 d測小鼠體重。

1.4.2 肝、腎功能檢測 分別于給藥后2 h、8 h、1 d、7 d和14 d(每時(shí)間點(diǎn)小鼠8只)小鼠眼球取血，離心3 500 rpm，10 min，制備血清，測定血清中谷氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、肌酐(Crea)和尿素(Urea)的濃度。

1.4.3 大體解剖及病理學(xué)檢查 動(dòng)物數(shù)及處死時(shí)間同1.4.2，行肉眼及病理學(xué)觀察心、肝、脾、肺、腎、腦等主要臟器的改變，并計(jì)算臟器指數(shù)，臟器指數(shù)=器官重量(g)/體重(g)×100%。

2 結(jié)果

在預(yù)試驗(yàn)中，分別單次灌胃吳茱萸3種生物堿2g/kg，各組在觀察的14 d 內(nèi)，未見小鼠死亡，無法測出LD50，故進(jìn)行最大給藥量的測定。各給藥組小鼠1次灌胃最大給藥濃度及給藥容量(0.4 mL/10g體重)5 g/kg，觀察14 d，無小鼠死亡。

2.1 吳茱萸3種生物堿最大給藥量對(duì)小鼠一般指標(biāo)及體重的影響 各組小鼠1次灌胃最大給藥量5 g/kg體重，在觀察的14 d 內(nèi)，小鼠的皮毛、行為活動(dòng)、精神狀態(tài)、飲食和大小便及其顏色，與空白對(duì)照組比較，未見異常，鼻、眼和口無異常分泌物。在給藥后的14 d，各組小鼠的體重均有所增加，與空白對(duì)照組比較，吳茱萸堿給藥組體重的增加有下降趨勢，但沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；吳茱萸總堿和吳茱萸次堿組體重的變化與空白對(duì)照組相似(見圖1)。

圖1 小鼠的體重曲線

2.2 吳茱萸3種生物堿最大給藥量對(duì)肝、腎功能的影響 各組小鼠于給藥后2 h、8 h、1 d、7 d和14 d的生化檢測結(jié)果(見表1～5)，與空白對(duì)照組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

組別 ALT(U/L)AST(U/L)Urea(mol/L)Crea(μmol/L)空白對(duì)照組42．15±3．07144．45±9．277．75±0．3011．80±0．19吳茱萸總堿44．45±3．30147．30±9．907．88±0．3811．15±0．28吳茱萸堿 50．60±5．31146．15±6．267．75±0．2611．30±0．26吳茱萸次堿48．45±3．96150．85±8．4677．48±0．2811．45±0．22

各組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

組別 ALT(U/L)AST(U/L)Urea(mol/L)Crea(μmol/L)空白對(duì)照組33．35±14．21141．70±30．827．90±1．5211．95±0．27吳茱萸總堿38．40±13．65150．85±31．969．54±2．6011．90±0．49吳茱萸堿 42．00±17．40141．20±27．997．83±1．7811．15±0．35吳茱萸次堿40．55±13．52140．00±32．507．17±1．1411．20±0．33

各組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

組別 ALT(U/L)AST(U/L)Urea(mol/L)Crea(μmol/L)、空白對(duì)照組31．05±9．21139．90±19．428．01±1．159．25±1．07吳茱萸總堿32．35±9．26135．95±24．197．89±0．868．35±0．86吳茱萸堿 33．35±10．33136．90±30．718．17±1．869．69±1．34吳茱萸次堿30．25±10．38134．10±19．537．99±1．538．90±1．37

各組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

組別 ALT(U/L)AST(U/L)Urea(mol/L)Crea(μmol/L)空白對(duì)照組37．60±14．39146．60±43．518．26±0．7611．64±2．53吳茱萸總堿38．85±12．25131．10±19．467．81±1．4111．11±2．42吳茱萸堿 43．60±19．67147．05±27．538．54±1．3410．72±1．92吳茱萸次堿41．15±15．09142．45±28．197．97±1．1011．49±2．29

各組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

組別 ALT(U/L)AST(U/L)Urea(mol/L)Crea(μmol/L)空白對(duì)照組36．70±6．83143．54±5．749．06±1．0113．60±0．31吳茱萸總堿36．70±4．38139．35±6．479．51±1．5512．85±0．31吳茱萸堿 38．45±7．74143．35±6．209．25±1．4712．50±0．39吳茱萸次堿37．15±7．46151．50±5．148．67±0．8913．20±0．43

各組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

2.3 吳茱萸3種生物堿最大給藥量主要臟器的病理學(xué)檢查 各組小鼠分別于給藥后2 h、8 h、1 d、7 d和14 d處死小鼠，肉眼觀察沒有發(fā)現(xiàn)心、肝、脾、肺、腎、腦異常改變，病理學(xué)檢查未見異常(見圖2～6)，與空白對(duì)照組比較，臟器指數(shù)無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

圖2 藥后2 h對(duì)小鼠主要臟器指數(shù)的影響

圖3 藥后8 h對(duì)小鼠主要臟器指數(shù)的影響

圖4 藥后1 d對(duì)小鼠主要臟器指數(shù)的影響

圖5 藥后4 d對(duì)小鼠主要臟器指數(shù)的影響

圖6 藥后14 d對(duì)小鼠主要臟器指數(shù)的影響

3 討論

吳茱萸是中醫(yī)臨床常用藥材，植物化學(xué)研究表明，其化學(xué)成分主要含有生物堿、黃酮苷類化合物、揮發(fā)油、苦味素等[10]。吳茱萸的主要活性成分為生物堿，如吳茱萸堿、吳茱萸次堿、羥基吳茱萸堿、去氫吳茱萸因堿等。近年來，對(duì)吳茱萸堿和吳茱萸次堿的藥理學(xué)研究越來越多，但卻未見到有關(guān)其毒性的報(bào)道。我國藥典和文獻(xiàn)均注明吳茱萸有小毒，臨床時(shí)有個(gè)案報(bào)道服用吳茱萸水煎劑中毒[11-12]，主要表現(xiàn)為腹痛、中樞神經(jīng)系統(tǒng)癥狀等。近來報(bào)道：小鼠單次灌服吳茱萸水提組分32.5 g/kg，導(dǎo)致血清AST 和ALT升高，于藥后2 h 達(dá)高峰，肝臟指數(shù)明顯升高；病理學(xué)檢查顯示給藥8～72 h 肝組織可見明顯損傷，且呈量-毒關(guān)系[5]。鑒于上述報(bào)道，我們?cè)谛∈蠹毙远拘詫?shí)驗(yàn)中，分別灌胃吳茱萸堿、吳茱萸次堿和吳茱萸總堿最大給藥量5 g/kg，觀察藥后2 h、8 h、1 d、7 d 和14 d 小鼠的表現(xiàn)，同時(shí)檢測肝腎功能，主要臟器指數(shù)和肝臟組織病理學(xué)，沒有發(fā)現(xiàn)明顯肝毒性，小鼠的一般狀況，所檢測的其它臟器指數(shù)和病理學(xué)也無異常發(fā)現(xiàn)。吳茱萸水提取物的成分復(fù)雜，明確哪一具體物質(zhì)引起毒性，值得深入研究。

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[收稿2015-01-06;修回2015-02-09]

(編輯：譚秀榮)

Acute toxicity study on evodiamine, rutacarpine and evodia total alkaloids in mice

LinShuxian,RenLina,SunAnsheng

(1.Department of Pharmacology and the Key Laboratory of Basic Pharmacology of Guizhou Province, Zunyi Medical University, Zunyi Guizhou 563099, China)

Objective To study the acute toxicity of evodiamine (Evo), rutacarpine (Rut) and evodia total alkaloids (ETA) in mice. Methods Adult 6-week-old male and female Kunming mice were randomly divided into the control, Evo, Rut and ETA groups. Mice were respectively treated with single dose of Evo (2 g/kg), Rut (2 g/kg) and TA (2 g/kg) by intragastric administration (i.g). Fourteen days after drug treatment, no mice died. Then, the maximum amount of Evo, Rut and ETA (5 g/kg) were respectively undertaken to observe the toxic reaction and the body weight changes of mice. At different time points after drug administration for 14 days, the serum concentrations of ALT, AST, Crea and Urea were determined by automatic biochemistry analyzer. The histopathology of liver, spleen, lung, heart, kidney and brain was evaluated by HE staining and the visceral index was calculated. Results Within 14 days after drug administration, no significant difference of the mouse fur, activities, respiration, mental state, diet, eyelids, feces, body weight, color, histopathological examination and visceral index between the control and drug treatment groups was shown. Conclusion Evo, Rut and ETA have no significantly toxicity.

evodiamine; rutacarpine; evodia total alkaloids; acute toxicity; mouse

國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(NO：81160528)；貴州省中醫(yī)藥管理局資助項(xiàng)目(NO：黔中醫(yī)藥 2009-79)。

孫安盛，男，教授，碩士生導(dǎo)師，研究方向：心血管藥理，E-mail:sunansheng1945@163.com。

R285

A

1000-2715(2015)02-0146-04