丁玉峰，胡敦梅，彭金蘭，李瓊閣，閆興津，杜光，曾凡波

(1.華中科技大學同濟醫(yī)學院附屬同濟醫(yī)院藥學部，武漢 430030；2.華中科技大學同濟醫(yī)學院附屬普愛醫(yī)院內(nèi)科，武漢 430034；3.華中科技大學同濟醫(yī)學院藥學院，武漢 430030)

急性子提取物抗炎鎮(zhèn)痛作用的實驗研究*

丁玉峰1，胡敦梅1，彭金蘭2，李瓊閣1，閆興津3，杜光1，曾凡波3

(1.華中科技大學同濟醫(yī)學院附屬同濟醫(yī)院藥學部，武漢 430030；2.華中科技大學同濟醫(yī)學院附屬普愛醫(yī)院內(nèi)科，武漢 430034；3.華中科技大學同濟醫(yī)學院藥學院，武漢 430030)

目的 探討中藥急性子的抗炎鎮(zhèn)痛效果，為臨床合理應用提供理論依據(jù)。方法 采用二甲苯致小鼠耳腫脹、冰醋酸致小鼠扭體反應、小鼠熱板法、蛋清致大鼠足腫脹和肉芽腫實驗觀察急性子提取物的抗炎鎮(zhèn)痛效果。結果 與模型對照組比較，急性子水提物中、大劑量組小鼠扭體次數(shù)明顯減少(P<0.05)，急性子水提物中、大劑量組大鼠足腫脹減輕。中、大劑量急性子水提物對小鼠耳腫脹無效，其中大劑量可延長60 min(P<0.01)和90 min(P<0.05)小鼠疼痛閾值；急性子醇提取物大劑量可顯著減少小鼠扭體次數(shù)(P<0.01)，減輕小鼠耳腫脹程度(P<0.05)，明顯延長30 min疼痛閾值(P<0.01)，減輕大鼠腫脹程度；急性子醇提物大劑量可延長60 min疼痛閾值(P<0.01)。急性子提取物對大鼠肉芽腫無抑制作用。結論 急性子提取物有一定的鎮(zhèn)痛效果和抑制急性炎癥作用。

急性子提取物；抗炎；鎮(zhèn)痛

急性子為鳳仙花科植物鳳仙花的種子，《本經(jīng)逢原》《醫(yī)林纂要》《本草再新》等記載其有軟堅消腫、治外瘍、敗火毒等功效?，F(xiàn)代研究表明，急性子提取物有一定的抗氧化、抗生育、抗腫瘤等作用。急性子化學成分主要包括脂肪油、黃酮類、萘醌類、皂苷類、揮發(fā)油和多肽及蛋白質類等，這些化合物具有一些藥理功效[1]。近年來研究發(fā)現(xiàn)，急性子含有抑制細菌生長、但對培養(yǎng)的人體細胞無毒性作用的多肽[2]。鳳仙花提取物具有拮抗組胺H1受體作用，其地上部分具有抗炎、抗風濕、治療瘙癢等作用[3]。筆者在目前已發(fā)現(xiàn)的治療作用基礎上進行相關研究，探討急性子抗炎鎮(zhèn)痛功效。

1 材料與方法

1.1 動物 昆明種小鼠，清潔級，體質量(20±2) g，雌雄兼用；斯?jié)娎鄹瘛ざ嗬?Sprague Dawley,SD)大鼠，清潔級，體質量(180±20) g，雌雄各半。均由華中科技大學同濟醫(yī)學院實驗動物中心提供，動物實驗許可證編號：SCXK(鄂)2010-0009。飼養(yǎng)條件：溫度(25±2) ℃，相對濕度75%，光照、黑暗各12 h，普通飼料喂養(yǎng)。

1.2 儀器 電熱恒溫水浴箱(北京市醫(yī)療設備廠，型號：GSY3-Ⅱ)，高速粉碎機(鄭州科豐儀器設備有限公司，型號：FW100)，電子天平(OHAUS公司，型號：AR2140)，游標卡尺(中國上海工量具有限公司，型號：O-300)，電熱恒溫鼓風干燥箱(上海精宏實驗設備有限公司，型號：DHG-9123A)，手提式壓力蒸汽滅菌器(浙江新豐醫(yī)療器械有限公司，型號：XFS-280CB)。

1.3 藥物 急性子[武漢神草中藥飲片有限責任公司，批號：080424-5，經(jīng)華中科技大學同濟醫(yī)學院藥學院張長弓教授鑒定為鳳仙花科鳳仙花屬植物鳳仙花(ImpatiensbalsaminaL.)的干燥成熟種子]，阿司匹林片(神威藥業(yè)有限公司，批號：1003171，規(guī)格：0.3 g)，蛋清(新鮮雞蛋去殼，取蛋清直接使用)，脫脂棉(河南飄安集團有限公司)，試劑均為分析純。

1.4 急性子提取物的制備 根據(jù)急性子所含主要化學成分及其有關研究報道，選擇將其分別進行醇提和水提。先將藥材適度粉碎，干燥滅活，置于4 ℃冰箱待用。水提：取藥材粉末，加入石油醚脫脂，過濾石油醚(沸程60～90 ℃)并將藥材中的石油醚揮凈，加入純化水沸提，合并藥液，揮干得干浸膏(收率10%)，備用。醇提：取藥材粉末，加入固定比例的乙醇沸提，合并提取液，回收溶劑，得干浸膏(收率9.5%)，備用。

1.5 急性子提取物鎮(zhèn)痛作用研究

1.5.1 小鼠醋酸扭體法 取小鼠80只，雌雄兼用，按體質量隨機分為8組，每組10只，隨機分為空白對照組(純化水)、陽性組(阿司匹林200 mg·kg-1)，醇提物和水提物各小、中、大劑量組(即分別相當于生藥材3，6，9 g·kg-1)。均灌胃給藥，連續(xù)給藥3 d，于末次給藥30 min后，腹腔注射0.6%醋酸，10 mL·kg-1，觀察小鼠15 min內(nèi)扭體次數(shù)及出現(xiàn)扭體反應的時間[4-5]。

1.5.2 小鼠熱板法 調(diào)節(jié)恒溫水浴箱，使溫度保持(55±1) ℃，預熱30 min。取體質量(20±2) g雌性小鼠80只，按體質量隨機分為8組，每組10只，即空白對照組(純化水)、陽性組(阿司匹林200 mg·kg-1)，醇提物和水提物各小、中、大劑量組(即分別相當于生藥材3，6，12 g·kg-1)。均灌胃給藥，連續(xù)給藥3 d，末次給藥后30，60，90 min記錄小鼠在熱板上出現(xiàn)舔足所用時間(s)，作為該鼠的痛閾值。如果痛閾值超過60 s或小鼠跳出，即停止測試而將此時終止時間作為小鼠痛閾值[4-5]。

1.6 急性子提取物抗炎作用研究

1.6.1 蛋清致大鼠足跖腫 取SD大鼠50只，按體質量隨機分為8組：空白對照組8只；陽性組，醇提物和水提物各3個劑量組(給藥劑量依“1.5.2”項小鼠種屬換算)，每組6只。連續(xù)給藥5 d，最后一次給藥1.5 h后，于大鼠右后足掌腱膜下注入10%新鮮蛋清溶液0.1 mL致炎。測定致炎前及致炎后0.5，1，2，4，6 h右后足跖厚度，以致炎前后足跖厚度差作為腫脹度(致炎后足跖厚度-致炎前足跖厚度)[4-5]。

1.6.2 二甲苯致小鼠耳腫脹 取雄性小鼠80只，分組、給藥劑量同“1.5.2”項，連續(xù)給藥3 d，末次給藥后30 min以二甲苯0.05 mL均勻涂于左耳兩面，右耳作為參照。1 h后處死小鼠，沿耳廓線取兩耳，對齊后用直徑8 mm打孔器在同一部位分別打下耳片，稱質量以左右耳質量差表示腫脹度[4-5]。

1.6.3 大鼠棉球肉芽腫實驗 取SD大鼠50只，分組及給藥劑量同“1.6.1”項。棉球(20±1) mg，高壓滅菌，60 ℃烘干。在水合氯醛麻醉下無菌操作，于兩腋下切口，兩側腋窩部皮下各植入兩個滅菌棉球，縫合皮膚。給藥方法：術后第二天給藥，每天一次，連續(xù)7 d。第8天處死大鼠，取出棉球，60 ℃烘干至恒重。肉芽腫質量=術后棉球質量-術前棉球質量、抑制率(%)=(空白對照組肉芽腫平均質量-給藥組肉芽腫平均質量)/空白對照組肉芽腫平均質量×100%[4-5]。

2 結果

2.1 急性子提取物鎮(zhèn)痛作用

2.1.1 小鼠醋酸扭體實驗 見表1。與空白對照組比較，水提物和醇提物中、高劑量組小鼠15 min內(nèi)扭體次數(shù)均明顯減少，且差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05或P<0.01)。與空白對照組比較，陽性組潛伏時間明顯延長，且差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。水提物各劑量組鎮(zhèn)痛率與給藥劑量有一定量效關系趨勢。

2.1.2 小鼠熱板實驗 見表2。30 min時，與空白對照組比較，陽性組和醇提物中、大劑量組舔足時間均明顯延長，且差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05或P<0.01)，醇提物中、大劑量組延長更明顯(P<0.01)。60 min時，與空白對照組比較，水提物大劑量組和醇提物大劑量組舔足時間明顯延長，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。90 min時，與空白對照組比較，陽性組和水提物大劑量組舔足時間明顯延長，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05或P<0.01)。

2.2 急性子提取物抗炎作用

2.2.1 蛋清致大鼠足跖腫 見表3。0.5 h時，與空白對照組比較，水提物和醇提物大劑量組大鼠足腫脹度減輕，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。1和2 h時，與空白對照組比較，水提物和醇提物中、大劑量組大鼠足腫脹度減輕，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05或P<0.01)。

表1 8組小鼠扭體反應測定結果

與空白對照組比較，*1P<0.01，*2P<0.05

Compared with blank control group，*1P<0.01，*2P<0.05

4 h時，與空白對照組比較，水提物中劑量組和醇提物中、大劑量組大鼠足腫脹度減輕，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05或P<0.01)。

2.2.2 二甲苯致小鼠耳腫脹 見表4。與空白對照組比較，陽性組和醇提物中、大劑量組小鼠耳腫脹度明顯減輕，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

2.2.3 大鼠棉球肉芽腫實驗 見表5。由于小劑量組未造模成功，故表5中只有中、大劑量組數(shù)據(jù)。與空白對照組比較，水提物、醇提物組對肉芽腫抑制率差異無統(tǒng)計學意義。

3 討論

從本實驗結果可知，急性子提取物有一定鎮(zhèn)痛效果。在醋酸扭體法實驗中，與空白對照組比較，中、大劑量醇提物和水提物可明顯減少扭體次數(shù)，且醇提物效果更好，差異有統(tǒng)計學意義。與陽性對照組比較，提取物組間潛伏時間差異無統(tǒng)計學意義，陽性藥可明顯延長疼痛發(fā)作潛伏時間。在熱板實驗中，30 min時，醇提物中、大劑量顯示出一定鎮(zhèn)痛作用；60 min時，大劑量水提物和醇提物有一定鎮(zhèn)痛作用；90 min時，只有水提物有抑制小鼠熱致痛的作用。由此推斷，急性子醇提物和水提物中均含有鎮(zhèn)痛物質。在兩次鎮(zhèn)痛實驗中，醇提物中劑量組均表現(xiàn)一定程度鎮(zhèn)痛效果，提示可能醇提對急性子鎮(zhèn)痛物質的提取更完全。根據(jù)熱板法實驗結果，推測水提物鎮(zhèn)痛成分可能較醇提物起效慢，或者水提物中鎮(zhèn)痛成分含量稍低，或者鎮(zhèn)痛效果稍弱。

表2 8組小鼠熱板法試驗結果

與空白對照組比較，*1P<0.05，*2P<0.01

Compared with blank control group，*1P<0.05，*2P<0.01

表3 急性子提取物對蛋清致大鼠足腫脹的影響

與空白對照組比較，*1P<0.05，*2P<0.01

Compared with blank control group，*1P<0.05，*2P<0.01

表4 8組小鼠耳腫脹實驗結果

與空白對照組比較，*1P<0.05

Compared with blank control group，*1P<0.05

表5 6組大鼠肉芽腫實驗結果

與空白對照組比較，*1P<0.05

Compared with blank control group，*1P<0.05

在耳腫脹實驗中，與空白對照組比較，中、大劑量醇提物對小鼠耳腫脹的抑制作用差異有統(tǒng)計學意義。足腫脹實驗中，0.5 h時，只有水提物和醇提物大劑量組顯示一定的抑制炎癥作用；1～2 h時，除水提物小劑量組，其他組與對照組比較均有抑制大鼠足腫脹的作用；4 h時，水提物大劑量組和醇提物中、大劑量組與對照組比較，有一定的抑制腫脹的效果。肉芽腫實驗中，急性子提取物未表現(xiàn)出明顯抑制肉芽生長作用。根據(jù)以上結果，推測急性子提取物含有一定量抑制急性炎癥物質，對慢性炎癥治療效果還需進一步確證。醇提物與水提物相比較，其提取物的抑制急性炎癥效果更明顯，即在低劑量組也表現(xiàn)出一定的抑制炎癥作用[6-7]。

目前對于鳳仙花的花等部位研究較多，但是對于急性子研究還不足。本研究發(fā)現(xiàn)急性子也具有一定的抗炎鎮(zhèn)痛作用，但其抗炎鎮(zhèn)痛作用的物質是否與鳳仙花植物相同，以及兩者間存在的差異，有待進一步研究。

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DOI 10.3870/yydb.2015.03.004

Experimental Studies on Anti-inflammatory and Analgesic Effects of Extracts ofGardenBalsamSeeds

DING Yufeng1， HU Dunmei1， PENG Jinlan2,LI Qiongge1， YAN Xingjin3， DU Guang1， ZENG Fanbo3

(1.DepartmentofPharmacy，TongjiHospital,TongjiMedicalCollege，HuazhongUniversityofScienceandTechnology，Wuhan430030，China; 2.DepartmentofEndocrinology，Pu'aiHospitalAffiliatedwithTongjiMedicalCollege，HuazhongUniversityofScienceandTechnology，Wuhan430034，China; 3.SchoolofPharmacy,TongjiMedicalCollege,HuazhongUniversityofScienceandTechnology，Wuhan430030，China)

Objective To investigate the anti-inflammatory and analgesic effects of extracts fromGardenBalsamseeds in order to provide theoretical basis for rational clinical application. Methods The mouse ear swelling induced by xylene, the body torsion induced by acetic acid or hot plate method, the rat foot swelling induced by egg white and granuloma model were set up to study anti-inflammatory and analgesic effects of extracts fromGardenBalsamseeds. Results The water extracts at the middle and high doses reduced the body torsion counts of mice (P<0.05), alleviated the rat toe swelling, but did not affect mice ear swelling.The extracts at the high dose prolonged pain threshold at 60 min (P<0.01) and 90 min (P<0.05); the alcohol extracts at the middle and high doses significantly lowered body twisting counts (P<0.01), attenuated the ear swelling of mice (P<0.05), remarkably prolonged the pain threshold (P<0.01)at 30 min, weakened the rat foot swelling, and elevated 60 min pain threshold at the high doses (P<0.01), but the extracts exerted no effects on the rats granuloma. Conclusion The extracts fromGardenBalsamseeds have anti-inflammatory and analgesic effects.

Extracts ofGardenBalsamseeds; Anti-inflammatory; Analgesia

2014-04-27

2014-06-20

*湖北省自然科學基金資助項目(2013CFB162)

丁玉峰(1966-)，男，湖北麻城人，主任藥師，碩士生導師，研究方向：藥物新制劑研究、臨床藥學。電話：027-83663519，E-mail:yfding@tjh.tjmu.edu.cn。

彭金蘭(1964-)，女，湖北麻城人，副主任醫(yī)師，學士，主要從事內(nèi)分泌臨床工作。電話：027-68831680，E-mail：jlpeng64@163.com。

R286；R965

A

1004-0781(2015)03-0298-05