袁孟娟，韓軍

(聊城大學(xué) 藥學(xué)院，山東 聊城 252059)

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藥物載體非PEG空白脂質(zhì)體的制備及穩(wěn)定性研究

袁孟娟，韓軍Δ

(聊城大學(xué) 藥學(xué)院，山東 聊城 252059)

目的 制備藥物載體非PEG空白脂質(zhì)體，并對其穩(wěn)定性進(jìn)行研究。方法 以高純度蛋黃卵磷脂、膽固醇為成膜材料，分別采用高壓均質(zhì)法-擠出法和高壓均質(zhì)法-超聲法2種方法制備非PEG空白脂質(zhì)體，并研究擠出法以及超聲法對空白脂質(zhì)體粒徑的影響，考察制得的非PEG空白脂質(zhì)體的物理穩(wěn)定性。結(jié)果 高壓均質(zhì)法-擠出法制備的非PEG空白脂質(zhì)體平均粒徑為86.73 nm，多分散系數(shù)(polydispersity index，PDI)為0.170；高壓均質(zhì)法-超聲法制備的空白脂質(zhì)體平均粒徑為91.68 nm，PDI為0.362。結(jié)論 與高壓均質(zhì)法-超聲法相比，高壓均質(zhì)法-擠出法制備的空白脂質(zhì)體粒徑較小、分布均勻、穩(wěn)定性好。

非PEG空白脂質(zhì)體；高壓均質(zhì)法；擠出法；超聲法

脂質(zhì)體由于具有天然靶向性，其作為藥物載體又具有長效作用、不良反應(yīng)低的特點(diǎn)，因此脂質(zhì)體作為藥物載體用于臨床具有非常重大的意義，并具有非常廣闊的前景。但目前大部分脂質(zhì)體，如：里葆多，DOXIL, CAELYX 和LIPODOX都是采用stealth 技術(shù)的長循環(huán)脂質(zhì)體，有和載體輔料(PEG)相關(guān)的毒性[1]。而非PEG脂質(zhì)體可避免大劑量使用時手足綜合征等皮膚毒性的產(chǎn)生。常用的脂質(zhì)體的制備方法眾多，如：薄膜分散法、超聲法、冷凍干燥法、注入法等。而高壓均質(zhì)法[2]制備的脂質(zhì)體可大規(guī)模生產(chǎn)且重現(xiàn)性好，擠出法[3]制備的脂質(zhì)體具有粒徑分布均勻、穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)采用高壓均質(zhì)法-擠出法聯(lián)用的方法制備非PEG空白脂質(zhì)體，并對高壓均質(zhì)法-擠出法并與高壓均質(zhì)法-超聲法制備的空白脂質(zhì)體進(jìn)行了對比，此類研究國內(nèi)外相關(guān)報道較少。

1 材料與方法

1.1 試劑與藥品 蛋黃卵磷脂EPC(德國Lipoid 公司)；膽固醇CHOL(德國Lipoid 公司)；無水乙醇(萊陽經(jīng)濟(jì)技術(shù)開發(fā)區(qū)精細(xì)化工廠)；一水合檸檬酸(天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司)

1.2 儀器 FB224自動內(nèi)校電子分析天平(上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司)；pH 計(jì)[梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司]；0.22 μm濾膜(上海市新亞凈化器件廠)；一次性注射器(常州悅康醫(yī)療器材有限公司)；Mini-extruder(Avanti)；100 nm聚碳酸酯膜(Avanti)；水浴鍋(金壇市科析儀器有限公司)；控溫磁力攪拌器(SZCL-4D恒溫加熱磁力攪拌器)；D-3L型高壓均質(zhì)機(jī)(美國PhD科技有限公司)；透析袋MD18(截留分子量1000，美國Spectrum公司)；Zetasizer nano ZSP納米粒度儀(英國馬爾文儀器有限公司)

1.3 方法

1.3.1 相關(guān)溶液的配制：配制0.3M，pH 4.0的檸檬酸溶液；并用0.22 μm濾膜過濾除菌，保存于4 ℃冰箱中備用。

1.3.2 空白脂質(zhì)體的制備：蛋黃卵磷脂，膽固醇按摩爾比3:1在55 ℃水浴條件下溶于少量無水乙醇；0.3 M，pH 4.0的檸檬酸溶液于圓底燒瓶中55 ℃加熱、轉(zhuǎn)速30 r/ min 磁力攪拌下，用一次性注射器將上述油相緩慢注入檸檬酸溶液中，并繼續(xù)攪拌30 min，得到脂質(zhì)體混懸液[4]。將上述脂質(zhì)體混懸液經(jīng)高壓均質(zhì)機(jī)在15 000 psi壓力下循環(huán)勻質(zhì)30 min。再將均質(zhì)后的脂質(zhì)體溶液通過擠出器(雙層100 nm聚碳酸酯膜)反復(fù)多次擠出[5-6]或者在冰浴條件下進(jìn)行超聲[7-9]。最后，用10倍體積的0.3 M，pH 4.0的檸檬酸溶液透析除去乙醇，即得到空白脂質(zhì)體。

1.3.3 空白脂質(zhì)體的穩(wěn)定性研究：將空白脂質(zhì)體靜置于4 ℃冷藏、25 ℃室溫條件下，于0、1、7、15、30、60 d分別取樣進(jìn)行外觀觀察并測量其粒徑、Zeta電位，取平均值[10]。

1.3.4 空白脂質(zhì)體粒徑、Zeta電位的測定：取空白脂質(zhì)體，加入適量MiliQ水稀釋后，用Zetasizer nano ZSP納米粒度儀測定其粒徑及粒徑分布、Zeta電位，取平均值。

2 結(jié)果

2.1 高壓均質(zhì)法-擠出法制備空白脂質(zhì)體

2.1.1 高壓均質(zhì)時間對空白脂質(zhì)體粒徑的影響：實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：隨著均質(zhì)時間的延長，空白脂質(zhì)體粒徑逐漸減小(見表1)。由于隨著均質(zhì)時間的延長，空白脂質(zhì)體混懸液溫度會隨之上升；當(dāng)均質(zhì)時間為30 min時，混懸液溫度已有所升高。為此，從空白脂質(zhì)體的穩(wěn)定性角度考慮，最終選擇空白脂質(zhì)體的高壓均質(zhì)時間為30 min。

表1 高壓均質(zhì)時間對空白脂質(zhì)體粒徑的影響(n=3)Tab.1 How high pressure homogeneous time influences particle size of blank liposomes(n=3)

2.1.2 擠出次數(shù)對空白脂質(zhì)體粒徑的影響：實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：在一定范圍(0～50次)內(nèi)，隨著擠出次數(shù)的增加，空白脂質(zhì)體粒徑(Z-Average)逐漸減??；當(dāng)擠出次數(shù)超過50次時，空白脂質(zhì)體的粒徑(Z-Average)不再減小而是出現(xiàn)了平臺期(見表2)。因此，最終選擇的擠出次數(shù)為50次。

表2 擠出次數(shù)對空白脂質(zhì)體粒徑的影響(n=3)Tab.2 How extrusion times influence particle size of blank liposomes(n=3)

2.1.3 高壓均質(zhì)法-擠出法制備空白脂質(zhì)體的粒徑：空白脂質(zhì)體初乳經(jīng)過高壓均質(zhì)(時間30 min)、擠出(擠出次數(shù)50次)，最終得到粒徑(Z-Average)86.73 nm的空白脂質(zhì)體，PDI為0.170。

2.2 高壓均質(zhì)法-超聲法制備的空白脂質(zhì)體

2.2.1 超聲時間對空白脂質(zhì)體粒徑的影響：實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：超聲功率功率固定時，在一定范圍(0～6 min)內(nèi)，隨著超聲時間的延長，空白脂質(zhì)體粒徑(Z-Average)逐漸減??；當(dāng)超聲時間超過6 min時，空白脂質(zhì)體粒徑(Z-Average)不再減小反而增加(見表3)。

表3 超聲時間對空白脂質(zhì)體粒徑的影響(n=3)Tab.3 How ultrasonic time influences particle size of blank liposomes(n=3)

2.2.2 超聲功率對空白脂質(zhì)體粒徑的影響：實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：超聲時間固定時，在一定范圍(0～200 W)內(nèi)，隨著超聲功率的增大，空白脂質(zhì)體粒徑(Z-Average)逐漸減??；當(dāng)超聲功率超過200 W時，空白脂質(zhì)體粒徑(Z-Average)不再減小反而增加(見表4)。

表4 超聲功率對空白脂質(zhì)體粒徑的影響(n=3)Tab.4 How ultrasonic power influences particle size of blank liposomes(n=3)

2.2.3 高壓均質(zhì)法-超聲法制備空白脂質(zhì)體的粒徑：空白脂質(zhì)體初乳經(jīng)過高壓均質(zhì)(時間30 min)、超聲(功率200 W，時間6 min)，最終得到粒徑(Z-Average)91.68 nm的空白脂質(zhì)體，PDI為0.362。

2.3 2種制備空白脂質(zhì)體方法的比較 通過表2和表3中空白脂質(zhì)體的粒徑大小及其PDI可以看出：與高壓均質(zhì)法-超聲法制備的空白脂質(zhì)體相比，高壓均質(zhì)法-擠出法制備的空白脂質(zhì)體粒徑更小、分布均勻。因此，在后續(xù)制備過程中多采用高壓均質(zhì)法-擠出法來制備空白脂質(zhì)體，高壓均質(zhì)時間為30 min、擠出次數(shù)為50次。

2.4 空白脂質(zhì)體的穩(wěn)定性研究 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在考察時間范圍內(nèi)，高壓均質(zhì)法-擠出法制備的空白脂質(zhì)體在4 ℃冷藏條件下保持穩(wěn)定，穩(wěn)定性考察結(jié)果見表5。

表5 空白脂質(zhì)體穩(wěn)定性考察結(jié)果(n=3)Tab.5 Results of stability experiment of blank liposomes (n=3)

3 討論

以空白脂質(zhì)體為藥物載體包埋水溶性藥物而形成的載藥脂質(zhì)體, 與其他制備方法比較,具有操作簡單、載藥量高、適用于多種水溶性藥物載藥脂質(zhì)體的制備等優(yōu)點(diǎn)。本研究采用高壓均質(zhì)法-擠出法(高壓均質(zhì)時間為30 min、擠出次數(shù)為50次)制備的空白脂質(zhì)體粒徑86.73 nm、PDI為0.170；并且在4 ℃冷藏條件下儲存60d，粒徑、Zeta電位及外觀均無明顯變化。由此可見，高壓均質(zhì)法-擠出法聯(lián)用制備的空白脂質(zhì)體不但具有可大規(guī)模生產(chǎn)、重現(xiàn)性好、粒徑分布均勻、穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn)，而且在制備過程中未使用PEG、Tween 80等表面活性劑，從而避免了大劑量使用時手足綜合征等皮膚毒性的產(chǎn)生。因此，高壓均質(zhì)法-擠出法聯(lián)用制備非PEG空白脂質(zhì)體的技術(shù)是對脂質(zhì)體劑型的優(yōu)化改進(jìn)，這樣就可既保證了其無PEG毒性，又可方便用于醫(yī)療，具有非常廣闊的應(yīng)用前景。

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(編校：譚玲)

Preparation and properties of drug carrier non-PEG blank liposomes

YUAN Meng-juan, HAN JunΔ

(Department of Pharmacy, Liaocheng University, Liaocheng 252059, China)

ObjectiveTo prepare drug carrier non-PEG blank liposomes, and study its properties.MethodsHigh purity of egg yolk lecithin and cholesterol were used as film forming material.The high pressure homogeneous method-extrusion method and high pressure homogeneous method-ultrasonic method were used to prepare non-PEG blank liposomes.After that how the method of high pressure homogeneous, extrusion and ultrasonic influence the particle size of blank liposomes were studied, and the physical stability of blank liposomes were investigated.ResultsThe particle size of blank liposomes prepared by high pressure homogeneous method-extrusion method was about 86 nm, and its polydispersity index was 0.170.While the particle size of the blank liposomes prepared by high pressure homogeneous method-ultrasonic method was about 91 nm, and its polydispersity index was 0.362.ConclusionCompared with high pressure homogeneous method- ultrasonic method, the blank liposomes prepared by high pressure homogeneous method-extrusion method had some advantanges, such as smaller particle size, narrow particle size distribution and high stability.

non-PEG blank liposomes; high pressure homogeneous method; extrusion method; ultrasonic method

山東省科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(2014GSF118121)；聊城市科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(2013GJH16)

袁孟娟，女，碩士，研究方向：藥物制劑研究，E-mail: yuanmengjuan1990@163.com；韓軍，通訊作者，男，博士，教授，研究方向：藥物制劑研究，E-mail: junhanmail@163.com。

R94

A

1005-1678(2015)07-0022-03