王會(huì)，劉政，吳漢東

(遼寧醫(yī)學(xué)院 食品科學(xué)與工程學(xué)院，遼寧 錦州 121001)

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根皮素對(duì)肝癌細(xì)胞HepG-2增殖和凋亡的影響

王會(huì)，劉政，吳漢東

(遼寧醫(yī)學(xué)院 食品科學(xué)與工程學(xué)院，遼寧 錦州 121001)

目的 以人肝癌細(xì)胞HepG-2為研究對(duì)象，研究根皮素對(duì)肝癌細(xì)胞增殖和凋亡的影響。方法 應(yīng)用相差顯微鏡、電子顯微鏡檢測(cè)凋亡細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化，通過(guò)細(xì)胞毒性試驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞增殖情況，應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率、細(xì)胞周期、線粒體膜電位、鈣離子穩(wěn)態(tài)的變化。結(jié)果 細(xì)胞呈典型的凋亡形態(tài)學(xué)變化，根皮素對(duì)HepG-2細(xì)胞有抑制增殖作用和誘導(dǎo)凋亡作用且呈濃度和時(shí)間依賴性，細(xì)胞周期阻滯于G1期，細(xì)胞線粒體膜電位降低，細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度增大。結(jié)論 根皮素通過(guò)影響細(xì)胞周期，降低線粒體膜電位，改變細(xì)胞內(nèi)鈣離子平衡來(lái)誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞HepG-2凋亡。

根皮素；肝癌細(xì)胞；細(xì)胞凋亡；增殖

肝癌是發(fā)生在肝細(xì)胞或膽管細(xì)胞的世界第五大惡性腫瘤，具有診斷難，治愈難，發(fā)展快和預(yù)后差等特點(diǎn)。肝癌與其他惡性腫瘤相比具有較強(qiáng)的耐藥性，因此尋找高效、低毒、靶點(diǎn)明確的抗肝癌藥物迫在眉睫。

根皮素是一種存在于蘋果、梨等水果和多種蔬菜根莖或根皮中的類黃酮物質(zhì)，它具有抗菌、抗氧化、抗糖尿病、抗腫瘤及雌激素樣作用等活性。根皮素能激活蜂窩蛋白激酶，對(duì)細(xì)胞無(wú)序增殖有抑制作用，可用于皮膚癌及其他腫瘤的治療[1-2]。根皮素對(duì)體外生長(zhǎng)的人急性淋巴母細(xì)胞白血病細(xì)胞Molt-4 和體內(nèi)膀朧癌細(xì)胞Fisher具有抑制增殖作用。根皮素主要通過(guò)抑制糖的跨膜運(yùn)輸，阻礙能源的供應(yīng)來(lái)誘導(dǎo) B16 小鼠腫瘤 4A5 細(xì)胞凋亡[3]，根皮素還可以嵌入到B16 腫瘤細(xì)胞DNA分子中干擾 DNA 的復(fù)制，影響蛋白激酶C (protein kinase C, PKC) PKC 的活性，從而促進(jìn)細(xì)胞凋亡[4]。Park[5]等研究發(fā)現(xiàn)根皮素可誘導(dǎo)腸癌細(xì)胞凋亡7。但目前關(guān)于根皮素誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞凋亡及其相關(guān)機(jī)理的詳細(xì)研究還非常少。本實(shí)驗(yàn)以人肝癌細(xì)胞 HepG-2 為研究對(duì)象，探討了根皮素對(duì)其增殖和凋亡的影響。

1 材料與方法

1.1 材料 人肝癌HepG-2細(xì)胞株，由協(xié)和醫(yī)科大學(xué)提供；根皮素(純度， 99.99%；批號(hào)，P7912-100MG)、二甲基亞砜(DMSO)、甲基噻唑藍(lán)(MTT)、碘化丙啶(PI)、均購(gòu)于Sigma公司；DMEM培養(yǎng)基和胎牛血清購(gòu)于GIBCO公司；Annexin V-FITC Apoptosis Detection試劑盒購(gòu)于BD公司。細(xì)胞凋亡-Hoechst染色試劑盒購(gòu)于碧云天公司。

流式細(xì)胞儀(BECKMAN FC500)；激光共聚焦顯微鏡(Nikon TE2000-E)；倒置相差顯微鏡(Olympus IX-71)。酶標(biāo)儀(THERMO FISHER)，透射電子顯微(JEM-123O)

1.2 細(xì)胞培養(yǎng) 用含10% 標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基，于37 ℃、5% CO2及飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)細(xì)胞，當(dāng)培養(yǎng)液顏色變黃時(shí)更換培養(yǎng)液，當(dāng)細(xì)胞達(dá)到70%～80% 融合度時(shí)細(xì)胞傳代。

1.3 方法

1.3.1 藥物配制及細(xì)胞處理 根皮素用DMSO溶解，再用基礎(chǔ)培養(yǎng)基稀釋成濃度為8 mg/mL的母液，分裝，置-20 ℃ 冰箱避光保存?zhèn)溆?。在?shí)驗(yàn)中DMSO的終濃度為0.05%。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞，換用含有40、80和160 mg/L根皮素的培養(yǎng)液培養(yǎng)至12、24、36、48 h。分別記為低、中、高濃度處理組。設(shè)對(duì)照組(用DMSO處理，終濃度為0.05%)。

1.3.2 細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察 細(xì)胞懸液接種于六孔板，濃度為4.0×105個(gè)/孔，待細(xì)胞貼壁融合進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，用低、中、高濃度處理組根皮素處理，用培養(yǎng)液培養(yǎng)至24 h，并設(shè)對(duì)照組(用DMSO處理，終濃度為0.05%)。應(yīng)用倒置相差顯微鏡觀察并拍照。

1.3.3 Hoechst 33258染色觀察凋亡細(xì)胞核 將蓋玻片置于培養(yǎng)皿內(nèi)，種入細(xì)胞。待細(xì)胞進(jìn)入對(duì)數(shù)用低、中、高濃度處理組處理，設(shè)置對(duì)照組(用DMSO處理，終濃度為0.05%)。固定細(xì)胞，加入Hoechst 33258染色液，去染色液，滴抗熒光淬滅封片液于載玻片上，蓋蓋玻片，在激光共聚焦顯微鏡下觀察并拍照。

1.3.4 細(xì)胞毒性分析 將180 μL細(xì)胞懸液接種于96孔培養(yǎng)板。待細(xì)胞進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，低、中、高濃度處理組處理，設(shè)置對(duì)照組，每組設(shè) 8個(gè)重復(fù)。培養(yǎng)到設(shè)定時(shí)間，然后每孔加入 MTT 20 μL(5 mg/mL， PBS溶解)，4 h 后終止孵育，離心去上清，每孔加入 200 μL DMSO，混勻，于酶標(biāo)儀在 490 nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)吸光度 OD值。試驗(yàn)重復(fù)3次。

1.3.5 透射電鏡觀察凋亡細(xì)胞亞顯微結(jié)構(gòu) 常規(guī)方法收集細(xì)胞，用2.4% 戊二醛固定，0.15 M 磷酸緩沖液漂沖，1.2% 鋨酸固定，0.12M 磷酸緩沖液漂洗，用20%、30%、60%、70%、80% 和100% 梯度的丙酮系列脫水。用環(huán)氧樹脂SPURR包埋聚合，切片，醋酸雙氧鈾和檸檬酸鉛復(fù)染。透射電子顯微鏡觀察，拍攝。

1.3.6 Annexin V-FITC/PI雙染檢測(cè)細(xì)胞凋亡率 常規(guī)方法收集細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞濃度為5.0×105細(xì)胞/樣品，樣品加入100 μL緩沖液和5 μL AnnexinV-FITC及5 μL PI，搖勻。避光孵育10～15 min，流式細(xì)胞儀檢測(cè)。

1.3.7 細(xì)胞周期檢測(cè) 收集對(duì)照組和處理組細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞濃度為(1～5)×105個(gè)/樣品，于4 ℃，70% 無(wú)水乙醇中孵育12 h。離心去乙醇，PBS漂洗，加入0.5 mLPI染液，4 ℃ 避光孵育20 min。流式細(xì)胞儀上機(jī)檢測(cè)。

1.3.8 線粒體膜電位檢測(cè) 收集對(duì)照組和處理組細(xì)胞，1.0×106個(gè)/樣品，加入0.5 mL JC-1染色液，在CO2培養(yǎng)箱避光孵育15 min，用預(yù)熱的PBS洗滌，于 0.5 mL PBS懸浮，流式細(xì)胞儀上機(jī)檢測(cè)。

1.3.9 細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的測(cè)定 收集對(duì)照組和處理組細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞濃度至(1～2)×106個(gè)/mL。加入Fluo-3/Am至終濃度為6～10 μM，細(xì)胞于5% CO2，37 ℃，避光孵育20～40 min，期間輕輕振蕩幾次，設(shè)置陰性對(duì)照(不加Fluo-3/Am)。用無(wú)鈣離子PBS離心洗滌2次，然后 PBS重懸至0.5 mL，流式細(xì)胞儀上機(jī)檢測(cè)。

2 結(jié)果

2.1 細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察 對(duì)照組細(xì)胞排列緊密，融合成片，胞漿飽滿，呈橢圓形，邊緣清晰，細(xì)胞折光度好，增殖旺盛。經(jīng)根皮素處理24 h后，低濃度處理組細(xì)胞萎縮，出現(xiàn)空泡；中濃度處理組細(xì)胞增殖速度顯著減慢，細(xì)胞形態(tài)逐漸變的模糊不清，凋亡細(xì)胞與鄰近細(xì)胞脫離；高濃度處理組細(xì)胞間連接幾乎消失，細(xì)胞裂解成小的碎片，細(xì)胞膜皺縮，胞體縮小，細(xì)胞膜表面凹凸不平，細(xì)胞形態(tài)發(fā)生重大變化，出現(xiàn)細(xì)胞壞死(見圖1)。

2.2 Hoechst33258染色觀察凋亡細(xì)胞核 對(duì)照組細(xì)胞核呈卵圓形或圓形，染色質(zhì)均勻分布于細(xì)胞核，著色均勻。處理組細(xì)胞染色質(zhì)凝聚呈分散點(diǎn)狀，著色不均勻。隨根皮素濃度的增加點(diǎn)狀著色現(xiàn)象明顯(見圖2)。

圖2 Hoechst33258 染色，根皮素處理HepG-2細(xì)胞24 h (×100)Fig.2 Hoechst33258 staining, HepG-2 cells after 24 h treatment by phloretin (×100)

2.3 細(xì)胞毒性分析 細(xì)胞毒性結(jié)果見表1，OD490值反映的是活細(xì)胞數(shù)量。在根皮素處理HepG-2細(xì)胞12、24、36、48 h后，隨著根皮素濃度的增大其OD490值隨之減小，間接反映活細(xì)胞數(shù)量減小，呈良好的量效和時(shí)效關(guān)系。

表1 根皮素對(duì)HepG-2細(xì)胞生長(zhǎng)的影響Tab.1 The inhibition effect of phloretin on HepG-2 cell ±s, n=8)

*P<0.05，**P<0.01，與對(duì)照組比較， compared with control group

2.4 透射電鏡觀察凋亡細(xì)胞亞顯微結(jié)構(gòu) 對(duì)照組細(xì)胞胞質(zhì)均勻，核膜結(jié)構(gòu)完好，呈雙層膜結(jié)構(gòu)。核仁清晰可見，染色質(zhì)分布均勻。高濃度處理組細(xì)胞，雙層核膜膜結(jié)構(gòu)遭到損傷、裂解，染色質(zhì)濃縮、聚集(見圖4)。

圖4 電子顯微鏡觀察根皮素處理HepG-2細(xì)胞24 h亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)(×100)Fig.4 Subcellular observation of HepG-2 cells after 24h treatment by phloretin using transmission electron microscopy(×100)

2.5 細(xì)胞凋亡率的測(cè)定 Annexin V-FITC/PI雙標(biāo)記法能夠定量分析細(xì)胞凋亡，并可定量分析早期凋亡細(xì)胞、晚期凋亡細(xì)胞、活細(xì)胞和壞死細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖5(12、36、48 h凋亡率)，表2結(jié)果表明，隨著根皮素處理時(shí)間的延長(zhǎng)和濃度的增加，誘導(dǎo)凋亡效果越顯著，呈現(xiàn)濃度依賴性和時(shí)間依賴性。

圖5 根皮素作用HepG-2細(xì)胞凋亡率Fig.5 The apoptosis rate of HepG-2 after treatment by phloretin.

組別 12h24h36h48h對(duì)照組 4.20±0.996.22±1.397.99±1.629.49±1.78低濃度處理組6.33±1.49*9.72±1.49**19.95±1.68**25.95±1.51**中濃度處理組7.51±1.53**22.56±2.49**33.20±2.58**32.56±3.95**高濃度處理組12.62±1.76**28.42±3.58**36.21±3.70**43.02±3.72**

*P<0.05，**P<0.01，與對(duì)照組比較， compared with control group

2.6 細(xì)胞周期的檢測(cè) 采用PI標(biāo)記結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期的變化，結(jié)果如圖6。隨著根皮素濃度的增大，G1期細(xì)胞數(shù)百分比增大，S期細(xì)胞百分比下降，G2期細(xì)胞百分比下降，表明細(xì)胞經(jīng)根皮素處理后增殖停滯在 G1期，DNA合成受到抑制，這種關(guān)系隨著根皮素劑量的增大而愈加明顯，呈現(xiàn)劑量依賴性。

圖6 根皮素處理HepG-2細(xì)胞24 h細(xì)胞周期Fig.6 The cell cycle of HepG-2 cells after 24h treatment by phloretin

組別 細(xì)胞周期G1(%)S(%)G2(%)對(duì)照組 51.99±6.7537.78±2.8710.1±2.56低濃度處理組65.89±6.91**26.74±2.57**7.89±1.47中濃度處理組72.67±8.86**17.55±2.78**8.07±1.99高濃度處理組78.39±9.07**13.18±3.79**5.67±1.78**

*P<0.05，**P<0.01，與對(duì)照組比較， compared with control group

2.7 細(xì)胞線粒體膜電位的檢測(cè) 本實(shí)驗(yàn)采用JC-1標(biāo)記流式細(xì)胞儀檢測(cè)線粒體膜電位變化，發(fā)現(xiàn)經(jīng)根皮素作用后的HepG-2細(xì)胞的線粒體膜電位下降，對(duì)照組為(10.05±1.03)mV,在濃度處理組為(5.30±0.72)mV，中濃度處理組為(3.77±8.92)mV，高濃度處理組為(2.04±0.78)mV，各實(shí)驗(yàn)組分別與對(duì)照組比較差異極顯著(P<0.01，見圖7)。

圖7 根皮素作用HepG-2細(xì)胞24 h，線粒體膜電位變化情況，**P<0.01，與對(duì)照組相比Fig.7 The mitochondrial membrane potential of HepG-2 cells after 24 h treatment by phloretin,**P<0.01, compared with control group

2.8 細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的測(cè)定 圖 8反映了根皮素素作用HepG-2細(xì)胞24 h后Ca2+的濃度。對(duì)照組為(2.11±0.72)mmol/L，低濃度處理組為(3.79±0.75)mmol/L,中濃度處理組為(11.36±0.67)mmol/L，高濃度處理組為(20.98±0.76)mmol/L。隨根皮素濃度增大 Ca2+濃度呈現(xiàn)增大現(xiàn)象，處理組 Ca2+濃度較對(duì)照有明顯增多(P<0.01)?？梢?Ca2+的濃度與根皮素濃度成正比。

圖8 根皮素作用HepG-2細(xì)胞24 h Ca2+濃度變化，**P<0.01，與對(duì)照組相比Fig.8 The concentrations of intracellular calcium of HepG-2 cells after 24 h treatment by phloretin**P<0.01, compared with control group

3 討論

腫瘤的發(fā)生和發(fā)展是一個(gè)基因調(diào)控的復(fù)雜過(guò)程，是細(xì)胞增殖失控和凋亡受阻的最終結(jié)果。隨著人們對(duì)凋亡機(jī)理的研究，人們認(rèn)識(shí)到促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡是治療腫瘤的有效途徑之一。

根皮素是一種類黃酮類物質(zhì), 是一種具有臨床應(yīng)用潛能的治療腫瘤的天然化合物, 根皮素可抑制腫瘤細(xì)胞增殖, 誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡[6]。根皮素可通過(guò)干擾Ⅱ型葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白來(lái)促進(jìn)肝癌細(xì)胞凋亡[7]。根皮素能夠以線粒體途徑誘導(dǎo) BEL-7402 細(xì)胞凋亡，且呈現(xiàn)濃度依賴性；根皮素能干預(yù)肝癌細(xì)胞粘附、運(yùn)動(dòng)及侵襲能力，從而抑制腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移[8-9]。由于根皮素結(jié)構(gòu)中的 4 個(gè)羥基能夠抑制細(xì)胞中糖的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)，阻斷能量運(yùn)輸，因而具有誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡的作用。

腫瘤是一種細(xì)胞周期失控性疾病，細(xì)胞無(wú)限增殖，導(dǎo)致細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化，最終形成腫瘤[10]。研究認(rèn)為，細(xì)胞周期進(jìn)程受到阻礙會(huì)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，細(xì)胞周期的調(diào)節(jié)可以影響細(xì)胞分裂增殖又能影響細(xì)胞凋亡，許多凋亡誘導(dǎo)因素在影響細(xì)胞周期進(jìn)程的同時(shí)也影響凋亡機(jī)制。所以對(duì)細(xì)胞周期的檢測(cè)是研究細(xì)胞凋亡的重要指標(biāo)之一，通過(guò)干擾細(xì)胞周期進(jìn)程來(lái)誘導(dǎo)凋亡也作為抗腫瘤研究的一個(gè)新思路。根皮素分子結(jié)構(gòu)中具有 4 個(gè)羥基，與葡萄糖結(jié)構(gòu)相似，與葡萄糖運(yùn)輸形成非競(jìng)爭(zhēng)性抑制，抑制能量來(lái)源，促使細(xì)胞發(fā)生凋亡。根皮素為芳香環(huán)結(jié)構(gòu)可插入到 DNA雙螺旋分子中，從而阻止 DNA 合成，影響細(xì)胞周期的分布，細(xì)胞發(fā)生凋亡。

通過(guò)檢測(cè)根皮素作用的細(xì)胞的周期的分布情況，發(fā)現(xiàn)經(jīng)根皮素作用的細(xì)胞發(fā)生G1期阻滯，導(dǎo)致G2期細(xì)胞減少，造成進(jìn)入M期的細(xì)胞數(shù)量減少，無(wú)法分裂，使增殖受阻。隨著根皮素濃度的增加，G1期細(xì)胞增加，S期細(xì)胞減少。隨根皮素濃度增加，160 mg/L的根皮素誘導(dǎo)細(xì)胞大量凋亡，而造成 G2期細(xì)胞減少。推測(cè)根皮素通過(guò)調(diào)控細(xì)胞周期的進(jìn)程進(jìn)而發(fā)揮促凋亡作用，這為以后開展根皮素誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞凋亡機(jī)理的研究提供了重要實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

線粒體與細(xì)胞凋亡過(guò)程中許多重要事件密切相關(guān)[11]，發(fā)揮著重要的調(diào)控作用，線粒體膜電位下降，線粒體膜通透性轉(zhuǎn)運(yùn)孔開放, 膜通透性增加，使線粒體內(nèi)的細(xì)胞色素C，凋亡誘導(dǎo)因子 AIF 等進(jìn)入胞漿，啟動(dòng)凋亡程序[12]。根皮素是一種解偶聯(lián)試劑，可以抑制線粒體的氧化磷酸化作用[13]，ATP合成受阻，能量缺乏，促使細(xì)胞凋亡。本實(shí)驗(yàn)采用 JC-1標(biāo)記結(jié)合流式細(xì)胞儀檢測(cè)線粒體膜電位變化，發(fā)現(xiàn)經(jīng)根皮素作用后的HepG-2細(xì)胞的線粒體膜電位降低。線粒體膜電位降低，導(dǎo)致膜通透性增強(qiáng)，從而使細(xì)胞色素C 從線粒體內(nèi)流入細(xì)胞質(zhì),細(xì)胞色素C 與信號(hào)接頭分子Apaf-1 (apoptotic protease activating factor-1) 結(jié)合,激活Caspase-9，活化 Caspase-3，啟動(dòng) Caspase 的級(jí)聯(lián)反應(yīng),引起細(xì)胞凋亡。推測(cè)根皮素誘導(dǎo) HepG-2凋亡與細(xì)胞凋亡線粒體途徑有關(guān)。

在正常細(xì)胞中Ca2+主要與蛋白質(zhì)結(jié)合封存在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和線粒體中，游離的 Ca2+很少，只是在收到外界刺激時(shí)才被釋放出來(lái)充當(dāng)信號(hào)分子。幾乎所有細(xì)胞的反應(yīng)，從收縮、胞吐到基因表達(dá)、細(xì)胞凋亡都被細(xì)胞質(zhì)內(nèi)局部或全部游離 Ca2+濃度的變化控制。有研究表明游離 Ca2+在細(xì)胞內(nèi)的過(guò)度積累可以直接導(dǎo)致細(xì)胞凋亡的發(fā)生[14]。當(dāng)根皮素誘導(dǎo) HepG-2 細(xì)胞凋亡時(shí)，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)游離鈣離子濃度升高，Ca2+穩(wěn)態(tài)發(fā)生變化，表明適當(dāng)濃度的根皮素有較好的誘導(dǎo) HepG-2 細(xì)胞凋亡的效果。結(jié)合線粒體膜電位降低的結(jié)果推測(cè)與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上鈣離子的釋放有關(guān)，但其具體的機(jī)制有待進(jìn)一步的研究。

根皮素是通過(guò)抑制細(xì)胞 DNA 合成，降低線粒體膜和干擾鈣離子穩(wěn)態(tài)來(lái)誘導(dǎo) HepG-2 細(xì)胞凋亡的。根皮素誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞凋亡及其機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

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(編校：譚玲)

Effects of proliferation and apoptosis of phloretin on the hepatoma carcinoma cells HepG-2

WANG Hui,LIU Zheng,WU Han-dong

(College of Food Science and Engineering, Liaoning Medical University, Jinzhou 121001, China)

ObjectiveTo investigate proliferative and apoptotic effects of phloretin on hepatoma carcinoma cells, hepatoma carcinoma cells HepG-2 was used as research materials.MethodsThis research observed morphological alterations using phase contrast microscopy and electron microscopy, cell proliferation were detected by MTT assay, and using flow cytometry detected apoptotic rates, cell cycle progression, mitochondrial trans-membrane potential and intracellular calcium homeostasis.ResultsApoptotic cells appeared morphological alterations.Phloretin exerted a inhibitory the proliferation of HepG-2 cell line, and induced its apoptosis in a dosage and duration dependent manner.Cell cycle was arrested at G1 phase, mitochondrial trans-membrane potential dropped, intracellular free Ca2+increased.ConclusionPhloretin can induce apoptosis of HepG-2 via arresting cell cycle progression, reducing mitochondrial trans-membrane potential and disturbing intracellular calcium homeostasis.

phloretin; human hepatoma cells; apoptosis; proliferation

王會(huì)，男，碩士，講師，研究方向：細(xì)胞凋亡，E-mail: yxlwhx077@163.com。

R735.7

A

1005-1678(2015)07-0039-05