陳新妹 王楚華 劉露暉 王欒玲 肖杏葵 郭曉琴

臨床研究論著

Cervista高危型HPV分型在宮頸癌篩查的臨床價值

陳新妹 王楚華 劉露暉 王欒玲 肖杏葵 郭曉琴

目的觀察Cervista高危型人乳頭瘤病毒(HR-HPV)檢測技術(shù)及HR-HPV分型對宮頸癌篩查的有效性及臨床價值。方法對1 000名婦女同時行液基細胞學(xué)(TCT)及Cervista技術(shù)檢測HR-HPV，對細胞學(xué)檢測大于或等于ASC-US的患者行病理活組織檢查(活檢)。評價細胞學(xué)級別、病理學(xué)級別，記錄不同TCT級別及不同病理學(xué)級別的HR-HPV分型(A9、A7、A5/A6)，分析HR-HPV 分型與CINⅢ級或以上級別的關(guān)系。結(jié)果ASC-US及以上級別者的HR-HPV陽性率均高于正?；蜓装Y級別者，LSIL及HSIL級別者的HR-HPV陽性率均高于ASC-US級別者，HSIL級別者的HR-HPV陽性率高于ASC-H級別者，P均<0.005。LSIL及HSIL級別者A9型陽性率高于正?；蜓装Y級別者，HSIL級別者A9型陽性率高于ASC-US者，P均<0.005。對細胞學(xué)結(jié)果為ASC-US及以上的246例患者進行活檢， HR-HPV的陽性率從炎癥時的40.9%逐漸升高到CINⅢ級別時的92.9%。CINⅡ、CINⅢ者A9型HR-HPV感染陽性率均高于炎癥及CINⅠ者(P均<0.005)。針對CINⅢ或以上級別病變，HR-HPV的敏感度為93.3%、特異度為48.8%，陽性預(yù)測值6.7%，陰性預(yù)測值99.0%，約登指數(shù)0.42。各HR-HPV分型中，HR-HPV A9的敏感度及約登指數(shù)較高。結(jié)論Cervista HR-HPV對CINⅢ或以上病變檢測的敏感度、陰性預(yù)測值較高，可用于宮頸癌的篩查。當患者檢出A9型HR-HPV感染時，需建議患者進一步檢查或加強隨訪。

Cervista高危型HPV檢測；宮頸癌；子宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變；液基細胞學(xué)檢測

宮頸癌是女性常見惡性腫瘤之一，其發(fā)生、發(fā)展為多因素共同作用的結(jié)果。研究發(fā)現(xiàn)，持續(xù)的人乳頭瘤病毒(HPV)感染與宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。根據(jù)宮頸癌發(fā)生的危險性，HPV分為高危型(HR-HPV)、低危型(LR-HPV)，95%的宮頸癌與HR-HPV持續(xù)感染有關(guān)[1]。Cervista HR-HPV檢測技術(shù)于2009年獲美國FDA批準進入臨床，2011年獲批進入中國，目前相關(guān)報道仍不多。本研究觀察Cervista HR-HPV檢測對于宮頸病變檢出的有效性及其分型檢測對臨床的指導(dǎo)意義，旨在為其在宮頸癌篩查的合理應(yīng)用提供依據(jù)，現(xiàn)報告如下。

對象與方法

一、研究對象

2012年1月至2013年5月在我院婦科門診就診1 000例懷疑有宮頸病變或HPV感染的婦女，年齡20～65歲，均有性生活史、至少3年未參加過子宮頸癌篩查，排除妊娠期及哺乳期婦女、月經(jīng)期婦女及12個月內(nèi)接受過盆腔放射治療史的婦女。

二、方法

1.液基細胞學(xué)檢測

對入選對象行宮頸液基細胞學(xué)(TCT)檢測，檢測結(jié)果按照國際標準的TBS2001診斷標準分為正?；蜓装Y、無明確診斷意義的非典型鱗狀上皮細胞(ASC-US)、非典型鱗狀細胞不除外高級別鱗狀上皮內(nèi)病變(ASC-H)、低級別鱗狀上皮內(nèi)病變(LSIL)、高級別鱗狀上皮內(nèi)病變(HSIL)、非典型腺上皮細胞(AGC)、鱗狀細胞癌(SCC)和腺癌(AC)。

2.CervistaHR-HPV檢測

對入選對象采用Cervista HR-HPV DNA檢測試劑盒(Hologic公司，美國)檢測14種HR-HPV，嚴格依照試劑盒說明書步驟操作，結(jié)果分為A9、A7、A5/A6型。

3.病理學(xué)檢查

對細胞學(xué)檢測結(jié)果等于或高于ASC-US的患者行陰道鏡下多點病理活組織檢查(活檢)。檢查結(jié)果按照病理學(xué)分級原則分為正常、子宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變(CIN)Ⅰ、CINⅡ、CINⅢ、鱗癌、腺癌。

三、統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS 13.0統(tǒng)計學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)。無序分類資料組間比較采用χ2檢驗或Fisher確切概率法?？傮w比較以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義，多重比較以P<0.05/n為差異有統(tǒng)計學(xué)意義，n為比較的次數(shù)。

結(jié) 果

一、TCT不同級別病變者的HR-HPV陽性率比較

TCT不同級別病變者的HR-HPV陽性率組間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=344.1，P<0.01)。兩兩比較顯示，ASC-US及以上級別者的HR-HPV陽性率均高于正?；蜓装Y級別者(P均<0.05/10=0.005)；LSIL及HSIL級別者的HR-HPV陽性率均高于ASC-US級別者(P均<0.005)；HSIL級別者的HR-HPV陽性率高于ASC-H級別者(P<0.005)，見表1。

表1 TCT不同級別病變HR-HPV陽性率比較 例(%)

二、TCT不同級別病變者的HR-HPV分型比較

TCT不同級別病變者的HR-HPV分型比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=32.97，P<0.01)。各級別A9型陽性率均高于A7及A5/A6型。LSIL及HSIL級別者A9型陽性率高于正?；蜓装Y級別者(P均<0.005)，HSIL級別者A9型陽性率高于ASC-US者(χ2=6.91，P<0.005)，見表2。

表2 TCT不同級別病變者的HR-HPV分型比較 例(%)

三、病理學(xué)不同級別病變者的HR-HPV陽性率比較

對細胞學(xué)結(jié)果為ASC-US及以上的246例患者進行活檢，HR-HPV的陽性率從炎癥時的40.9%逐漸升高到CINⅢ級別時的92.9%，見表3。

四、病理學(xué)不同級別病變者的HR-HPV分型比較

隨著病理學(xué)級別升高，A7型組和A5/A6型組的HR-HPV感染陽性率未呈現(xiàn)明顯的上升趨勢。CINⅡ、CINⅢ者A9型HR-HPV感染陽性率高于炎癥及CINⅠ者(P均<0.005)，見表4。

表4 病理學(xué)不同級別病變者的HR-HPV分型比較 例(%)

注：與炎癥級別比較，aP<0.005；與CINⅠ比較，aP<0.005

五、HR-HPV的診斷效能分析

針對CINⅢ或以上級別病變，HR-HPV的敏感度為93.3%(14/15)、特異度為48.8%(103/211)，假陽性率51.2%(108/211)，陽性預(yù)測值6.7%(14/122)，陰性預(yù)測值99.0%(103/104)，約登指數(shù)0.42。各HR-HPV分型中，HR-HPVA9型的敏感度及約登指數(shù)較高，見表5。

表5 HR-HPV 分型對CINⅢ或以上級別的診斷效能評價

注：約登指數(shù)=(敏感度+特異度)-1

討 論

宮頸癌是影響女性健康的第二大惡性腫瘤，其發(fā)病率及病死率在發(fā)展中國家更高，而我國宮頸癌病死率約占全球的15%[2]。宮頸癌的早期診斷對改善患者預(yù)后有重要意義。TCT與HPV聯(lián)合篩查是美國陰道鏡檢查與子宮頸病理學(xué)會、美國婦產(chǎn)科醫(yī)師學(xué)會推薦的宮頸癌篩查最佳方案[3]。與宮頸癌及癌前病變密切相關(guān)的HR-HPV主要有14種亞型，分為3組：A9組的16、31、33、35、52、58型，A5/A6組的51、56、66型，A7組的18、39、45、59、68。傳統(tǒng)的雜交捕獲法僅能檢測13種HR-HPV，Cervista HR-HPV檢測技術(shù)不僅能一次性檢測由國際癌癥研究機構(gòu)(IARC)確定的最新14種HR-HPV，還可區(qū)分A9、A7和A5/A6 3型，并含有內(nèi)部質(zhì)控的功能，可評估樣本量是否符合檢測要求，避免因樣本量不足而導(dǎo)致的假陰性，保證了陰性結(jié)果的準確度，符合未來的國際檢測規(guī)范[4-5]。

本研究顯示，AUC-US及以上級別者HR-HPV感染陽性率為71.1%，明顯高于正常或炎癥時的13.1%，與文獻報道相似[6]。趙婷婷等[7]采用Cervista HR-HPV檢測法對3 206例婦女行宮頸癌篩查發(fā)現(xiàn)，隨細胞學(xué)分級升高，HR-HPV感染率逐漸上升，A9組感染率最高，說明HSIL和鱗狀細胞癌與HR-HPV感染關(guān)系最密切。本研究顯示，ASC-US及以上級別者的HR-HPV陽性率均高于正?；蜓装Y級別者，LSIL及HSIL級別者的HR-HPV陽性率均高于ASC-US級別者，HSIL級別者的HR-HPV陽性率高于ASC-H級別者。另外，LSIL及HSIL者A9型陽性率高于正常或炎癥者，HSIL者A9型陽性率高于ASC-US者。從ASC-H級別開始，隨著細胞學(xué)病變的逐級加重，HR-HPV感染陽性率呈逐漸上升趨勢，至HSIL級別時HR-HPV感染陽性率達97.5%。另外，對細胞學(xué)結(jié)果為ASC-US及以上者進行活檢， HR-HPV的陽性率從炎癥時的40.9%逐漸升高到CINⅢ級別時的92.9%。說明隨著病變的逐級加重， HR-HPV感染陽性率呈上升趨勢。

趙健等[6]和Kim[9]研究均發(fā)現(xiàn)A7型組和A5/A6型組和病理結(jié)果分級之間沒有明確的關(guān)系，而A9亞型組HR-HPV感染與女性CINⅡ或以上病變關(guān)系密切，持續(xù)A9型組HR-HPV感染者患CINⅡ或以上病變的風(fēng)險更高。宮頸癌篩查臨床研究發(fā)現(xiàn)，在機會人群中HR-HPV感染率較高的是16、52、58型，在已發(fā)生病變?nèi)巳褐蠬R-HPV感染率較高的是16、31、33型，這些亞型都屬于HR-HPV家族分類中的A9型組。我國及韓國多項大規(guī)模HPV流行病學(xué)調(diào)查研究顯示，80%以上的CINⅢ或以上病變與A9型組HPV感染密切相關(guān)，表明A9型HR-HPV感染在評估我國女性人群患宮頸癌高級別病變風(fēng)險時具有重要的臨床價值[10]。本研究同樣顯示，A7型和A5/A6型HR-HPV感染陽性率未呈現(xiàn)明顯的上升趨勢。雖然A9型組HR-HPV感染陽性率亦未呈現(xiàn)逐級上升的趨勢，但CINⅡ、CINⅢ者A9型HR-HPV感染陽性率均高于炎癥及CINⅠ者，提示A9型組HR-HPV感染者患宮頸癌或癌前病變的風(fēng)險更高。建議應(yīng)對持續(xù)HR-HPV A9型感染陽性患者進行陰道鏡檢查。本研究對CINⅢ或以上級別病變結(jié)果進行分析，發(fā)現(xiàn)A9型組HR-HPV的敏感度在3個型中是最高的，分別為93.3%和99.4%，說明HR-HPVA9型對CINⅢ或以上病變更敏感。Einstein等[8]對細胞學(xué)為ASC-US以上者進行病理分析發(fā)現(xiàn)，HR-HPV對CINⅡ或以上的敏感度為92.8%，陰性預(yù)測值為99.1%，本研究結(jié)果與其基本一致。

綜上所述，Cervista HR-HPV篩查宮頸病變的敏感度和陰性預(yù)測值均較高，臨床上Cervista HR-HPV檢測與TCT聯(lián)合進行宮頸病變的篩查，能有效降低單獨細胞學(xué)檢查時假陰性結(jié)果的風(fēng)險，減少漏診。建議女性患者A9型組HPV檢測結(jié)果陽性時，應(yīng)給予更為密切的隨診進一步明確是否存在更高級別的宮頸病變，從而到達對宮頸癌早診斷、早治療的目的，以改善患者的預(yù)后。有關(guān)Cervista HR-HPV檢測技術(shù)能否取代TCT，尚需要更多的臨床資料行進一步研究。

[1]Bartholomew DA, Luff RD, Quigley NB, Curtis M, Olson MC.Analytical performance of Cervista HPV 16/18 genotyping test for cervical cytology samples.J Clin Virol, 2011,51(1):38-43.

[2]Bhatla N, Maheswari ND.HPV screening for cervical cancer in rural India: do we have an answer? Natl Med J India, 2009,22(4):183-184.

[3]Saslow D, Solomon D, Lawson HW, Killackey M, Kulasingam SL, Cain J, Garcia FA, Moriarty AT, Waxman AG, Wilbur DC, Wentzensen N, Downs LS Jr, Spitzer M, Moscicki AB, Franco EL, Stoler MH, Schiffman M, Castle PE, Myers ER; American Cancer Society; American Society for Colposcopy and Cervical Pathology; American Society for Clinical Pathology.American Cancer Society, American Society for Colposcopy and Cervical Pathology, and American Society for Clinical Pathology screening guidelines for the prevention and early detection of cervical cancer. Am J Clin Pathol,2012 ,137(4):516-542.

[4]Min KJ, So KA, Lee J, Hong HR, Hong JH, Lee JK, Kim AR. Comparison of the Seeplex HPV4A ACE and the Cervista HPV assays for the detection of HPV in hybrid capture 2 positive media.J Gynecol Oncol, 2012,23(1):5-10.

[5]Gold MA, Thomas MA, Huh WK, Sarto GE, Day SP. High-risk human papillomavirus detection in women with low-grade squamous intraepithelial lesions or higher-grade cytology using the Cervista HPV HR test. J Low Genit Tract Dis, 2013,17(1):51-57.

[6]趙健,張曉光,陳銳,畢惠，王旭，劉桂文，姚殿昕，曾毅，廖秦平.高危型人乳頭狀瘤病毒DNA檢測方法在宮頸疾病中的臨床意義 .中華實驗和臨床病毒學(xué)雜志,2011,25(2):149-151.

[7]趙婷婷,袁亞,蔣舒平,涂煥平.新型Cervista酶切信號擴大法檢測高危型HPV用于宮頸癌篩查結(jié)果分析.山東醫(yī)藥,2014,54(10):70-72.

[8]Einstein MH, Garcia FA, Mitchell AL, Day SP. Age-stratified performance of the Cervista HPV 16/18 genotyping test in women with ASC-US cytology.Cancer Epidemiol Biomarkers Prev, 2011,20(6):1185-1189.

[9]Kim CJ, Lee YS, Kwack HS, Yoon WS, Park TC, Park JS. Specific human papillomavirus types and other factors on the risk of cervical intraepithelial neoplasia: a case-control study in Korea. Int J Gynecol Cancer, 2010,20(6):1067-1073.

[10]Zhao J, Zhang X, Ma J, Liu G, Yao D, Zhang W, Wang J, Wei L, Zhao Y, Zeng Y, Liao Q. Clinical performance characteristics of the Cervista HPV HR test kit in cervical cancer screening in China.J Low Genit Tract Dis, 2012,16(4):358-363.

(本文編輯：林燕薇)

ClinicalvalueofapplicationofCervistahigh-riskHPVgenotypinginscreeningofcervicalcancer

ChenXinmei,WangChuhua,LiuLuhui,WangLuanling,XiaoXingkui,GuoXiaoqin.

PathologyDepartment,YingdePeople’sHospital,Yingde513000,China

，ChenXinmei,E-mail:chenxinm@126.com

ObjectiveTo observe the validity and clinical value of the Cervista high-risk human papillomaviral infection (HR-HPV)testing and HPV genotyping in the screening of cervical cancer.MethodsA total of 1000 women simultaneously

liquid-based cytology (TCT) and Cervista technology for detection of HR-HPV. Patitents suspected with cytological characteristics of atypicai squamous cells of unknown significance (ASC-US) grade or above underwent histopathological biopsy. Cytological and pathological grades were evaluated. HR-HPV genotypes (A9, A7 and A5/A6) of different TCT and pathological grades were recorded. The relationship between HR-HPV genotype and CINⅢ grade or above was analyzed.ResultsThe positive rate of HR-HPV in subjects with ASCUS grade or above was significantly higher compared with those of normal and inflammatory counterparts. Compared with ASC-US subjects, those with LSIL and HSIL grade had a significantly higher positive rate of HR-HPV. The positive rate of HR-HPV in those with HSIL grade was considerably higher than that of the subjects with ASC-H grade (allP<0.005). The positive rate of type A9 HPV infection in the subjects with LSIL and HSIL grade was significantly higher than that in normal and inflammation counterparts. The positive rate of type A9 HPV infection in the HSIL subjects was apparently higher than that in the ASC-US counterparts (bothP<0.005). Cytological testing revealed that 246 subjects developed ASC-US grade or above and subsequently received pathological biopsy. The positive rate of HR-HPV was gradually increased from 40.9% during the inflammation stage to 92.9% in the CINⅢ stage. The subjects with CINⅡ and CINⅢ grade had significantly higher positive rates of type A9 HR-HPV compared with their counterparts with inflammation and CIN I (allP<0.005). For CINⅢ grade or above, the sensitivity, specificity, positive and negative predictive values of Cervista HR-HPV were 93.8%, 48.8%, 6.7% and 99.0%, respectively. Youden’s index was 0.42. Among different HR-HPV genotypes, the sensitivity and Youden’s index of A9 type HR-HPV were the highest.ConclusionCervista HR-HPV has a high sensitivity and negative predictive value in the screening of CIN III grade or above HR-HPV, which can be applied in the screening of cervical cancer. If detected with type A9 HR-HPV infection, the patients should receive further examination and should be closely followed up.

Cervista high-risk HPV testing; Cervical cancer; Cervical intraepithelial neoplasia; Liquid-based cytology test

10.3969/g.issn.0253-9802.2015.08.016

513000 英德，英德市人民醫(yī)院病理科(陳新妹，肖杏葵，郭曉琴)，婦科 (劉露暉，王欒玲)，頸胸外科(王楚華)

，陳新妹，E-mail:chenxinm@126.com

2015-03-02)