沈 蕓，徐蓓蕾，2，楊新宇

(1.哈爾濱商業(yè)大學(xué)生命科學(xué)與環(huán)境科學(xué)研究中心，哈爾濱150076;2.哈爾濱商業(yè)大學(xué)藥學(xué)院，哈爾濱150076)

藥對(duì)又稱為對(duì)藥，是復(fù)方組成最小的單位，也是中醫(yī)臨床用藥中相對(duì)固定的兩味藥的配伍形式[1－3].藥對(duì)通過各種不同形式的配伍，有的起到相須、相使的作用使療效增強(qiáng)，有的起到相輔的作用而間接增強(qiáng)某一功效，有的起到相畏相殺的作用而相互制約，或者有的可以通過發(fā)揮選擇性的引經(jīng)作用而增強(qiáng)治療效果[4].黃連和不同的藥物配伍功能主治各不相同，常見的黃連藥對(duì)有“黃連－黃柏”[5]、“黃連 － 黃芩”[6]、“黃連 － 吳茱萸”[7]、“黃連－大黃”[8]等.通過對(duì)黃連不同功效藥對(duì)中有效成分的質(zhì)量濃度測(cè)定，探討黃連功效與成分間的關(guān)系，可以為傳統(tǒng)中藥配伍規(guī)律的研究奠定基礎(chǔ).

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 儀器

戴安Thermo u3000高效液相色譜儀;BS110S電子分析天平(北京賽多利斯天平有限公司)

1.2 藥品及試劑

黃連(購(gòu)自亳州中藥飲片廠);梔子、大黃、黃柏、龍膽草、吳茱萸、黃芩、蘆薈(均購(gòu)自哈爾濱寶豐藥店);鹽酸小檗堿(四川維克奇對(duì)照品公司);乙腈(色譜純)，甲醇(色譜純).

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱為Agilent C18(150 ×5 mm，5 μm);流動(dòng)相為乙腈 －KH2PO4溶液(0.02 mol/L)(35∶65);流速1 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng)345 nm;柱溫為室溫;進(jìn)樣量 10 μL.

2.2 對(duì)照品溶液制備

分析天平精密稱取鹽酸小檗堿標(biāo)準(zhǔn)品0.005 2 g至燒杯中，甲醇溶液溶解，10 mL容量瓶定容，即得對(duì)照品貯備液，待用.

2.3 供試品溶液的制備

取黃連生品分成等量的8份，每份3 g.標(biāo)記各組黃連藥對(duì)，1號(hào)黃連+黃芩，2號(hào)黃連+黃柏，3號(hào)黃連+吳茱萸，4號(hào)黃連+龍膽草，5號(hào)黃連+大黃，6號(hào)黃連+梔子，7號(hào)黃連+蘆薈粉，8號(hào)黃連+黃芩.根據(jù)配伍比例稱量與之配伍的中藥飲片的質(zhì)量:黃芩 6 g，黃柏5 g，吳茱萸 2 g，龍膽草 2 g，大黃5 g，梔子3 g，蘆薈粉3 g，黃芩6 g，分別置于燒瓶中加10倍量的水，煎煮，待水沸騰后記錄時(shí)間，繼續(xù)加熱30 min后，用紗布趁熱過濾備用，取濾渣放于燒瓶中再加10倍量的水，按照上法煎煮過濾，將兩次過濾的濾液合并，濃縮生藥質(zhì)量濃度為1 mg/mL，待用.

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

用移液管分別量取對(duì)照品貯備液0.02、0.04、0.10、0.2、1、2、5 mL 至 10 mL 容量瓶中，甲醇定容，得到質(zhì)量濃度為 0.001、0.002、0.005、0.01、0.05、0.1、0.25 mg/mL 的鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液.進(jìn)樣10 μL/次，記錄峰面積值，以峰面積為縱坐標(biāo)，對(duì)照品溶液質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到回歸方程為:Y=37.643X+0.9874，r=0.999 3，表明在0.001～0.25 mg/mL范圍內(nèi)，鹽酸小檗堿質(zhì)量濃度與峰面積呈良好的線性關(guān)系.

2.5 精密度試驗(yàn)

精密吸取對(duì)照品溶液 10 μL，在“2.1”項(xiàng)色譜條件下重復(fù)進(jìn)樣5次，記錄峰面積，鹽酸小檗堿峰面積RSD為1.03%，結(jié)果表明儀器精密度良好.

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

取1號(hào)組樣品5份，按照供試品溶液制備方法制備，“2.1”色譜條件進(jìn)樣分析，結(jié)果鹽酸小檗堿平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.276%，RSD為0.62%，表明該方法重復(fù)性良好.

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取 1 號(hào)供試品溶液，分別于 0、2、4、6、8、10、12 h進(jìn)行測(cè)定，記錄峰面積，鹽酸小檗堿RSD為0.58%，表明供試品溶液12 h內(nèi)穩(wěn)定.

2.8 加樣回收率試驗(yàn)

取1號(hào)組樣品6份，每份0.5 g，分別加入適量鹽酸小檗堿對(duì)照品，按照供試品溶液制備方法制備，“2.1”色譜條件進(jìn)樣分析，計(jì)算加樣回收率.結(jié)果測(cè)得平均回收率為99.74%，RSD為0.65%，表明本方法回收率良好.見表1.圖1.

圖1 各組供試品溶液色譜圖

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.9 樣品測(cè)定

2.9.1 各組供試品溶液色譜圖

取1～8號(hào)組供試品溶液各 10 μL，在“2.1”色譜條件下進(jìn)樣分析，各組色譜圖見圖1.

2.9.2 各組供試品中小檗堿質(zhì)量分?jǐn)?shù)

根據(jù)圖1黃連不同功效藥對(duì)中鹽酸小檗堿的色譜圖，根據(jù)峰面積計(jì)算黃連配伍后各藥對(duì)中鹽酸小檗堿的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，數(shù)據(jù)結(jié)果見圖2.由結(jié)果可知黃連各個(gè)藥對(duì)中鹽酸小檗堿的的質(zhì)量分?jǐn)?shù)大致在0.273% ～0.606%范圍之間，其中“黃連 +吳茱萸”、“黃連+龍膽草”兩組質(zhì)量分?jǐn)?shù)最高，質(zhì)量分?jǐn)?shù)最低的為“黃連+黃柏”組.

圖2 各組供試品小檗堿質(zhì)量分?jǐn)?shù)柱狀圖

3 結(jié)語(yǔ)

黃連是傳統(tǒng)中藥，主要功效是清熱燥濕，清火解毒[9]，常與不同藥物配伍組成藥對(duì).張振巍[10]等人研究了黃芩、黃連配伍前后的主要化學(xué)成分質(zhì)量分?jǐn)?shù)變化，對(duì)黃連、黃芩藥對(duì)提取物中的11個(gè)有效指標(biāo)成分進(jìn)行了質(zhì)量評(píng)價(jià)，結(jié)果顯示黃連、黃芩藥對(duì)中鹽酸小檗堿的質(zhì)量分?jǐn)?shù)在兩組中都處于較低水平，說(shuō)明黃連和黃芩在配伍過程中化學(xué)成分可能變化，并且在供試品制備過程中，黃連黃芩共水煎煮時(shí)產(chǎn)生沉淀，使有效成分的質(zhì)量分?jǐn)?shù)降低，沉淀物主要成分可能為黃連+黃芩藥對(duì)藥材中的有效成分鹽酸小檗堿.本實(shí)驗(yàn)按照傳統(tǒng)中藥配伍規(guī)律將黃連與不同中藥材進(jìn)行配伍，形成黃連藥對(duì)，比較分析各組藥對(duì)配伍后鹽酸小檗堿質(zhì)量分?jǐn)?shù)變化，可推測(cè)藥材在煎煮過程中某些化學(xué)成分發(fā)生改變.當(dāng)黃連與吳茱萸配伍后，黃連中的鹽酸小檗堿的質(zhì)量分?jǐn)?shù)增加，可能是黃連生物堿與吳茱萸生物堿配伍后具有加和性，有利于鹽酸小檗堿的溶出，使得黃連藥對(duì)中鹽酸小檗堿的質(zhì)量分?jǐn)?shù)有所增加，龍膽草中也含生物堿，所以黃連和龍膽草藥對(duì)中鹽酸小檗堿的質(zhì)量分?jǐn)?shù)也較高.黃連和大黃在特定配伍比例范圍內(nèi)有利于藥對(duì)中鹽酸小檗堿的保留，然而大黃與黃連在合并兩次濾液過程時(shí)，黃連中的鹽酸小檗堿和大黃中的某些成分生成了懸浮的沉淀，猜測(cè)沉淀為部分鹽酸小檗堿，這樣就導(dǎo)致了黃連和大黃配伍藥對(duì)中鹽酸小檗堿質(zhì)量分?jǐn)?shù)的降低.黃連和梔子配伍在煎煮過程中，梔子的主要化學(xué)成分梔子苷對(duì)酸，對(duì)熱不穩(wěn)定，使得黃連中鹽酸小檗堿的質(zhì)量分?jǐn)?shù)降低.本實(shí)驗(yàn)明確了黃連的配伍規(guī)律，同時(shí)也確定了黃連的功效與藥對(duì)中鹽酸小檗堿的質(zhì)量濃度具有相關(guān)性，為傳統(tǒng)中藥的配伍規(guī)律奠定了基礎(chǔ).

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