王 淼，孫思邈，田 明

(1.哈藥集團(tuán)技術(shù)中心，哈爾濱150025;2.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，哈爾濱150040;3.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)中心，哈爾濱150040)

延胡索總生物堿是罌粟科植物延胡索的干燥塊莖中提取分離出來的總生物堿有效部位，具有活血化瘀，利氣止痛的作用[1－2].根據(jù)中藥新藥的技術(shù)研究要求，中藥五類新藥為“未在國(guó)內(nèi)上市銷售的從植物、動(dòng)物、礦物等物質(zhì)中提取的有效部位及其制劑”，其有效部位含量應(yīng)占提取物的50%以上[3－4].本文選取硅鎢酸質(zhì)量法，將延胡索生物堿轉(zhuǎn)化成為可以準(zhǔn)確稱量的形式，進(jìn)行質(zhì)量分?jǐn)?shù)檢測(cè)和計(jì)算[5－7].

1 儀器與試藥

電子分析天平:AB204－N，梅特勒－托利多儀器上海有限公司

電子分析天平:ESJ182－4，沈陽(yáng)龍騰電子有限公司

電熱鼓風(fēng)干燥箱:DZF－6030A，上海一恒科技有限公司

茂福爐:沈陽(yáng)市電爐廠RJM－28－10

差熱－熱重分析儀:北京光學(xué)儀器廠WCF－2A(北京恒久科學(xué)儀器廠)

垂熔玻璃漏斗:G4

延胡索總生物堿:自制

硅鎢酸:天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所2011年5月20日

冰乙酸、碘化鉍鉀、碘化汞鉀、碘化鉀均為分析純

2 硅鎢酸測(cè)定總生物堿原理

在酸性環(huán)境下，硅鎢酸能夠和多數(shù)生物堿生成一定的沉淀，一分子硅鎢酸可以和四分子含1個(gè)堿性氮原子或二分子含二個(gè)堿性氮原子的生物堿相結(jié)合，生成硅鎢酸鹽沉淀.延胡索提取物當(dāng)中，已知的生物堿均為含1個(gè)氮原子的，若以M表示生物堿，則反應(yīng)原理如下:

4M+SiO2·12WO3·26H2O → M4·2H2O·SiO2·12WO3·5H2O ↓+19H2O

生成的硅鎢酸鹽在高溫灼燒后，有機(jī)成分被分解，留下二氧化硅和氧化鎢殘?jiān)?

M4·2H2O·SiO2·12WO3·5H2O → SiO2·12WO3+CO2↑ +N2↑ +H2O↑

根據(jù)化合物的質(zhì)量比例關(guān)系，稱其質(zhì)量，即可計(jì)算總生物堿的質(zhì)量分?jǐn)?shù).

3 實(shí)驗(yàn)方法

3.1 供試品溶液的制備

取延胡索總生物堿約5 g，精密稱定5.037 1 g，記為W，置于100 mL容量瓶當(dāng)中，加0.1 mol/L的冰醋酸溶液適量，振搖使溶解并定容至刻度，搖勻，即可.

3.2 硅鎢酸溶液的制備

取硅鎢酸適量，加水制成體積分?jǐn)?shù)約為20%的硅鎢酸溶液.

3.3 測(cè)定方法

精密量取供試品溶液30 mL，置于100 mL三角燒瓶當(dāng)中，緩慢加入硅鎢酸溶液30 mL，在加入的過程中用玻璃棒不斷攪拌.密閉，放置過夜.

將垂熔玻璃漏斗置于電熱鼓風(fēng)干燥箱中，105℃條件下干燥，直至恒重，精密稱定，記為M;用已恒重的垂熔玻璃漏斗對(duì)沉淀物進(jìn)行過濾，用0.05 mol/L的冰乙酸溶液沖洗三角燒瓶和玻璃棒，沖洗3次，每次15 mL，再用0.05 mol/L的冰乙酸溶液200 mL洗滌沉淀物;將附有沉淀物的垂熔玻璃漏斗于105℃干燥至恒重，精密稱定，記為W1.

取已干燥至恒重的沉淀約2 g，精密稱定，記為W2，置于熾灼至恒重的坩堝中，800～850℃高溫灼燒至恒重，稱定，計(jì)算灼燒后殘?jiān)|(zhì)量，記為W3.根據(jù)下列公式計(jì)算生物堿質(zhì)量分?jǐn)?shù).

4 方法學(xué)考察

4.1 反應(yīng)完全性的考察

取供試品溶液30 mL，置于100 mL三角燒瓶當(dāng)中，加入緩慢加入硅鎢酸溶液30 mL，邊加邊攪拌或振搖.密閉，放置過夜.取上清液3份，每份5 mL，分別置于試管中，分別加入碘化鉍鉀試液、碘化汞鉀試液、碘化鉀碘試液，觀察是否產(chǎn)生沉淀.

表1 沉淀反應(yīng)結(jié)果表

結(jié)果分析:經(jīng)三種生物堿沉淀試劑檢測(cè)，均無肉眼可見沉淀產(chǎn)生，證明生物堿沉淀完全.

4.2 干燥及熾灼溫度范圍考察

在差熱－熱重分析儀中，放入空的樣品坩堝和參比坩堝，儀器穩(wěn)定后清零;在參比坩堝中放入約7 mg α－三氧化二鋁，儀器穩(wěn)定后再次清零;在樣品坩堝中放入約5 mg的3.3項(xiàng)下沉淀，儀器穩(wěn)定后，讀取樣品質(zhì)量，編輯溫度程序，溫度:室溫～850℃，程序升溫指數(shù):0～80 min.結(jié)果分析:由圖1可知，藍(lán)色線為供試品熱量曲線，紅色線為供試品質(zhì)量曲線，黑色線為程序升溫曲線.

供試品在25～200℃時(shí)，供試品質(zhì)量線比較平穩(wěn)，表明未有明顯吸熱、放熱反應(yīng)發(fā)生，結(jié)構(gòu)未發(fā)生分解，故干燥溫度選擇在0～200℃范圍內(nèi).供試品在200～600℃時(shí)，供試品熱量曲線有較大變化，表明供試品有明顯的吸熱、放熱反應(yīng)發(fā)生，在溫度600℃時(shí)，吸熱達(dá)到頂峰，然后開始放熱，此時(shí)，質(zhì)量曲線也開始有著明顯的下降趨勢(shì)，直至650℃開始平穩(wěn)，表明沉淀中的結(jié)晶水失去，化學(xué)結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，故熾灼溫度選擇應(yīng)大于600℃.結(jié)合硅鎢酸的性質(zhì)，保證沉淀干燥、灼燒完全，最終確定干燥溫度定為105℃，熾灼溫度范圍為800～850℃.

圖1 差熱－熱重分析圖

4.3 重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)

取延胡索總生物堿，5份，照3.1項(xiàng)下供試品處理方法處理，取每份供試品溶液30 mL，按3.3項(xiàng)下測(cè)定方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，計(jì)算生物堿的量.見表2.

上述結(jié)果表明，該實(shí)驗(yàn)方法重現(xiàn)性良好.

4.4 供試品質(zhì)量分?jǐn)?shù)測(cè)定

見表3.

表2 重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表

表3 供試品測(cè)定結(jié)果

5 討論

根據(jù)中藥新藥的技術(shù)研究要求，中藥五類新藥為“未在國(guó)內(nèi)上市銷售的從植物、動(dòng)物、礦物等物質(zhì)中提取的有效部位及其制劑”，其有效部位含量應(yīng)占提取物的50%以上.延胡索總生物堿是由20多種生物堿所組成，運(yùn)用比色法、高效液相色譜法，以其中的某一種或幾種生物堿為對(duì)照進(jìn)行測(cè)定，所測(cè)得的結(jié)果不夠全面和準(zhǔn)確，因此，選取硅鎢酸質(zhì)量法.

在試驗(yàn)的過程中，本文做了大量的基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)，分別以鹽酸小檗堿、原阿片堿、硝酸脫氫紫堇堿、鹽酸巴馬汀、鹽酸黃連堿等近10種對(duì)照品作為對(duì)照，采用酸性染料比色法進(jìn)行了總生物堿質(zhì)量分?jǐn)?shù)測(cè)定，測(cè)定結(jié)果亦不盡相同，故采用質(zhì)量法來測(cè)定總生物堿含量，選取硅鎢酸作為生物堿沉淀試劑，將所有生物堿轉(zhuǎn)變成為能夠準(zhǔn)確稱量的形式，根據(jù)沉淀的質(zhì)量，以及反應(yīng)相應(yīng)的比例關(guān)系，來計(jì)算總生物堿的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，方法新穎，結(jié)果直接、準(zhǔn)確.

[1]孫世曉，夏學(xué)麗，蘇曉悅，等.延胡索總生物堿防治大鼠急性心肌缺血作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2012，40(4):45－49.

[2]曲麗.延胡索總生物堿對(duì)Iso誘導(dǎo)急性心肌缺血大鼠模型保護(hù)作用的研究[D].哈爾濱:黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，2010.

[3]章育中，周同惠，沙世炎，等.植物藥中一些主要成分測(cè)定方法的研究[J].藥學(xué)學(xué)報(bào)，1962，9(9):541－547.

[4]胡季強(qiáng)，王如偉，呂 燊，等.大孔樹脂分離純化延胡索總生物堿的工藝研究[J].中國(guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)，2009，26(4):271－273.

[5]國(guó)家藥典委員會(huì)編.中華人民共和國(guó)中國(guó)藥典2010版一部[M].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010.130－131.

[6]孫宏宇.延胡索總生物堿醋酸鹽制備工藝與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[D].哈爾濱:黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，2010.

[7]姜霽洺，楊 婧，邱金雙，等.蛇床子干乳劑的制備與穩(wěn)定性考察[J].哈爾濱商業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版，2014，30(4):409－412.