孫亞京，黃益麒，潘旭鳴，黃 平△

（1.浙江中醫(yī)藥大學(xué)第三臨床醫(yī)學(xué)院，浙江 杭州530053；2.浙江中醫(yī)藥大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院，浙江 杭州530053）

多囊卵巢綜合征（PoIycystic ovary syndrome，PCOS）是一種育齡期和青春期婦女常見的排卵障礙性疾病，患者以高雄激素血癥，胰島素抵抗為主要特征，臨床表現(xiàn)為月經(jīng)稀發(fā)、閉經(jīng)、肥胖、多毛和不孕等。而胰島素抵抗既是影響其發(fā)病的重要因素，還是PCOS 患者主要病理生理改變[1-3]。目前，中醫(yī)學(xué)者普遍認(rèn)為“痰瘀互結(jié)”是PCOS 伴胰島素抵抗的主要病機(jī)。根據(jù)丹溪的“痰瘀理論”，本研究擬觀察其對(duì)PCOS 大鼠胰島素抵抗等代謝紊亂的作用。

1 材料

1.1 動(dòng)物

選用21 日齡清潔級(jí)雌性SD 大鼠60 只，購買自浙江中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究中心。動(dòng)物許可證號(hào)為：SCXK（浙）2008-0037。

1.2 藥物

吡格列酮購買自江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司；痰瘀同治方由二陳湯和失笑散組成，均由杭州市胡慶余堂提供，經(jīng)由浙江中醫(yī)藥大學(xué)鑒定為正品。二陳湯和失笑散根據(jù)全國統(tǒng)編五版教材《方劑學(xué)》的組成和用量（二陳湯：橘紅30g，半夏30g，白茯苓18g，甘草9g；失笑散：蒲黃12g，五靈脂12g），研磨成粉，均勻混合。

1.3 試劑

注射用硫酸普拉睪酮鈉購于江蘇聯(lián)環(huán)藥業(yè)股份有限公司（批號(hào)：20070701）；血清胰島素（insulin）、睪酮（T）、雌二醇（E2）、孕酮（P）、促卵泡刺激素（FSH）和黃體生成素（LH）放免試劑盒均由北方生物技術(shù)研究所提供（批號(hào)：E080721、E081124、E080507、E080708、E080721、E080624）；血糖試劑盒購于北京北化康泰試劑有限公司（批號(hào)：20080516）.

1.4 儀器

AU400 型OLYMPUS 全自動(dòng)生化分析儀（日本）；AG204 電子分析天平（瑞士METTLER）；貝克曼庫爾特UniCel DxI 800 全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀（美國貝克曼庫爾特有限公司）；全自動(dòng)放射免疫γ 計(jì)數(shù)器（上海上立檢測儀器廠）。

2 方法

2.1 SD 大鼠伴IR 的POS 模型建立[4]

將60 只清潔級(jí)SD 大鼠動(dòng)物先普食適應(yīng)性喂養(yǎng)1d 后，按照隨機(jī)分組原則分成2 組，造模組45 只和正常組15 只。從第25 日起至第55 日，造模組大鼠每日頸背部皮下注射硫酸普拉睪酮鈉0.9mg/kg[5-7]，正常組大鼠則同樣位置處注射等量生理鹽水。正常組給予普通飼料，造模組則喂以高脂飼料，均喂養(yǎng)100 d。從喂養(yǎng)第90 天起，每日早晨大鼠稱量體重，測量空腹血糖，行陰道涂片10 d，觀察細(xì)胞涂片的周期變化情況。喂養(yǎng)90 d 后，尾靜脈采血測干預(yù)前的空腹血糖（FBG）和空腹胰島素（Fins），并根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)[8]中提及的方法計(jì)算胰島素敏感指數(shù)：ISI=ln [1/（FBG×Fins）]。造模組中選擇ISI 小于正常組ISI 均值減1.96 倍標(biāo)準(zhǔn)差，且陰道涂片無周期變化者作為造模成功的大鼠。這批PCOS 大鼠模型的臨床表現(xiàn)上具有無排卵，體重增加，空腹血糖水平明顯增加，胰島素敏感異常等，與PCOS 患者臨床表現(xiàn)相似。

2.2 給藥途徑和方法

將造模成功的大鼠隨機(jī)將其分為對(duì)照組、治療組和模型組。從第91 天起，用相應(yīng)藥物干預(yù)3 周，治療組每天灌服痰瘀同治方30g/kg，對(duì)照組每天灌服吡格列酮（溶解于等量生理鹽水）15mg，模型組和正常組灌服等容量生理鹽水。對(duì)照組、治療組和模型組在治療期間均喂以高脂飼料，正常組喂以普通飼料。末次給藥后禁食12h，斷尾采血測干預(yù)后FBG 和Fins，并計(jì)算ISI。斷尾采血結(jié)束后，大鼠以相應(yīng)飼料喂養(yǎng)7 d，并于第七天禁食12h 后，用6%水合氯醛腹腔注射麻醉，摘取雙側(cè)卵巢用4%多聚甲醛固定，并斷頭取血并分離血清，用于檢測各項(xiàng)性激素。

2.3 卵巢排卵情況比較

4%多聚甲醛固定雙側(cè)卵巢，切片后用HE 染色，以黃體的形成判定為排卵，光鏡下觀察排卵，計(jì)算各組大鼠排卵率（排卵率=排卵大鼠數(shù)目/大鼠總數(shù)×100%）、平均排卵數(shù)（平均排卵數(shù)=黃體總數(shù)/大鼠總數(shù)）和囊性擴(kuò)張卵泡率（囊性擴(kuò)張卵泡率=囊性擴(kuò)張卵泡數(shù)/卵泡總數(shù)×100%）。

2.4 血脂、空腹血糖及空腹胰島素的檢測

生化分析儀檢測大鼠的TG、TC、LDL、HDL。血糖用葡萄糖氧化酶法測定，胰島素用放射免疫法測定，均嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。

2.5 性激素檢測

血清T、E2、P、FSH 和LH 均采用放射免疫法測定，均嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。

2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS17.0 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，所有數(shù)據(jù)以（x±s）表示，組間差異采取單因素方差分析，多個(gè)組間比較采用LSD 分析，均以P＜0.05 為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.01 為差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 各組排卵情況的比較

與對(duì)照組比較，低中高劑量治療組平均排卵數(shù)及排卵率顯著增加（P＜0.01），但仍明顯低于正常組（P＜0.05），囊性擴(kuò)張卵泡率無明顯改變（P>0.05）。與正常組比較，模型組平均排卵數(shù)及排卵率均顯著降低（P＜0.01），囊性擴(kuò)張卵泡率顯著增加（P＜0.01）。結(jié)果見表1。

表1 各組大鼠排卵情況比較

3.2 各組FBG，F(xiàn)ins 及ISI 的比較

與對(duì)照組比較，低中高劑量治療組FBG 無明顯變化（P>0.05），但Fins 顯著降低（P＜0.01），ISI 顯著升高（P＜0.01）；與正常組比較，模型組FBG 和Fins均升高（P＜0.05），ISI 則顯著降低（P＜0.01）。結(jié)果見表2。

表2 各組大鼠FBG，F(xiàn)ins 及ISI 比較

3.3 各組血脂的比較

與對(duì)照組比較，低中高劑量治療組TG、TC 和LDL 水平均顯著降低（P＜0.01，P＜0.05，P＜0.01），HDL 水平顯著增高（P＜0.05）；與正常組比較，模型組血清TG、TC 和LDL 濃度均顯著升高（P＜0.01），HDL 顯著降低（P＜0.01）。結(jié)果見表3。

3.4 各組血清性激素的比較

與對(duì)照組比較，低中高劑量治療組血清T 和E2濃度均降低，F(xiàn)SH 濃度升高（P＜0.05），LH 水平無明顯改變（P>0.05）；與正常組比較，模型組血清T，E2和LH 濃度均顯著升高（P＜0.01），F(xiàn)SH 濃度顯著降低（P＜0.01）。結(jié)果見表4。

表3 各組大鼠血清脂質(zhì)比較

表4 各組大鼠血清性激素比較

4 討論

PCOS 的病因尚不清楚，涉及的病理機(jī)制非常復(fù)雜。一般認(rèn)為與下丘腦-垂體-卵巢軸功能失常、腎上腺功能紊亂、遺傳、代謝等因素有關(guān)。但目前發(fā)病機(jī)制尚不明確，其內(nèi)分泌特征包括：雄激素過多、雌酮過多、黃體生成激素、卵泡刺激素（LH/FSH）比值增大、胰島素過多等，與以下因素有關(guān)：①下丘腦-垂體-卵巢軸功能紊亂；②胰島素抵抗；③胰島素樣生長因子-1 的激活；④腎上腺來源雄激素過多等[9-11]。

《內(nèi)經(jīng)》對(duì)“痰瘀”相關(guān)的理論早有記載，“痰”和“瘀”皆為陰邪，痰自津來，瘀本乎血，津血同源，陰精陽氣失其常度，則津灼為痰，血滯為瘀，說明痰瘀實(shí)為同源?；谔叼鐾畏降睦碚?，伴胰島素抵抗的多囊卵巢綜合征及其導(dǎo)致的糖、脂代謝紊亂屬于中醫(yī)“痰濁”和“瘀邪”范疇[12-15]。而痰瘀同治方由二陳湯和失笑散構(gòu)成，二陳湯中半夏辛溫性燥，善能燥濕化痰，且又和胃降逆，為君藥。橘紅為臣，既可理氣行滯，佐以茯苓健脾滲濕，滲濕以助化痰之力，健脾以杜生痰之源，又以甘草調(diào)和諸藥；失笑散中五靈脂苦咸甘溫，入肝經(jīng)血分，功擅通利血脈，散瘀止痛；蒲黃甘平，行血消瘀，炒用并能止血，二者相須為用，為化瘀散結(jié)止痛的常用組合。兩方結(jié)合，化痰去瘀，健胃運(yùn)脾，使脾胃運(yùn)化正常，痰瘀去，脈道通，血行流利，胞宮得養(yǎng)，則疾病可愈。

實(shí)驗(yàn)顯示：模型組大鼠出現(xiàn)卵巢排卵率下降，糖、脂質(zhì)代謝紊亂和胰島素抵抗，表明伴胰島素抵抗的PCOS 建模成功。成模大鼠經(jīng)痰瘀同治方干預(yù)后，平均排卵數(shù)及排卵率顯著增加；血脂中TG、TC和LDL 顯著降低，LDL 明顯升高，血清T 和Fins 濃度顯著降低，F(xiàn)SH 濃度及ISI 明顯升高，且與正常組之間無明顯差異。這一結(jié)果證實(shí)了痰瘀同治方對(duì)IR的PCOS 大鼠具有改善排卵障礙、增加胰島素敏感性和降低性激素水平的作用。該結(jié)果為痰瘀同治方在臨床上治療伴胰島素抵抗的多囊卵巢綜合征提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

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