王玉紅河南省安陽市中心血站,河南安陽　455000

離心法和虹吸法制備冷沉淀凝血因子的比較

王玉紅
河南省安陽市中心血站,河南安陽455000

目的 以新鮮冰凍血漿(FFP)使用兩種方法制備冷沉淀結果對凝血因子Ⅷ因子、Fbg(纖維蛋白原)含量的比較。方法 用離心法和虹吸法各30袋、200 mL FFP制備的冷沉淀結果進行檢測,對主要成分Ⅷ因子含量、纖維蛋白原Fbg含量兩組數(shù)據(jù)進行比較。結果 離心法和虹吸法制備的冷沉淀Ⅷ因子含量、纖維蛋白原含量,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05,P<0.001)。結論 用虹吸法制備的冷沉淀質(zhì)量指標均優(yōu)于離心法。水浴虹吸法步驟精簡,人為因素影響小,所需儀器少操作簡單。因此虹吸法制備冷沉淀將逐步取代離心方法,過程更規(guī)范,產(chǎn)品質(zhì)量更高。

Ⅷ因子;纖維蛋白原 (Fbg);冷沉淀

隨著醫(yī)學的不斷發(fā)展，冷沉淀因子制劑愈來愈受到重視，臨床用量逐年在提升。該制品在治療兒童及成人甲型血友病、血管型血友病、纖維蛋白原缺乏癥以及Ⅷ因子缺乏癥等方面獲得了明顯的療效。冷沉淀凝血因子是指新鮮冰凍血漿在(4±2)℃融化后獲得的血漿冷沉淀蛋白部分，而冷上清為在冷沉淀制備期間去除的血漿上清。冷沉淀富含Ⅷ因子、纖維蛋白原(Fg)和其他一些凝血因子,其中的Ⅷ因子是非常不穩(wěn)定的一種凝血因子［1］，而且由于冷沉淀的制備受到采血、分離環(huán)境和保存多個環(huán)節(jié)影響，隨著時間延長或者溫度升高，Ⅷ因子活性下降明顯，體外半衰期較短容易失活，因此選擇比較可靠的制備方法很重要。

1　資料與方法

1.1設備材料

虹吸法CT－4T.6C型水浴式低溫融化箱，稱量儀，熱合機SE—250。離心法需求儀器：CR-7大容量低溫離心機，4℃冰箱，TERUMO/TSCD無菌接口機，稱量儀，熱合機。

1.2方法

1.2.1虹吸法 將新鮮冰凍血漿置于4T. 6·C型低溫恒溫循環(huán)水浴槽中，空聯(lián)袋懸于箱外，兩袋之間產(chǎn)生一定的落差，冰凍血漿融化時由于虹吸的作用，融化的血漿流入空袋中，剩余的(45±5)mL有白色結晶顆粒的部分成分即為冷沉淀。熱合后低溫保存?zhèn)溆茫?］。

1.2.2離心法 將新鮮冰凍血漿放在4℃冰箱中慢慢融化14～16 h，待血漿袋中慢融化至尚存小冰塊時取出，用低溫離心機離心，離心10 min，2500 r/min,溫度2℃。用轉(zhuǎn)移袋經(jīng)無菌操作方式分出上層冷上清血漿，留下20~30 mL血漿于冷沉淀中，熱合，低溫保存?zhèn)溆茫?］。

1.2.3制作冷沉淀是血站的一項常規(guī)的項目 其主要成分是凝血因子VIII和纖維蛋白原。國家對于血站制作冷沉淀這個項目是有著嚴格的標準，國家標準要求一個單位的冷沉淀，凝血因子VIII的含量為≥80 IU，纖維蛋白原的含量≥150 g[3]。

1.2.4統(tǒng)計方法 通過SPSS 19.0統(tǒng)計學軟件對數(shù)據(jù)進行分析處理，計量資料以均數(shù)±標準差的形式表示，采用t檢驗，P<0.05時，差異有統(tǒng)計學意義。

2　結果

兩種方法制備的冷沉淀Ⅷ因子和纖維蛋白原的含量比較見表1。

表1　離心法與虹吸法制備冷沉淀凝血因子結果比較 (n=30)(±s)

表1　離心法與虹吸法制備冷沉淀凝血因子結果比較 (n=30)(±s)

離心法　虹吸法　t　PⅧ因子含量　81.45±2.71　103.42±14.74　18.47　＜0.05 Fbg 含量　150.56±3.63　193.37±4.53　4.72?。?.001

3　討論

冷沉淀制品質(zhì)量的好壞對臨床療效的取得至關重要，因此，選擇合適的制備方法是非常關鍵的 ，根據(jù)近幾年對兩種方法進行實際操作比對和分析，虹吸法比離心法效果有顯著優(yōu)勢。通過兩種方法質(zhì)量指標比較，發(fā)現(xiàn)離心法制備Ⅷ因子含量低于虹吸法(P＜0.05)；纖維蛋白原Fbg 含量明顯低于虹吸法(P＜0.001)。進一步分析，離心法制備冷沉淀是首先制備出速凍的新鮮冰凍血漿(FFP),然后將新鮮冰凍血漿(FFP)放到2～6℃的冰箱里過夜,冷沉淀結晶后再通過離心分層,然后將血漿排出后剩下的就是結晶的冷沉淀。采用此辦法它的缺點主要有:冰箱內(nèi)的溫度不穩(wěn)定，難以保證整個過程處于2～6℃的溫度范圍。溫度的波動，使的凝血因子活性降低，并且得出率下降。由于需要將血漿放在冰箱內(nèi)過夜，時間很長,容易發(fā)生蛋白析出，同樣會降低凝血因子得出率,并且影響它的活性。虹吸法制備冷沉淀是保證水溫恒定在6℃，而且在融化過程中要保證水和血漿要充分接觸。CT-4T.6C水浴式低溫融化箱使用獨特循環(huán)水流既可以保證溫度均勻還可以加快溶解速度。由于冷沉淀具有在2～6℃下結晶，析出的特性，因此虹吸法正是利用它的這個重要特性，從新鮮冰凍血漿中來提取冷沉淀。也正是由于這個特性，所以對于析出冷沉淀來講，恒定溫度就成為了一個很關鍵的因素；另外，冷沉淀特別是凝血因子VIII還有個不穩(wěn)定的特性，因此在提取冷沉淀的過程中，時間越塊也就越好。由于水箱內(nèi)溫度均勻，并且水流不停循環(huán)，水箱前后搖擺，使水流對血袋產(chǎn)生溫和的按摩和擠壓，使血袋快速而均勻的融化，融化時間只需1個小時。溫度處于低溫恒定、融化時間大幅度縮短，虹吸法制備的冷沉淀使凝血因子VIII及纖維蛋白原獲得率比離心法增加顯著。

冷沉淀凝血因子中纖維蛋白原含量和Ⅷ因子的含量是直接影響產(chǎn)品質(zhì)量和治療效果的關鍵因素，與制備過程密切相關，尤其是融化時的溫度及融化時間。在制備過程中為了保證質(zhì)量應注意以下幾點：要控制各環(huán)節(jié)影響因素，把握好水浴溫度和溶化速度這兩個關鍵點①抓住冷沉淀制備過程中融化時間特別重要，避免時間過長，導致Ⅷ因子活性降低，應在兩小時內(nèi)完成［4］。②新鮮漿放入水浴箱時確保溫度在要求恒定溫度6℃，當水溫恒定在6℃時，冷沉淀的得出率是最高的。③由于冷沉淀的制備受到多個環(huán)節(jié)影響，而且凝血因子中的Ⅷ因子是不穩(wěn)定的因子，隨著時間延長或者溫度升高，Ⅷ因子活性下降明顯，體外半衰期較短容易失活，為此要切實保證冷沉淀因子的質(zhì)量確保臨床輸入的效果和安全性，必須密切關注制備過程中的關鍵控制點。

離心方法制備冷沉淀的過程中，溫度不容易控制，新冰漿的融化時間長，從而導致Ⅷ因子、 Fbg含量的差異明顯較低。而使用虹吸法，不僅便于溫度的監(jiān)控，而且確保Ⅷ因子、Fbg的容量和含量，人為因素影響小，在制備時間上大大縮短,因此浴虹吸法制備冷沉淀是一種很好的方法。

[1] 楊江存，理芒會，于青，等.新鮮冰凍血漿融化后不同放置時間凝血因子的變化[J].中國輸血雜志,2005,18(2)：211.

[2] 中華人民共和國衛(wèi)生部.血站技術操作規(guī)程[J].衛(wèi)醫(yī)政發(fā)(2012)1號附：7.

[3] 中華人民共和國國家標準GB18469-2012[J]. 全血及成分血質(zhì)量要求[D].8.1-8.12.

[4] 徐利強，李建華，周忠英.冷沉淀凝血因子制備工藝改良[J].中國生化藥物雜志,2011,32(2)：145-146.

Comparison of Centrifugation and Siphon Methods to Prepare Cryoprecipitate Blood Coagulation Factor

WANG Yuhong
Blood center of Anyang City, Henan Province ,Anyang 455000,China

Objective By fresh frozen plasma (FFP) using centrifugation and siphon methods to prepare cryoprecipitate results of blood coagulation factor (VIII factor), compared with the Fbg (fibrinogen) content.Methods To detect the cold precipitation results of centrifugation and siphon methods respectively 30 bags, 200ml FFP preparation results,and to compare two groups of data of the main component factor VIII and fibrinogen content.Results The contents of factor VIII and fibrinogen have significant difference of cryoprecipitate prepared by using centrifugation and siphon methods and the difference is statistically significant (P<0.05,P<0.001).Conclusion The quality index of cryoprecipitate prepared by siphon method is better than the centrifugation method. Water bath siphon method is simple-stepped, with small impact of human factors, less equipment required and simple operation. Therefore, the siphon preparation of cryoprecipitate will gradually replace the centrifugation method and its process is more standardized and the product quality is higher.

Factor VIII;Fibrinogen (Fbg);Cryoprecipitate

R457.1

A

1672-5654(2015)02(b)-0005-02

王玉紅(1969-)，女，河南安陽人，主管技師，主要從事成分輸血管理。

2014-12-17)