陳玉婷 曹永芬
【摘要】目的:分析NF-kB信號(hào)在類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎臨床治療指導(dǎo)評(píng)價(jià)中應(yīng)用的意義。方法:選取60只雄性SD大鼠,0.1ml福氏完全佐劑注入右后足足墊皮內(nèi),隨機(jī)平均分為對(duì)照組與治療1組、治療2組,空白組不予治療,治療1組艾灸治療,治療2組艾灸治療同時(shí)摘除腎上腺,對(duì)比3組NF-kB p65的活性。結(jié)果:對(duì)照組、治療1組、治療2組最終NF-kBp6 5吸光度值分別為0.64±0.02、0.37±0.04、0.63±0.01,治療1組NF-kB p65吸光度值明顯優(yōu)于對(duì)照組(P<0.05),治療2組與對(duì)照組NF-kB p65吸光度值無(wú)明顯差異(P>0.05)。結(jié)論:艾灸療法可有效抑制NF-kB炎性信號(hào)通路、抗炎,但需要在HPAA完整性前提下才能實(shí)現(xiàn)。
【關(guān)鍵詞】NF-kB信號(hào);類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎;臨床應(yīng)用
類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)是集骨纖維化、骨質(zhì)破壞、軟骨吸收、慢性炎性反應(yīng)于一體的慢性自身免疫性疾病,RA的產(chǎn)生主要因?yàn)轶w內(nèi)缺乏內(nèi)源性糖皮質(zhì)激素。HPAA(下丘腦一垂體一腎上腺軸)在治療中發(fā)揮著調(diào)節(jié)免疫、抑制RA炎性反應(yīng)的重要作用。而艾灸被證實(shí)是RA臨床的有效治療方案,本研究分析了艾灸治療中NF-kB信號(hào)特點(diǎn)。
1 資料與方法
1.1 一般資料
選取60只健康的雄性SD大鼠,隨機(jī)平均分為對(duì)照組和2個(gè)治療組。對(duì)照組20只,體重(202.1±13.1)g;治療1組20只,體重(199.5±10.4)g;治療2組20只,體重(205.3±13.4)g。3組健康狀況和基礎(chǔ)資料無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,P>0.05。
1.2 方法
首先將0.1ml福氏完全佐劑注入右后足足墊皮內(nèi),對(duì)照組不予以治療。
治療2組摘除腎上腺:腹腔注射50mg/kg戊巴比妥鈉。按麻醉,俯臥,在兩側(cè)背部肋緣下1cm×1cm范圍去毛,清潔消毒,將肌肉分離后找準(zhǔn)雙側(cè)腎上腺,切除并縫合。
2個(gè)治療組均予艾灸治療。將大鼠固定于臺(tái)上后在足三里、腎俞等部位各麥粒灸5壯(每壯為艾絨5g),左右交替艾灸,1次/d,1療程為6天,連續(xù)治療3療程。
1.3 評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)
對(duì)比3組NF-kB p65的活性:先后以標(biāo)本固定液、石蠟包埋處理3組右側(cè)踝關(guān)節(jié),制作滑膜組織切片并脫蠟、沖洗、PBS浸泡,去離子水孵育,山羊血清工作液滴加處理,孵育,辣根酶標(biāo)記、DAB顯色劑處理,蒸餾水沖洗、復(fù)染、水洗、脫水,透明處利后封片。以普通光鏡放大200倍觀察,NF-kB p65陽(yáng)性表達(dá)即可見(jiàn)呈褐色,陽(yáng)性越明顯、染色越深。視野由計(jì)算機(jī)攝像系統(tǒng)采樣、BioMias對(duì)圖像中信號(hào)特點(diǎn)處理分析,計(jì)算陽(yáng)性染色面積、吸光度數(shù)據(jù)。
1.4 數(shù)據(jù)處理
本次數(shù)據(jù)采用SPSS 16.0軟件對(duì)本研究的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)的分析,計(jì)數(shù)資料的對(duì)比應(yīng)用卡方檢驗(yàn),而計(jì)量資料的對(duì)比應(yīng)用t檢驗(yàn),P<0.05時(shí),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2 結(jié)果
對(duì)照組、治療1組、治療2組最終NF-kB p65吸光度值分別為0.64±0.02、0.37±0.04、0.63±0.01,治療1組NF-kBp65吸光度值明顯優(yōu)于對(duì)照組(P<0.05),治療2組與對(duì)照組NF-kB p65吸光度值無(wú)明顯差異(P>0.05)。見(jiàn)表1。
3 討論
RA臨床治療多使用非甾體消炎藥、免疫抑制類(lèi)藥物,內(nèi)源性GC的腎上腺皮質(zhì)經(jīng)典激素類(lèi)療法也有理想的抗炎效果。
NF-kB是RA進(jìn)展中滑膜炎性反應(yīng)重要的炎性細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通道,其可通過(guò)IKK的激活,激活I(lǐng)KB磷酸化修飾,促使p65與p50的大量產(chǎn)生,尤其可提升細(xì)胞核中上述物質(zhì)的含量,從而對(duì)炎性反應(yīng)的發(fā)生起到調(diào)控作用。NF-kB類(lèi)蛋白在滑膜細(xì)胞核內(nèi)大量存在,若發(fā)生類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎,患者患處滑膜內(nèi)就會(huì)有更多的NF-kB表達(dá)現(xiàn)象。本次研究關(guān)節(jié)炎大鼠模型相關(guān)操作中,福氏佐劑造模后會(huì)很快發(fā)生NF-kB表達(dá)現(xiàn)象。GC的存在會(huì)對(duì)NF-kB細(xì)胞信號(hào)的轉(zhuǎn)錄過(guò)程產(chǎn)生干擾和抑制,從而達(dá)到理想的抗炎效果。而HPAA的保留是實(shí)現(xiàn)GC合理分泌、控制NF-kB轉(zhuǎn)錄工作的關(guān)鍵。
本研究分析了艾灸治療中NF-kB信號(hào)特點(diǎn)在足三里、腎俞等部位各麥粒灸5壯(每壯為艾絨5g),連續(xù)治療3療程共18d,最終檢測(cè)到對(duì)照組、治療1組、治療2組最終NF-kB p65吸光度值分別為0.64±0.02、0.37±0.04、0.63±0.01,保留HPAA且規(guī)范艾灸的一組有很好的NF-kBp65吸光度結(jié)果,證實(shí)了治療的有效性。艾灸可改善HPAA功能,更好地對(duì)炎性細(xì)胞因子釋放產(chǎn)生調(diào)控,達(dá)到治療目的。艾灸的治療效果必須在HPAA保留的前提下才能得到保證,再次證明了HPAA功能正常情況下配合艾灸治療的必要性。