李帥鋒，鄭傳柱，張麗，姚衛(wèi)峰，蘭才武，賀定翔，丁安偉*

(1.南京中醫(yī)藥大學江蘇省中藥資源產業(yè)化過程協(xié)同創(chuàng)新中心/中藥資源產業(yè)化與方劑創(chuàng)新藥物國家地方聯(lián)合工程研究中心，江蘇 南京 210023；2.貴州昌昊中藥發(fā)展有限公司，貴州 凱里 556000)

·中藥農業(yè)·

不同采收期對何首烏中二苯乙烯苷和蒽醌類成分含量的影響△

李帥鋒1，鄭傳柱1，張麗1，姚衛(wèi)峰1，蘭才武2，賀定翔2，丁安偉1*

(1.南京中醫(yī)藥大學江蘇省中藥資源產業(yè)化過程協(xié)同創(chuàng)新中心/中藥資源產業(yè)化與方劑創(chuàng)新藥物國家地方聯(lián)合工程研究中心，江蘇 南京 210023；2.貴州昌昊中藥發(fā)展有限公司，貴州 凱里 556000)

目的：研究不同采收期對何首烏藥材中二苯乙烯苷以及蒽醌類成分含量的影響，為何首烏適宜采收期的確定提供科學依據(jù)。方法：通過HPLC測定來自貴州施秉縣不同采收期樣品中二苯乙烯苷和蒽醌類成分的含量，同時采用主成分分析法對不同采收期何首烏樣品質量進行綜合評價。結果：不同采收期何首烏樣品中二苯乙烯苷含量由高到低依次為：9月份>10月份>8月份>11月份>12月份>1月份。結合型蒽醌含量在9月份達到峰值，隨后隨時間推移而降低。主成分分析結果顯示：不同采收期何首烏樣品綜合評價指數(shù)9、10月份較高。結論：9、10月份為何首烏較為適宜的采收期。

何首烏；不同采收期；二苯乙烯苷；蒽醌

何首烏為蓼科植物何首烏PolygonummultiflorumThunb.的干燥塊根，其性微溫，味苦，甘，澀。有生首烏與制首烏之分，生首烏具有解毒、消癰、截瘧、潤腸通便的功效，用于瘡癰，瘰疬，風疹瘙癢，久瘧體虛，腸燥便秘；制首烏具有補肝腎，益精血，烏須發(fā)，強筋骨，化濁降脂的作用，用于血虛萎黃，眩暈耳嗚，須發(fā)早白，腰膝酸軟，肢體麻木，崩漏帶下，高脂血癥[1]。何首烏在全國范圍分布廣泛，主產于貴州、四川、湖北、廣西、廣東、河南等地[2-4]

《中華人民共和國藥典》2010版中規(guī)定何首烏“秋、冬二季葉枯萎時采挖，削去兩端，洗凈，個大的切成塊，干燥”，但并未對采收期做出具體規(guī)定，從而造成藥材質量不一，不利于何首烏藥材質量控制。目前關于何首烏適宜采收期的報道尚不多見，故本實驗在收集貴州省施秉縣GAP生產基地兩年生不同采收期何首烏藥材的基礎上，利用HPLC法，以二苯乙烯苷與蒽醌類成分含量為指標，采用主成分分析綜合評價法分析采收期對何首烏藥材質量的影響，以期為確立何首烏的最佳采收期提供科學依據(jù)。

1 儀器與試藥

Waters 2695高效液相色譜儀，Waters 2998檢測器；Empower色譜工作站。分析天平(SARTORIUS AG；BP211D；d=0.01 mg)；高速離心機(Anke TGL-16B)；精密鼓風恒溫干燥箱(DGT-G250)，超聲清洗器(250W；50Hz)。乙腈為色譜純(購自德國merck公司)，超純水自制。二苯乙烯苷、大黃素、大黃素甲醚對照品購自成都瑞芬思生物科技有限公司(批號：F-022-130512、D-029-130401、D-004-130315，純度均大于98%)，無水乙醇購自南京化學試劑有限公司(批號：1502253310)。

何首烏由貴州昌昊中藥發(fā)展有限公司提供，藥材來源見表1。經(jīng)南京中醫(yī)藥大學段金廒教授鑒定為蓼科植物何首烏PolygonummultiflorumThunb.的干燥塊根。潤濕切厚片，置于恒溫干燥箱中50 ℃，16 h烘干，粉碎，過四號篩，備用。

表1 何首烏藥材來源

2 方法與結果

2.1 二苯乙烯苷含量測定

2.1.1 對照品溶液的制備 取二苯乙烯苷對照品適量，精密稱定，加稀乙醇制成每1 mL含0.186 mg的二苯乙烯苷溶液，即得[1]。

2.1.2 樣品測定 取不同采收期何首烏樣品粉末，按《中華人民共和國藥典》2010版何首烏含量測定二苯乙烯苷項下的方法制備供試品溶液，每個樣品平行2份，并按《中華人民共和國藥典》2010版何首烏含量測定二苯乙烯苷項下的色譜條件進行測定，每份測定2次。計算各樣品中二苯乙烯苷的含量，結果見表2。

圖1 二苯乙烯苷對照品(A)和何首烏樣品(B)HPLC圖

2.2 結合蒽醌含量測定[1]

2.2.1 對照品溶液的制備 取大黃素、大黃素甲醚對照品適量，精密稱定，加甲醇分別制成每1 mL含大黃素54.2 μg，大黃素甲醚18.8 μg的溶液，即得。

2.2.2 樣品測定 取不同采收期何首烏樣品粉末，按《中華人民共和國藥典》2010版何首烏含量測定結合蒽醌項下的方法制備供試品溶液，每個樣品平行2份，并按《中華人民共和國藥典》2010版何首烏含量測定結合蒽醌項下的色譜條件進行測定，每份測定2次。計算各樣品中結合蒽醌的含量(結合蒽醌含量=總蒽醌-游離蒽醌)，結果見表2。

由表2 可知，樣品中二苯乙烯苷含量由高到低依次為：S2>S3>S1>S5>S4>S6，即9月份采收何首烏含量較高。結合蒽醌的含量呈先升高后降低趨勢。

表2 不同采收期何首烏樣品測定結果 (%)

1-大黃素；2-大黃素甲醚。圖2 對照品(A)和何首烏樣品(B)HPLC圖

2.3 不同采收期的綜合評價

采用SPSS 20.0統(tǒng)計軟件，以二苯乙烯苷和蒽醌類含量和對應的樣品組成矩陣，對不同采收期樣品中各成分含量進行主成分分析，以其因子得分與方差貢獻率成績之和相加，得出各類成分總因子得分值，以得分值F大小評價采收期對何首烏藥材質量的影響。由各因子載荷矩陣(表3)可知，二苯乙烯苷成分在主成分1上有較高載荷，蒽醌類在主成分2上有較高載荷，且兩個主成分的累計貢獻率達到96.44%，能夠客觀地反應何首烏藥材的質量。故選用前兩個主成分對不同采收期的何首烏藥材進行綜合評價，其綜合評價函數(shù)為F=0.739 46f1+0.224 95f2，其中F為綜合得分，f1為主成分1，f2為主成分2。綜合得分結果見表4。

表3 何首烏中各活性成分因子載荷矩陣

表4 不同采收期藥材主成分因子及品質綜合評價

由表3可知樣品綜合評分有較大差異，其中9、10月份明顯高于其他采收期。故以二苯乙烯苷和蒽醌類成分來看，9、10月份采收何首烏較為適宜。

3 討論

3.1 不同采收期對二苯乙烯苷含量的影響

二苯乙烯苷類成分是何首烏藥材中含有的一大類具有多種生物活性成分，其中以2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷(簡稱二苯乙烯苷)的量較高，《中華人民共和國藥典》2010版規(guī)定其含量不低于1%[1]。二苯乙烯苷具有抗氧化、清除自由基、抗腫瘤、降低膽固醇、抑制動脈粥樣狀硬化和保護肝臟等作用[5]，故選擇該化合物作為考察不同采收期對何首烏藥材中二苯乙烯苷類化合物的影響的指標性成分。實驗結果表明貴州省施秉縣樣品二苯乙烯苷含量在9月份達到一個峰值，隨后含量略有降低。

3.2 不同采收期對蒽醌類含量的影響

何首烏藥材中蒽醌類成分包括游離型蒽醌和結合型蒽醌，蒽醌類成分多具有抗菌、消炎、瀉下等生物活性。目前認為是何首烏藥材發(fā)揮解毒、消癰、潤腸通便功效的主要活性成分，且認為結合型蒽醌瀉下通便作用強于游離型蒽醌[6]。本實驗結果顯示貴州施秉縣何首烏樣品中結合蒽醌含量同樣在9月份達到峰值，隨后呈現(xiàn)下降趨勢。同時游離蒽醌含量總體呈現(xiàn)上升趨勢，其結果符合結合蒽醌轉化為游離蒽醌的論述[7]。

3.3 不同采收期對何首烏質量影響的綜合評價

由于不同采收期何首烏樣品中各化學成分的含量變化不盡相同，所以可以用主成分分析綜合評價法對其進行綜合評價，以確定何首烏的適宜采收期[8]。以二苯乙烯苷和蒽醌類成分為指標綜合評價結果顯示，9、10月份采收何首烏較為適宜，與二苯乙烯苷和結合蒽醌含量顯示適宜采收期結果具有一致性。分析其原因可能是在營養(yǎng)生長期，養(yǎng)分不斷積累，11月份進入果熟期消耗大量養(yǎng)料所致[9]。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：一部 [S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社.2010，164-165.

[2] 中國藥材集團公司.中國中藥資源[M].北京：北京：科學出版社，1995：2231.

[3] 徐國鈞，徐珞珊，王崢濤.常用中藥材品種整理隔和質量研究：第3冊[M].福州：福建科學技術出版社，1999：431.

[4] 易思榮，黃婭，肖中，等.何首烏的高產栽培技術[J].中國現(xiàn)代中藥，2008，10(3)：41-43.

[5] 謝嵐.何首烏及二苯乙烯苷的研究進展[J].天津藥學，2010，22(03)：70-73.

[6] 羅瑞芝，賈偉，趙利斌，等.何首烏研究進展[J].中草藥，2005，36(7)：1097-1100.

[7] 郭盛，段金廒，吳達維，等.干燥方法對何首烏塊根中多元功效物質轉化的影響[J].中草藥，2014，45(04)：498-503.

[8] 段金廒，嚴輝，宿樹蘭，等.藥材適宜采收期綜合評價模式的建立與實踐[J].中草藥，2010，41(11)：1755-1760.

[9] 蔡麗芬.何首烏質量標準的研究[D].北京中醫(yī)藥大學，2009.

EffectofHarvestSeasonsonMainBioactiveConstituentsinPolygoniMultifloriRadix

LiShuaifeng1，2，ZhengChuanzhu1，2，ZhangLi1，2，YaoWeifeng1，2，LanCaiwu3，HeDingxiang3，DingAnwei1，2*

(1.JiangsuCollaborativeInnovationCenterofChineseMedicinalResourcesIndustrialization，andNationalandLocalCollaborativeEngineeringCenterofChineseMedicinalResourcesIndustrializationandFormulaeInnovativeMedicine，NanjingUniversityofChineseMedicine，Nanjing210023，China； 2.GuizhouChanghaoChineseMedicineDevelopmentCo.，Ltd.，Kaili556000，China)

Objective：To explore the effect of different harvest seasons on main bioactive constituents inPolygoniMultifloriRadix(PMR)，and provide scientific evidence for the suitable harvest season for PMR.Methods：HPLC was used to determine the contents of stilbene glycosides，free and conjugated anthraquinones of samples of different harvest seasons from Shibing county of Guizhou province.Component analysis(PCA)was used through the software of SPSS 20.0 to assess the effect of different harvest seasons on main bioactive constituents.Results：The contents of stilbene glycosides in the samples of different harvest seasons were as follows in descending order：September>October > August>November>December>January.The contents of conjugated anthraquinonesreached the peak onSeptemberand then descended over time.The results of PCA also showed that the comprehensive scores of samples of September and October were higher.Conclusion：Appropriate collecting-times of PMR were in September and October.

Polygoni Multiflori Radix；different harvest seasons；stilbene glycoside；anthraquinone

10.13313/j.issn.1673-4890.2015.11.015

2015-01-13)

國家“十二五”科技支撐計劃項目(2011BAI13B04)；貴州省中藥現(xiàn)代化專項(黔科合中藥字[2013]5059號)；江蘇省中藥資源產業(yè)化過程協(xié)同創(chuàng)新中心重點項目(ZDXM-1-3)；江辦高校優(yōu)勢學科建設工程資助項目(ysxk-2014)；江蘇高校品牌專業(yè)建設工程資助項目(PPZY2015A070)

*

丁安偉，教授，研究方向：中藥炮制與質量控制研究；Tel：(025)85811523，E-mail：awding105@163.com