陳彥琳，金峰，杜杰，梁煥，任玉珍

(中國(guó)中藥公司，北京 102600)

·中藥工業(yè)·

不同制霜方法制備巴豆霜飲片質(zhì)量比較△

陳彥琳，金峰，杜杰，梁煥，任玉珍*

(中國(guó)中藥公司，北京 102600)

目的：研究不同制霜方法對(duì)巴豆霜飲片質(zhì)量的影響，為炮制巴豆霜時(shí)選擇合適的制霜方法提供依據(jù)。方法：采用《中華人民共和國(guó)藥典》2010版巴豆霜標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)下收載的檢測(cè)方法和文獻(xiàn)報(bào)道的溶血實(shí)驗(yàn)法，對(duì)壓榨法、稀釋法、加熱稀釋法、提油返油法4種方法制備的巴豆霜進(jìn)行薄層色譜鑒別、含量測(cè)定及溶血實(shí)驗(yàn)。結(jié)果：4種方法制備的巴豆霜中巴豆苷的含量排序：提油返油法>壓榨法>加熱稀釋法>稀釋法，其中提油返油法和稀釋法制備的巴豆霜有明顯溶血現(xiàn)象。結(jié)論：中華人民共和國(guó)藥典收載的稀釋法由于輔料淀粉的加入，巴豆有效成分含量降低且有溶血效應(yīng)。相比而言，中華人民共和國(guó)藥典規(guī)定的壓榨法更適合作為巴豆制霜方法。

稀釋法；壓榨法；巴豆霜；質(zhì)量比較

巴豆為大戟科植物巴豆CrotontigliumL.的干燥成熟果實(shí)。其含有機(jī)酸及甘油酯類、生物堿類及植物蛋白質(zhì)類成分，生巴豆味辛，性熱，有大毒，歸胃大腸經(jīng)。外用蝕瘡，用于惡瘡疥癬、疣痣。巴豆具有峻下積滯，逐水消腫，豁痰利咽之功能。用于寒積便秘、乳食停滯、下腹水腫、二便不通、喉風(fēng)、喉痹[1]。

巴豆從漢時(shí)入藥至今，有30多種炮制方法。巴豆制霜法最早載于宋《蘇沈良方》：“以巴豆剝?nèi)ぃ羧?，去肉上嫩皮，紙包水濕，入慢火中煨極熟，取出，另以綿紙包之，緩緩捶去其油，紙濕則另換，以成白粉為度”，以后各代均沿襲使用巴豆仁或巴豆霜。

現(xiàn)代研究認(rèn)為，巴豆中的脂肪油成分為巴豆的主要毒性成分，具有較強(qiáng)的瀉下作用，但是通過炮制除去部分油脂，又可體現(xiàn)緩瀉作用，因此，巴豆油是巴豆毒效兼具的主要成分。部分學(xué)者通過研究提出的方法還有稀釋法[2]和提油返油法[3-4]等，其中壓榨法和稀釋法收入了《中華人民共和國(guó)藥典》巴豆霜的制法項(xiàng)下。

另據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，巴豆中含有的巴豆毒蛋白能夠溶解兔、豬、蛇、雞的紅細(xì)胞[5]，被認(rèn)為是巴豆的主要毒性成分，應(yīng)盡量除去。通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，巴豆霜的溶血效應(yīng)與其蛋白在炮制過程中發(fā)生變性失活有關(guān)，炮制過程中加熱有助于降低巴豆霜溶血效應(yīng)[6]。因此，在本次實(shí)驗(yàn)中，我們將溶血實(shí)驗(yàn)作為檢查巴豆毒蛋白變性程度的方法納入巴豆霜的質(zhì)量檢測(cè)。

近年來，我們與炮制設(shè)備專業(yè)廠家合作，經(jīng)多次改進(jìn)，完成了熱壓智能制霜機(jī)的研制。該設(shè)備具有快速壓榨、實(shí)時(shí)稱重等功能，能快速制備巴豆霜，將傳統(tǒng)制霜炮制生產(chǎn)周期縮短為原來的1/30～1/15，降低3/4的原材料損耗。經(jīng)中試驗(yàn)證，該設(shè)備運(yùn)行良好，制備的巴豆霜質(zhì)量穩(wěn)定，使長(zhǎng)期受設(shè)備限制難以推廣的壓榨法制霜問題得到解決。我們將該設(shè)備壓榨法與中華人民共和國(guó)藥典稀釋法和文獻(xiàn)報(bào)道的提油返油法等4種不同工藝制備的巴豆霜樣品的質(zhì)量進(jìn)行比較研究。

1 材料

1.1 儀器與設(shè)備

Waters2695-2998高效液相色譜儀(四元高壓梯度泵、自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱、2998PAD檢測(cè)器、Empower Pro3工作站)；TB-215D型分析天平(北京賽多利斯科學(xué)儀器有限公司)；KQ2100DB型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；FW-100型高速粉碎機(jī)(天津泰斯特儀器有限公司)；熱壓智能制霜機(jī)(杭州海善制藥設(shè)備有限公司)。

1.2 試劑與試藥

巴豆苷、巴豆對(duì)照藥材(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)分別為11856-201001，1141-200001)；戊巴比妥鈉(urchem公司，批號(hào)：ws20050411)；乙醚、硫酸、冰醋酸(北京化工廠，批號(hào)分別為20111018，20100811，20110306，分析純)；甲醇(Fisher Scientific，色譜純)；水為雙蒸水。

1.3 樣品來源

巴豆原藥材由北京華邈中藥工程技術(shù)開發(fā)中心提供，經(jīng)中國(guó)食品藥品檢定研究院中藥標(biāo)本館張繼館長(zhǎng)鑒定為大戟科植物巴豆CrotontigliumL.的干燥成熟果實(shí)。巴豆霜樣品制備方法見表1，每個(gè)方法制備3批樣品。

表1 樣品制備方法

2 方法

2.1 薄層鑒別

按照《中華人民共和國(guó)藥典》2010版一部“巴豆”項(xiàng)下鑒別方法進(jìn)行薄層鑒別。

2.2 含量測(cè)定

按照《中華人民共和國(guó)藥典》2010版一部“巴豆”項(xiàng)下脂肪油和巴豆苷測(cè)定方法測(cè)定藥材中脂肪油和巴豆苷的含量。

2.3 溶血實(shí)驗(yàn)

2.3.1 2%紅細(xì)胞混懸液的制備 家兔麻醉后(戊巴比妥鈉，40 mg·Kg-1，耳緣靜脈注射)，自頸總動(dòng)脈取血，放入含玻璃珠的錐形瓶中振搖10 min，除去纖維蛋白原，使成脫纖血液。加入0.9%氯化鈉溶液約10倍量，搖勻，1000～1500 r·min-1離心15 min，棄去上清液，沉淀的紅細(xì)胞再用0.9%氯化鈉溶液按上述方法洗滌2～3次，至上清液不顯紅色為止。將所得紅細(xì)胞用0.9%氯化鈉溶液配成2%的混懸液，供實(shí)驗(yàn)用。

2.3.2 樣品處理方法 取樣品1 g，加入10 mL 0.9%氯化鈉研磨成漿，放置24 h(4 ℃)，3000 r·min-1離心20 min，取上清液在6 h內(nèi)用于實(shí)驗(yàn)(1→10)，將上清液用0.9%氯化鈉稀釋一倍同時(shí)用于實(shí)驗(yàn)(1→20)。

2.3.3溶血檢查法 取潔凈試管若干支，編號(hào)，按表2所示依次加入2%紅細(xì)胞混懸液、0.9%氯化鈉溶液及受試樣品，混勻后，立即置(37±0.5)℃的恒溫箱中進(jìn)行溫育。每小時(shí)觀察溶血和凝聚反應(yīng)，連續(xù)觀察3 h。

2.3.4 結(jié)果判斷 溶血或部分溶血(+)：溶血澄明紅色，管底無細(xì)胞殘留或有少量紅細(xì)胞殘留；無溶血(-)：紅細(xì)胞全部下沉，上清液無色澄明；凝集(o)：溶液中有棕紅色或紅棕色絮狀沉淀，振搖后不分散。若凝聚物在試管振蕩后又能均勻分散，或?qū)⒛畚镏糜谳d玻片上，在蓋玻片邊緣滴加2滴0.9%氯化鈉溶液，置顯微鏡下觀察，凝聚紅細(xì)胞能被沖散者為假凝集，若凝聚物不被搖散或在玻片上不被沖散者為凝集[5]。

表2 樣品溶液加液量 /mL

3 結(jié)果

3.1 薄層檢測(cè)結(jié)果

見圖1。

注：1.提油返油法；2.加熱稀釋法；3.稀釋法；4.巴豆油；5.壓榨法；6.巴豆對(duì)照藥材。圖1 巴豆霜不同炮制方法薄層鑒別圖

3.2 含量測(cè)定、溶血效應(yīng)結(jié)果

見表3。

表3 不同炮制工藝巴豆霜脂肪油和巴豆苷含量(n=3)

4種方法所致溶血效應(yīng)見表4、圖2。

表4 不同炮制工藝巴豆霜溶血效應(yīng)

注：D1.稀釋法；D2.加熱稀釋法；D3.壓榨法；D4.提油返油法。圖2 不同炮制方法巴豆霜溶血實(shí)驗(yàn)結(jié)果

4 討論

不同炮制工藝均可使巴豆霜脂肪油含量達(dá)到中華人民共和國(guó)藥典規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)，從薄層檢測(cè)結(jié)果來看，各炮制品的斑點(diǎn)與巴豆對(duì)照藥材一致。但是從含量測(cè)定結(jié)果來看，巴豆苷含量差別較大，采用稀釋法制備的巴豆霜巴豆苷含量大約是壓榨法制備的1/5。

該實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，巴豆制備巴豆霜必須經(jīng)加熱方能使巴豆中的巴豆毒蛋白滅活，降低溶血毒性。不同制霜方法中，如果采用淀粉稀釋法，而不經(jīng)加熱處理，其溶血效應(yīng)會(huì)依然保留；提油返油法由于可能有有機(jī)溶劑殘留，導(dǎo)致血細(xì)胞變性，溶血和變色。

根據(jù)上述結(jié)果，稀釋法對(duì)于巴豆中具有溶血毒性的蛋白沒有消除作用，且降低指標(biāo)性成分巴豆苷含量，使其不能滿足不得少于0.8%的中華人民共和國(guó)藥典標(biāo)準(zhǔn)。因此，從工藝上來說，稀釋法主要是為了降低成本，能夠達(dá)到含油量限度要求，而并未全面考慮藥效成分保留的問題，既不符合傳統(tǒng)炮制方法的經(jīng)驗(yàn)，又不能達(dá)到減毒、增效的目的，該方法是否還要存留值得商榷。壓榨法既能保存巴豆成分，又能除去巴豆毒蛋白的溶血毒性，是值得推廣的制霜方法。

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典：一部[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010.

[2] 董春艷.巴豆霜的制備[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2000，11(6)：513.

[3] 王毅，張靜修.巴豆霜的新制法及其急性毒性試驗(yàn)[J].中藥材，1993，16(4)：24.

[4] 姜玉娟，盛秀梅，朱鳳琴，等.巴豆霜炮制新工藝研究[J].中醫(yī)藥信息，1999(3)：63.

[5] 國(guó)家中醫(yī)藥管理局《中華本草》編委會(huì).中華本草：第四卷[M].上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社，1999.

[6] 陳彥琳，杜杰，白宗利，等.十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠(SDS)電泳比較加熱前后巴豆霜蛋白成分的變化[J].世界科學(xué)技術(shù)—中醫(yī)藥現(xiàn)代化，2010，12(6)：21-24.

AComparativeStudyonQualityofCrotonisSemenPulveratumwithDifferentProcessingMethods

CHENYanlin，JINFeng，DUJie，LIANGHuan，RENYuzhen*

(ChinaNationalTraditionalChineseMedicineCorp.，Beijing102600，China)

Objective：There are four kind of processing method for processing Crotonis Semen Pulveratum.The first is squeezing fat，the second is adding starch to dilute the fat，the third is to heat the seed and then adding starch，the forth is extracting the fat and then dissolving part of fat，putting back in the residue.Comparing with the Pulveratum by the four methods，the squeezing way can keep 1.94% of croton glycosides，the diluting way made the content of croton glycosides very low，which could not to meet the Chinese Pharmacopoeia standards，the diluting way made the result of Hemolysis positive，and squeezing way or heat made it negative.According to the result，the squeezing way，which can keep active ingredient reaching standard，and reduce the toxicity，is more suitable to processing Crotonis Semen Pulveratum.

deliuting way；Squeezing way；Crotonis Semen Pulveratum；quality evaluation

10.13313/j.issn.1673-4890.2015.11.021

2015-01-12)

國(guó)家中醫(yī)藥管理局中醫(yī)藥行業(yè)科研專項(xiàng)中藥類項(xiàng)目(201107008)

*

任玉珍，主任藥師，研究方向：中藥飲片質(zhì)量控制；Tel：(010)61252955，E-mail：renjl@163.com