周小平，司曉偉，徐武清，俞　洋

（寧夏醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)學(xué)院寧夏銀川750004）

·基礎(chǔ)研究·

補(bǔ)益營(yíng)衛(wèi)方、TGFβ1及bFGF對(duì)衰老人皮膚成纖維細(xì)胞c-Jun基因表達(dá)的影響

周小平，司曉偉，徐武清，俞洋

（寧夏醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)學(xué)院寧夏銀川750004）

目的：研究補(bǔ)益營(yíng)衛(wèi)方、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1（TGFβ1）及堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（bFGF）對(duì)衰老人皮膚成纖維細(xì)胞c-Jun基因表達(dá)的影響。方法：通過(guò)連續(xù)傳代培養(yǎng)復(fù)制衰老人皮膚成纖維細(xì)胞模型，通過(guò)中和抗體阻斷TGFβ1及bFGF后，利用熒光定量PCR法檢測(cè)衰老人皮膚成纖維細(xì)胞c-Jun基因表達(dá)。結(jié)果：人皮膚成纖維細(xì)胞衰老時(shí)，c-Jun基因表達(dá)水平24h和48h比人年輕皮膚成纖維細(xì)胞分別下降了70%和71%，72h則兩者的表達(dá)水平相當(dāng)。衰老人皮膚成纖維細(xì)胞補(bǔ)益營(yíng)衛(wèi)藥物處理后顯著提高了c-Jun基因的表達(dá)，相對(duì)于衰老人皮膚成纖維細(xì)胞，其24h、48h分別提高了4.67倍和2.12倍，而至72h其表達(dá)水平相當(dāng)。中和TGF-β1蛋白后，衰老人皮膚成纖維細(xì)胞c-Jun基因的表達(dá)水平24h和72h分別是年輕人皮膚成纖維細(xì)胞的2.4倍和1.7倍。而48h時(shí)，年輕人皮膚成纖維細(xì)胞的基因表達(dá)水平是衰老人皮膚成纖維細(xì)胞的9.2倍。衰老人皮膚成纖維細(xì)胞補(bǔ)益營(yíng)衛(wèi)藥物處理后顯著提高了c-Jun基因的表達(dá)，48h和72h時(shí)c-Jun基因的表達(dá)水平分別是衰老人皮膚成纖維細(xì)胞的2.3倍和1.5倍。中和TGF-β1和bFGF蛋白后，c-Jun基因的表達(dá)水平隨著時(shí)間的不同被明顯下調(diào)；與年輕人皮膚成纖維細(xì)胞相比，24h、48h和72h衰老人皮膚成纖維細(xì)胞c-Jun基因的表達(dá)水平分別下降了64.5%、94.2%和73.7%。衰老人皮膚成纖維細(xì)胞補(bǔ)益營(yíng)衛(wèi)藥物處理后c-Jun基因的表達(dá)隨著時(shí)間的不同相對(duì)于衰老人皮膚成纖維細(xì)胞被顯著上調(diào)。24h、48h和72h分別是衰老人皮膚成纖維細(xì)胞的9.7倍、3.6倍和9.8倍?？v向比較來(lái)看，TGF-β1蛋白對(duì)衰老人皮膚成纖維細(xì)胞c-Jun基因的表達(dá)存在復(fù)雜的調(diào)節(jié)作用。bFGF蛋白對(duì)衰老人皮膚成纖維細(xì)胞c-Jun基因表達(dá)有明顯的促進(jìn)作用。結(jié)論：衰老時(shí)人皮膚成纖維細(xì)胞c-Jun基因的表達(dá)紊亂。補(bǔ)益營(yíng)衛(wèi)方對(duì)衰老人皮膚成纖維細(xì)胞c-Jun基因表達(dá)具有促進(jìn)作用；其促進(jìn)c-Jun基因表達(dá)存在不依賴于TGF-β1和bFGF的途徑。bFGF蛋白是TGF-β1信號(hào)調(diào)節(jié)途徑的下游蛋白；是c-Jun基因表達(dá)的重要促進(jìn)因子。

補(bǔ)益營(yíng)衛(wèi)；TGFβ1；bFGF；c-Jun；皮膚衰老

皮膚衰老研究一直是衰老研究的熱點(diǎn)領(lǐng)域之一。皮膚衰老是內(nèi)在時(shí)序衰老的結(jié)局之一，治療內(nèi)在時(shí)序衰老是治本之策。中醫(yī)理論認(rèn)為營(yíng)衛(wèi)具有“溫分肉、充皮膚、肥腠理、司開(kāi)合”的作用，因此，營(yíng)衛(wèi)與皮膚的生理與病理密切相關(guān)；營(yíng)衛(wèi)的盛衰與皮膚衰老直接相關(guān)。營(yíng)衛(wèi)與元?dú)庖粯与S著年齡的增長(zhǎng)逐漸衰弱，適時(shí)補(bǔ)益營(yíng)衛(wèi)有助于延緩皮膚衰老。筆者前期研究顯示補(bǔ)益營(yíng)衛(wèi)方具有增加衰老皮膚膠原、改善衰老皮膚形態(tài)學(xué)的作用［1］。這些作用與TGFβ1［2］和bFGF［3］等因子及補(bǔ)益營(yíng)衛(wèi)方促進(jìn)衰老皮膚成纖維細(xì)胞增殖有關(guān)［4］。c-Jun是細(xì)胞早期反應(yīng)基因產(chǎn)物，與c-Foc通常形成AP-1而發(fā)揮作用，被認(rèn)為是介導(dǎo)生長(zhǎng)刺激信號(hào)的核信使。該基因的表達(dá)增加及其反式激活作用在細(xì)胞增殖及表型分化中起著重要作用。本研究將探討補(bǔ)益營(yíng)衛(wèi)方、TGFβ1和bFGF對(duì)衰老人皮膚成纖維細(xì)胞c-Jun基因的影響。

1　材料和方法

1.1材料

1.1.1細(xì)胞株：人皮膚成纖維細(xì)胞株購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院典型培養(yǎng)物保藏中心昆明細(xì)胞庫(kù)（編號(hào)：KCB 200505S）。

1.1.2實(shí)驗(yàn)藥物：實(shí)驗(yàn)所用中藥材人參、生黃芪和甘草購(gòu)自寧夏醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)門診，為寧夏明德中藥飲片有限公司生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)飲片。用水煎兩次，煎液5 000rpm離心20min取上清，用蒸餾水定容至1g/ml（每毫升含生藥材1g）濃度冷藏備用。用時(shí)高壓滅菌，用培養(yǎng)基稀釋為2.5%濃度用于細(xì)胞培養(yǎng)。

1.1.3實(shí)驗(yàn)儀器及試劑：見(jiàn)表1。

1.2方法

1.2.1細(xì)胞傳代培養(yǎng)：人皮膚成纖維細(xì)胞株（3～5代）傳代培養(yǎng)至衰老［5］（40代左右）制造衰老成纖維細(xì)胞模型。培養(yǎng)方法為：細(xì)胞用DMEM完全培養(yǎng)基（含100U/ml鏈霉素、100U/ml青霉素、10%胎牛血清）于37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中常規(guī)培養(yǎng)。當(dāng)細(xì)胞融合生長(zhǎng)至75%～85%時(shí)，進(jìn)行再傳代，上述操作均于超凈工作臺(tái)中完成。其中取8～10代細(xì)胞為年輕對(duì)照；衰老細(xì)胞分為兩組，一組常規(guī)培養(yǎng)基培養(yǎng)，一組用含2.5%藥物的培養(yǎng)基培養(yǎng)。

表1　實(shí)驗(yàn)儀器、試劑及其生產(chǎn)廠家

1.2.2對(duì)衰老人皮膚成纖維細(xì)胞的干預(yù)：衰老細(xì)胞的處理分三種情況。第一種情況，衰老細(xì)胞分為兩組，一組常規(guī)培養(yǎng)基培養(yǎng)，一組用含2.5%藥物的培養(yǎng)基培養(yǎng)。第二種情況，衰老細(xì)胞分為兩組，一組衰老細(xì)胞培養(yǎng)基中加入TGFβ1中和抗體（濃度為1.0μg/ml）培養(yǎng)；另一組用含2.5%藥物的培養(yǎng)基中再加入TGFβ1中和抗體培養(yǎng)。第三情況，衰老細(xì)胞分為兩組，一組衰老細(xì)胞培養(yǎng)基中加入TGFβ1和bFGF中和抗體（濃度為1.0μg/ml）培養(yǎng)；另一組用含2.5%藥物的培養(yǎng)基中再加入TGFβ1與bFGF中和抗體培養(yǎng)。并分別于24h、48h和72h分別收集細(xì)胞，抽提總RNA，用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法定量c-Jun基因表達(dá)。每個(gè)指標(biāo)測(cè)三個(gè)樣本，取平均值。

1.2.3實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR

1.2.3.1引物設(shè)計(jì)：從GenBank下載TGFβ1（NM_ 000660.4）、bFGF（NM_002006.4）、c-Jun（NM_ 002228.3）mRNA序列，設(shè)計(jì)如下引物：TGFβ1上游引物5′GAGAAGAACTGCTGCGTGCGG3′；下游引物5′GCGTGTCCAGGCTCCAAATGT3′。bFGF上游引物5′TTTTCAGTCTTCGCCAGGTCA3′；下游引物5′TTCGGCAACAGCACACAAATC3′。c-Jun上游引物5′

AGCGGCGGAAAGCAGCGGT3′；下游引物5′ACCGCCGTGGAGAAGCCTAA 3′。以β-actin為內(nèi)參基因（詳細(xì)信息參見(jiàn)CWbio.Co.Ltd，Cat#CW0900）。

1.2.3.2提取樣本總RNA：用超純RNA提取試劑盒（CWbio.Co.Ltd（Cat#CW0581））按產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)提取細(xì)胞樣本中總RNA。

1.2.3.3逆轉(zhuǎn)錄：用HiFi-MMLVcDNA第一鏈合成試劑盒（CWbio.Co.Ltd（Cat#CW0744））按產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄。

1.2.3.4電泳：取5μlRNA用1%瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳檢測(cè)目的條帶，回收純化用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.2.3.5熒光定量PCR分析：用Roche480型熒光定量PCR儀，采用2-△△CT法進(jìn)行數(shù)據(jù)的相對(duì)定量分析。計(jì)算公式為：

建立篩選引物標(biāo)準(zhǔn)曲線及融解曲線：取樣本cDNA進(jìn)行5倍梯度稀釋，稀釋后樣品各取2μl作模板，分別用目的基因引物和內(nèi)參基因引物進(jìn)行擴(kuò)增。同時(shí)在60～95℃進(jìn)行融解曲線分析，并繪制目的基因和內(nèi)參基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線和融解曲線（由儀器自動(dòng)完成）。各標(biāo)準(zhǔn)曲線的R2均達(dá)到0.99，說(shuō)明線性相關(guān)度很高；擴(kuò)增效率均在90%以上，熔解曲線峰呈單峰，特異性強(qiáng)，因此可采用此種方法和上述引物進(jìn)行后續(xù)樣本的擴(kuò)增分析。

樣品RealTimePCR分析：將各樣品cDNA10倍稀釋后取2μl作模板，分別用目的基因引物和內(nèi)參基因引物進(jìn)行擴(kuò)增，重復(fù)孔道數(shù)為3。同時(shí)在60-95℃進(jìn)行溶解曲線分析（由儀器自動(dòng)完成）。

PCR反應(yīng)體系：用UltraSYBR Mixture（with Rox）（CWbio.Co.Ltd，Cat#CW0956）進(jìn)行擴(kuò)增，實(shí)驗(yàn)操作按產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。擴(kuò)增程序?yàn)椋?5°10min，（95℃15s，60℃60s）×40個(gè)循環(huán)。RealTime反應(yīng)體系為：Ultra SYBR Mixture（2×）10μl、上游引物（10μM）0.4μl、下游引物（10uM）0.4μl、模板2μl，加入滅菌蒸餾水至20μl。

2　結(jié)果

2.1人皮膚成纖維細(xì)胞衰老時(shí)c-Jun基因的表達(dá)

如圖1。人皮膚成纖維細(xì)胞衰老時(shí)c-Jun基因表達(dá)24h和48h其表達(dá)水平比年輕人皮膚成纖維細(xì)胞分別下降了70%和71%，72h則兩者的表達(dá)水平相當(dāng)，提示衰老時(shí)人皮膚成纖維細(xì)胞c-Jun基因表達(dá)紊亂。衰老人皮膚成纖維細(xì)胞補(bǔ)益營(yíng)衛(wèi)藥物處理后顯著提高了c-Jun基因的表達(dá)，相對(duì)于衰老人皮膚成纖維細(xì)胞，其24h、48h分別提高了4.67倍和2.12倍。而至72h其表達(dá)水平相當(dāng)，提示補(bǔ)益營(yíng)衛(wèi)方改善了細(xì)胞衰老時(shí)的c-Jun基因表達(dá)紊亂。

圖1　各組c-Jun基因的表達(dá)

圖3　阻斷TGF-β1和bFGF各組c-Jun基因的表達(dá)

2.2中和TGF-β1蛋白后衰老人皮膚成纖維細(xì)胞c-Jun基因的表達(dá)

如圖2。中和TGF-β1蛋白后，衰老人皮膚成纖維細(xì)胞c-Jun基因的表達(dá)24h和72h時(shí)，分別是年輕人皮膚成纖維細(xì)胞的2.4倍和1.7倍。而48h時(shí)，年輕人皮膚成纖維細(xì)胞的基因表達(dá)水平是衰老人皮膚成纖維細(xì)胞的9.2倍，提示TGF-β1蛋白對(duì)c-Jun基因表達(dá)具有一種復(fù)雜作用。衰老人皮膚成纖維細(xì)胞經(jīng)補(bǔ)益營(yíng)衛(wèi)藥物處理后顯著提高了c-Jun基因的表達(dá)，48h和72h時(shí)c-Jun基因的表達(dá)水平分別是衰老人皮膚成纖維細(xì)胞的2.3倍和1.5倍。從曲線圖來(lái)看，藥物干預(yù)具有刺激衰老人皮膚成纖維細(xì)胞c-Jun基因表達(dá)的作用。

2.3中和TGF-β1和bFGF蛋白后衰老人皮膚成纖維細(xì)胞c-Jun基因的表達(dá)

如圖3。中和TGF-β1和bFGF蛋白后，c-Jun基因的表達(dá)水平隨著時(shí)間的不同被明顯下調(diào)；與年輕人皮膚成纖維細(xì)胞相比，24h、48h和72h衰老人皮膚成纖維細(xì)胞c-Jun基因的表達(dá)水平分別下降了64.5%、94.2%和73.7%。衰老人皮膚成纖維細(xì)胞經(jīng)補(bǔ)益營(yíng)衛(wèi)藥物處理后c-Jun基因的表達(dá)隨著時(shí)間的不同相對(duì)于衰老人皮膚成纖維細(xì)胞被顯著上調(diào)。24h、48h和72h分別是衰老人皮膚成纖維細(xì)胞的9.7倍、3.6倍和9.8倍。提示補(bǔ)益營(yíng)衛(wèi)方促進(jìn)c-Jun基因表達(dá)。

圖2　中和TGF-β1后各組c-Jun基因的表達(dá)

3　討論

營(yíng)衛(wèi)有“充皮膚、肥腠理”的作用，這一作用與皮膚營(yíng)養(yǎng)直接相關(guān)。營(yíng)衛(wèi)的盛衰直接關(guān)系著皮膚的質(zhì)地與外觀，年輕還是衰老。故《傷寒論·平脈法》曾指出：“衛(wèi)氣衰，面色黃，榮氣不足，面色青。榮為根，衛(wèi)為葉，榮衛(wèi)俱微，則根葉枯槁……。”因此，充實(shí)營(yíng)衛(wèi)可以維持皮膚的健康靚麗，延緩皮膚衰老的發(fā)展。

成纖維細(xì)胞是構(gòu)成皮膚真皮的主要細(xì)胞，其功能的正常與否與皮膚的健康與否密切相關(guān)。衰老時(shí)皮膚成纖維細(xì)胞增殖能力下降，其分泌的在保持皮膚美白、飽滿及皮膚彈性方面具有重要作用的細(xì)胞外基質(zhì)蛋白膠原蛋白的含量逐漸降低［6］，缺少?gòu)椥?、易碎?］。成纖維細(xì)胞的這些變化導(dǎo)致皮膚變薄，粗糙，缺乏彈性。上述變化與營(yíng)衛(wèi)“充皮膚、肥腠理”功能下降緊密相關(guān)。補(bǔ)益營(yíng)衛(wèi)，恢復(fù)衰老成纖維細(xì)胞的增殖能力，研究影響其增殖的影響因子和作用途徑，是揭示營(yíng)衛(wèi)“充皮膚、肥腠理”的重要內(nèi)涵之一。

c-Jun癌蛋白是激活蛋白轉(zhuǎn)錄復(fù)合物的必需元件。與其它Jun/Fos成員通過(guò)異二聚作用形成活性激活蛋白-1復(fù)合物（AP-1），來(lái)調(diào)節(jié)不同靶基因的表達(dá)，包括它們啟動(dòng)子內(nèi)的AP-1結(jié)合DNA元件。AP-1控制基因表達(dá)調(diào)節(jié)一些重要的細(xì)胞功能如細(xì)胞周期進(jìn)展，遷移，增殖和凋亡。c-Jun由c-Jun氨基端激酶磷酸化激活，響應(yīng)不同的生物應(yīng)激信號(hào)［8］。c-Jun調(diào)控范圍十分廣泛，能被各組織中的多種化學(xué)物質(zhì)激活并受其影響［9］。如癌癥發(fā)生［10-11］、DNA甲基化［12］、神經(jīng)再生［13］。c-Jun和Jun-B可被TGF-β家族誘導(dǎo)產(chǎn)生，在細(xì)胞分化中發(fā)揮重要作用［14］。

筆者的研究結(jié)果顯示，人皮膚成纖維細(xì)胞衰老時(shí)24h和48h其c-Jun表達(dá)水平比年輕人皮膚成纖維細(xì)胞分別下降了70%和71%，72h則兩者的表達(dá)水平相當(dāng)。提示衰老細(xì)胞c-Jun基因表達(dá)紊亂。衰老人皮膚成纖維細(xì)胞經(jīng)補(bǔ)益營(yíng)衛(wèi)藥物處理后顯著逆轉(zhuǎn)了c-Jun基因的表達(dá)，相對(duì)于衰老人皮膚成纖維細(xì)胞，其24h、48h分別提高了4.67倍和2.12倍。而至72h其表達(dá)水平相當(dāng)，說(shuō)明補(bǔ)益營(yíng)衛(wèi)方對(duì)c-Jun基因表達(dá)有一定促進(jìn)作用。

中和TGF-β1蛋白后，衰老人皮膚成纖維細(xì)胞c-Jun基因的表達(dá)24h和72h時(shí)，分別是年輕人皮膚成纖維細(xì)胞的2.4倍和1.7倍。而48h時(shí)，年輕人皮膚成纖維細(xì)胞的c-Jun基因表達(dá)水平卻是衰老人皮膚成纖維細(xì)胞的9.2倍，提示TGF-β1蛋白對(duì)c-Jun基因表達(dá)有復(fù)雜的調(diào)節(jié)作用。衰老人皮膚成纖維細(xì)胞補(bǔ)益營(yíng)衛(wèi)藥物處理后顯著提高了c-Jun基因的表達(dá)，48h和72h時(shí)基因的表達(dá)水平分別是衰老人皮膚成纖維細(xì)胞的2.3倍和1.5倍，提示補(bǔ)益營(yíng)衛(wèi)方促進(jìn)衰老人皮膚成纖維細(xì)胞c-Jun基因的表達(dá)可能存在不依賴于TGF-β1信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。

中和TGF-β1和bFGF蛋白后，衰老人皮膚成纖維細(xì)胞c-Jun基因的表達(dá)水平隨著時(shí)間的不同被明顯下調(diào)；與年輕人皮膚成纖維細(xì)胞相比，24h、48h和72h分別下降了64.5%、94.2%和73.7%，提示bFGF蛋白是c-Jun基因表達(dá)的重要促進(jìn)因子。衰老人皮膚成纖維細(xì)胞經(jīng)補(bǔ)益營(yíng)衛(wèi)藥物處理后，c-Jun基因的表達(dá)隨著時(shí)間的不同相對(duì)于衰老人皮膚成纖維細(xì)胞被顯著上調(diào)。24h、48h和72h分別是衰老人皮膚成纖維細(xì)胞的9.7倍、3.6倍和9.8倍。說(shuō)明補(bǔ)益營(yíng)衛(wèi)方對(duì)c-Jun基因表達(dá)有明顯的促進(jìn)作用，也提示補(bǔ)益營(yíng)衛(wèi)方對(duì)c-Jun基因表達(dá)存在不依賴于TGF-β 1蛋白和bFGF蛋白的途徑。

縱向比較來(lái)看，未中和TGF-β1前，衰老人皮膚成纖維細(xì)胞c-Jun基因的表達(dá)24h、48h和72h分別為1、3.84和4.3；中和TGF-β1蛋白后，衰老人皮膚成纖維細(xì)胞c-Jun基因的表達(dá)24h、48h和72h分別為8.13、1.16和7.38，兩者對(duì)比來(lái)看，提示TGF-β1蛋白對(duì)c-Jun基因的表達(dá)存在復(fù)雜的調(diào)節(jié)作用，即可能存在雙向調(diào)節(jié)作用。當(dāng)TGF-β1和bFGF蛋白均被中和后，衰老人皮膚成纖維細(xì)胞c-Jun基因的表達(dá)24h、48h和72h分別下降為1.19、0.78和1.13，相對(duì)于只中和TGF-β1蛋白來(lái)看，c-Jun基因的表達(dá)如此劇烈的下降，提示1）bFGF蛋白是TGF-β1信號(hào)調(diào)節(jié)途徑的下游蛋白；2）bFGF蛋白是c-Jun基因表達(dá)的重要促進(jìn)因子。

綜上所述，衰老時(shí)人皮膚成纖維細(xì)胞c-Jun基因的表達(dá)紊亂。此時(shí)TGF-β1蛋白對(duì)其的調(diào)節(jié)作用亦表現(xiàn)異常。補(bǔ)益營(yíng)衛(wèi)方對(duì)衰老人皮膚成纖維細(xì)胞c-Jun基因表達(dá)有促進(jìn)作用，這種促進(jìn)作用存在不依賴于TGF-β1蛋白和bFGF蛋白的途徑，其作用機(jī)制有待于進(jìn)一步研究。

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編輯/張惠娟

c-Jun Gene Expression Of The Recipe Of Supplementing Ying-wei And TGF-β1 And bFGF In the aging Human Skin Fibroblasts

ZHOU Xiao-ping，SI Xiao-wei，XU Wu-qing，YU Yang
（Traditional Chinese Medicine School of Ningxia Medical University，Yinchuan 750004，Ningxia，China）

Objective To study the c-Jun gene expression influenced by the recipe of supplementing Ying-wei and transforming growth factor-β1（TGF-β1）and basic fibroblast growth factor（bFGF）in the aging human skin fibroblasts.Methods Firstly，to copy the aging model of human skin fibroblasts by continuous passage culturing.Secondly，to detect the c-Jun gene expression of the aging human skin fibroblasts through the fluorescent quantitative PCR method，after neutralizing antibody blocking TGF-β1 and bFGF.Results When the human skin fibroblasts aging，the expressive level of c-Jun gene，compared to that of young skin fibroblasts，falls by 70%and 71%in 24h and 48h.But theexpressive levels in 72h are both similar.As aging human skin fibroblasts treated by the recipe of supplementing Ying-wei，the c-Jun gene expression which has increased to 4.67 times and 2.12 times in 24h and 48h，has significantly improved，compared to the aging human skin fibroblasts.And the expressive levels of them are equivalent in 72h.After neutralizing TGF-β1 protein，c-Jun gene expressive level of the aging human skin fibroblasts is 2.4 times and 1.7 times as large as that of young skin fibroblasts in 24h and 72h.In 48h，the gene expressive level of young skin fibroblasts is 9.2 times as large as that of aging human skin fibroblasts.After using the recipe of supplementing Yingwei，the c-Jun gene expression of aging human skin fibroblasts has improved obviously.The c-Jun gene expressive level of human skin fibroblasts raise by 2.3 times and 1.5 times in 48h and 72h.After neutralizing TGF-β1 protein and bFGF protein，c-Jun gene expressive level is decreased obviously with different time；Compared with the young skin fibroblasts，c-Jun gene expression of the aging human skin fibroblasts falls by 64.5%，94.2%and 73.7%in 24h，48h and 72h.As aging human skin fibroblasts treated by the recipe of supplementing Ying-wei，c-Jun gene expression has significantly increased over time.c-Jun gene expression in 24h，48h and 72h is of 9.7 times，3.6 times and 9.8 times as much as that of aging human skin fibroblasts.From the perspective of longitudinal comparison，TGF-β1 protein has a complex regulative effect on c-Jun gene expression of the aging human skin fibroblasts.And bFGF protein has obviously promoted the c-Jun gene expression of the aging human skin fibroblasts.Conclusion When people aging，the c-Jun gene expression of the aging human skin fibroblasts is disorder.The recipe of supplementing Ying-wei can promote the c-Jun gene expression of the aging human skin fibroblasts；And this promotion does not depend on the access of the TGF-β1 and bFGF.bFGF protein is the downstream protein of signal regulating pathways of the TGF-β1；and is one of the important promoting factors of c-Jun gene expression.

Supplementing Ying-wei；TGFβ1；bFGF；c-Jun；skin aging

Q813.1

A

1008-6455（2015）17-0028-05

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（30960479）

2015-05-02

2015-06-25