廖芷卉，唐　昊，程天印

（湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，湖南 長(zhǎng)沙 410128）

蜱類唾液的采集方法

廖芷卉，唐昊，程天印

（湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，湖南 長(zhǎng)沙 410128）

蜱是一類以吸血為生的體外寄生蟲(chóng)，對(duì)人和動(dòng)物具有直接和間接雙重危害，但迄今為止人們尚無(wú)安全、高效、環(huán)保的防蜱滅蜱措施。以Bm86抗原為基礎(chǔ)的抗蜱疫苗的成功研制和商品化激發(fā)了蜱學(xué)工作者鑒定功能蛋白、篩選候選抗原的熱情，且成效明顯。蜱唾液中含有大量的功能蛋白，對(duì)蜱吸血活動(dòng)至關(guān)重要，其中一些蛋白具有疫苗開(kāi)發(fā)價(jià)值，是分離、鑒定蜱唾液功能蛋白的重要來(lái)源。由于蜱個(gè)體較小，采集比較困難，制約了很多科研人員的研究進(jìn)程。近兩年，筆者在實(shí)踐過(guò)程中，積累了一些采集唾液的經(jīng)驗(yàn)，現(xiàn)總結(jié)如下：

1　實(shí)驗(yàn)材料及其準(zhǔn)備

1.1蜱根據(jù)需要選擇適當(dāng)種類、狀態(tài)、性別或發(fā)育階段的個(gè)體。本實(shí)驗(yàn)選用的是半飽血的雌成褐黃血蜱。用前放入ddH2O中洗去體表污物，尤其是假頭部分需保持潔凈，清洗完后用濾紙吸除殘液。

1.2藥品毛果蕓香堿或多巴胺。5%的毛果蕓香堿-甲醇溶液，0.2%多巴胺-PBS（磷酸鹽緩沖液）。

1.3毛細(xì)管0.1×100mm微量采血吸管。將吸管中間處置于酒精燈火焰中心加熱，待玻璃軟化后輕輕用力拉扯，使之逐漸變細(xì)；移離火焰，冷卻；根據(jù)蜱口器情況以醫(yī)用砂輪片在適當(dāng)口徑切斷；加熱軟化使切面光滑，以防割傷口器。

1.4濕盒在大小適中的有蓋鋁制或塑料盒底部平鋪3～4層衛(wèi)生紙，加水濕潤(rùn)。

體視顯微鏡、泥性橡皮、載玻片、雙面膠、醫(yī)用無(wú)紡布透氣膠帶等。

2　操作方法

筆者在參考前人經(jīng)驗(yàn)基礎(chǔ)上，經(jīng)過(guò)探索，擬定了一套簡(jiǎn)單、易行、可靠的蜱唾液采集方法，操作步驟如下：

2.1蜱的固定：取潔凈的載玻片，于中心處貼長(zhǎng)約0.5cm的雙面膠；將蜱背面朝下粘于其上；用膠布覆于蜱腹面后半部分，兩頭粘于蜱兩側(cè)的玻片上。

2.2取花生粒大小的泥性橡皮，捏成錐形，粘于蜱假頭端前1.0cm左右處。

2.3將固定蜱的玻片放在體視顯微鏡載物臺(tái)上，移動(dòng)至視野中心；調(diào)節(jié)顯微鏡放大倍數(shù)，以便能看清蜱口下板；滴加5%毛果蕓香堿或0.2%多巴胺5μL于蜱背部盾板處。

2.4唾液的收集：在體視顯微鏡下觀察假頭部分；取一毛細(xì)管，細(xì)端向蜱，中部置于泥橡皮錐頂部；緩緩前推毛細(xì)管直至其端口接近假頭，撥開(kāi)須肢，對(duì)準(zhǔn)口器，向前推進(jìn)使毛細(xì)管插入。以指腹輕壓泥橡皮錐頂部的毛細(xì)管，使之固定牢實(shí)，見(jiàn)圖1。

2.5將蜱輕輕地轉(zhuǎn)移至濕盒中，蓋上盒蓋；放入37℃的恒溫培養(yǎng)箱，4h后取出，收集玻璃毛細(xì)管中的唾液。收集到的唾液保存在-70℃的冰箱中，待下一步實(shí)驗(yàn)使用。

3　體會(huì)

3.1選用的泥性橡皮需軟硬適中，可塑成任意形狀；具有一定粘性，能很好的粘附玻片上和固定毛細(xì)管。

3.2毛細(xì)管插管時(shí)動(dòng)作要輕柔，不要損傷蜱假頭部分。

3.3根據(jù)筆者的經(jīng)驗(yàn)，每只半飽血雌成鐮形扇頭蜱（R.Haemaphysaloides）或褐黃血蜱（H.Flava）可采唾液2～5μL。

3.4使用毛果蕓香堿刺激的蜱唾液較無(wú)色、清亮，而以多巴胺催吐的蜱唾液顏色偏黃。

圖1　褐黃血蜱唾液采集圖

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10.3969/J.ISSN.1671-6027.2015.07.019