蔣 冰，黃 波，蔡存?zhèn)?，?騫，王 正

(遼寧省腫瘤醫(yī)院 病理科，遼寧 沈陽(yáng) 110042)

論 著

三陰性乳腺癌中CK5/6和PTEN的表達(dá)及其臨床病理意義

蔣 冰，黃 波，蔡存?zhèn)?，?騫，王 正

(遼寧省腫瘤醫(yī)院 病理科，遼寧 沈陽(yáng) 110042)

目的 探討三陰性乳腺癌組織中CK5/6和PTEN的表達(dá)及其臨床病理意義。方法 通過(guò)免疫組化方法檢測(cè)68例三陰性乳腺癌組織和22例正常乳腺組織CK5/6和PTEN的表達(dá)，分析兩者的表達(dá)水平與臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果 CK5/6在三陰性乳腺癌組織陽(yáng)性率為52.9%(36/68)，明顯高于正常乳腺組織9.1%(2/22)(P<0.05)。PTEN在三陰性乳腺癌組織陽(yáng)性率為55.9%(38/68)，明顯低于正常乳腺組織90.9%(20/22)(P<0.05)。CK5/6和PTEN表達(dá)在腫瘤直徑<5cm和≥5cm間，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目<5個(gè)和≥5個(gè)間及是否遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移間比較，差異均有顯著性意義(P<0.05)。三陰性乳腺癌CK5/6陽(yáng)性組及PTEN陰性組患者的生存時(shí)間顯著短于CK5/6陰性組及PTEN陽(yáng)性組(P<0.05)。結(jié)論 三陰性乳腺癌CK5/6表達(dá)和PTEN表達(dá)缺失與腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移有關(guān)，CK5/6表達(dá)和PTEN表達(dá)缺失提示患者預(yù)后不良。

三陰性乳腺癌；CK5/6；PTEN；預(yù)后

三陰性乳腺癌(triple-negative breast cancer，TNBC) 指雌激素受體(estrogen receptor, ER) 、孕激素受體(progesterone receptor, PR) 和HER2 /neu 均無(wú)表達(dá)的乳腺癌, 被認(rèn)為是一種獨(dú)立的臨床病理類型, 以發(fā)病年齡低、細(xì)胞分化差、腫瘤侵襲能力強(qiáng)、預(yù)后較差、缺乏有效靶向治療為主要特征，70%～80%的三陰性乳腺癌是基底細(xì)胞亞型[1-2]。研究提示，一些分子標(biāo)記物的異常表達(dá)可能是三陰性乳腺癌易復(fù)發(fā)的重要原因[1-3]?；准?xì)胞樣乳腺癌通常表達(dá)基底細(xì)胞角蛋白(basaloid cytokeratins)，包括CK5/6，CK14及CK17[4]。CK5/6是識(shí)別基底細(xì)胞樣乳腺癌最重要的分子標(biāo)記物，并且可能是三陰性乳腺癌預(yù)后相關(guān)因素[5]。PTEN是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的抑癌基因，具有雙特異性磷酸酶活性，廣泛作用于細(xì)胞信號(hào)通路中的信號(hào)分子，通過(guò)誘導(dǎo)細(xì)胞周期阻滯和細(xì)胞凋亡抑制腫瘤發(fā)生發(fā)展、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移[6]。本研究通過(guò)免疫組化技術(shù)聯(lián)合檢測(cè)三陰性乳腺癌中CK5/6和PTEN的表達(dá)，分析二者與臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系。

1 材料和方法

1.1 標(biāo)本及來(lái)源

收集遼寧省腫瘤醫(yī)院2006—2012年三陰性乳腺癌手術(shù)標(biāo)本68例及正常乳腺組織22例，患者均為女性，年齡23～79歲(中位年齡48歲)，有ER、PR及HER2 /neu的檢測(cè)結(jié)果，均有完整的臨床資料及術(shù)后隨訪記錄，總生存時(shí)間(overall survival，OS)的計(jì)算是從手術(shù)日期隨訪至2015年5月31日，或由于復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移而死亡的日期為止。術(shù)前均未接受放療及化療。所有標(biāo)本均經(jīng)10%中性福爾馬林固定，石蠟包埋。

1.2 免疫組織化學(xué)染色

取所需病例存檔石蠟塊，由病理學(xué)專家根據(jù)HE切片形態(tài)學(xué)觀察，確定具有代表性的病變部位(避開(kāi)出血、壞死及纖維化區(qū))，制成4μm連續(xù)切片。按EnVision法及抗體說(shuō)明操作(一抗CK5/6：D5/16 B4, Dako；PTEN：6H2.1，Dako)。

1.3 結(jié)果判定

選擇腫瘤細(xì)胞陽(yáng)性染色集中區(qū)域，每張切片計(jì)數(shù)500個(gè)癌細(xì)胞，由兩名病理醫(yī)師雙盲觀測(cè)。CK5/6胞漿表達(dá)視為陽(yáng)性表達(dá)，PTEN胞核或胞漿表達(dá)視為陽(yáng)性表達(dá)。結(jié)果評(píng)定采用Allred score 積分[7]，指腫瘤細(xì)胞陽(yáng)性細(xì)胞百分比計(jì)分(陰性計(jì)為0，<1%計(jì)為1，1%～10%計(jì)為2，10%～1/3計(jì)為3，1/3～2/3 計(jì)為4，>2/3計(jì)為5)與染色強(qiáng)度計(jì)分(無(wú)染色計(jì)為0，弱陽(yáng)性計(jì)為1，中等強(qiáng)度計(jì)為2，強(qiáng)陽(yáng)性計(jì)為3)之和。Allred Score積分≤4為陰性，>4為陽(yáng)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件，CK5/6和PTEN表達(dá)與三陰性乳腺癌臨床病理特征(年齡、腫瘤大小、脈管浸潤(rùn)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移)的關(guān)系(單因素分析)采用χ2檢驗(yàn)及精確概率Fisher檢驗(yàn)。生存分析采用Kaplan-Meier 曲線(Log Rank 檢驗(yàn))。多因素分析用Cox回歸模型。P<0.05表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 CK5/6和PTEN在三陰性乳腺癌組織及正常乳腺組織中的表達(dá)

CK5/6表達(dá)定位于胞漿，呈棕黃色顆粒狀，在三陰性乳腺癌組織中陽(yáng)性率為52.9%(36/68)，正常乳腺組織腺體腔緣側(cè)上皮僅2例表達(dá)CK5/6，陽(yáng)性率為9.1%(2/22)，二者比較差異有顯著性意義(P<0.05)，CK5/6的表達(dá)情況見(jiàn)圖1。PTEN表達(dá)定位于胞核或胞漿，呈棕黃色顆粒狀，在三陰性乳腺癌組織中陽(yáng)性率為55.9%(38/68)，在正常乳腺組織中陽(yáng)性率為90.9%(20/22)，二者比較差異有顯著性意義(P<0.05)，PTEN的表達(dá)情況見(jiàn)圖2。

2.2 CK5/6和PTEN表達(dá)與三陰性乳腺癌臨床病理特征的關(guān)系

CK5/6和PTEN表達(dá)在腫瘤直徑<5cm和≥5cm間，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目<5個(gè)和≥5個(gè)間及是否遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移間比較，差異均有顯著性意義(P<0.05)。見(jiàn)表1。

圖1 CK5/6在三陰性乳腺癌組織及正常乳腺組織中的表達(dá)

圖2 PTEN在三陰性乳腺癌組織及正常乳腺組織中的表達(dá) (×400)

表1 CK5/6和PTEN表達(dá)與三陰性乳腺癌患者臨床病理特征的關(guān)系

2.3 CK5/6和PTEN表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系

68例三陰性乳腺癌病例均具有完整隨訪資料。生存時(shí)間1～96個(gè)月，平均生存時(shí)間(71.6±3.5)個(gè)月，中位生存時(shí)間62個(gè)月。

Cox回歸多因素分析顯示，腫瘤直徑≥5cm、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目≥5個(gè)、有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、CK5/6表達(dá)陽(yáng)性和PTEN表達(dá)缺失均為影響三陰性乳腺癌預(yù)后的危險(xiǎn)因素。見(jiàn)表2。Kaplan-Meier 法(Log Rank 檢驗(yàn)) 顯示CK5/6表達(dá)陽(yáng)性組平均生存時(shí)間(62.8±4.6)個(gè)月，中位生存時(shí)間65個(gè)月；CK5/6表達(dá)陰性組平均生存時(shí)間(80.3±4.4)個(gè)月，中位生存時(shí)間85個(gè)月。PTEN表達(dá)陽(yáng)性組平均生存時(shí)間(74.4±5.0)個(gè)月，中位生存時(shí)間80個(gè)月；PTEN表達(dá)陰性組平均生存時(shí)間(52.9±5.9)個(gè)月，中位生存時(shí)間48個(gè)月。統(tǒng)計(jì)分析表明，CK5/6表達(dá)陽(yáng)性組預(yù)后明顯差于陰性組(P<0.05)；PTEN表達(dá)陰性組預(yù)后明顯差于陽(yáng)性組(P<0.05)。見(jiàn)圖3。

表2 三陰性乳腺癌總生存的多因素分析

圖3 CK5/6和PTEN表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系

3 討 論

有研究表明，10%～15%的乳腺癌患者2年之內(nèi)會(huì)發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移[8]，三陰性乳腺癌的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移能力相對(duì)更強(qiáng)[9]。一些常規(guī)的影響腫瘤患者預(yù)后的臨床病理特征如組織學(xué)分級(jí)等，對(duì)三陰性乳腺癌的預(yù)后判定缺乏統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[10]。70%～80%的三陰性乳腺癌是基底細(xì)胞亞型[1-2]，Korsching 等[11]利用免疫組化技術(shù)檢測(cè)21例基底細(xì)胞樣乳腺癌，發(fā)現(xiàn)其均表達(dá)CK5/6及EGFR。在不同的研究中，由于采用不同的免疫組化評(píng)分系統(tǒng)，CK5/6陽(yáng)性表達(dá)率在24%～72%之間[12]。 本研究中CK5/6陽(yáng)性表達(dá)率為52.9%，與之前研究結(jié)果一致。多個(gè)研究表明，CK5/6陽(yáng)性表達(dá)提示乳腺癌患者預(yù)后不良，它和其他臨床病理特征如腫瘤大小、組織學(xué)分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等一樣，可作為影響乳腺癌預(yù)后的獨(dú)立因素[10，13-14]。本研究中，三陰性乳腺癌CK5/6表達(dá)陽(yáng)性組預(yù)后明顯差于陰性組(P<0.05)，并且可以作為影響三陰性乳腺癌預(yù)后的危險(xiǎn)因素(P<0.05)。

抑癌基因PTEN編碼由403個(gè)氨基酸組成的PTEN蛋白，分子量約為47 kD，具有雙特異性磷酸酶活性, 由氨基末端蛋白酪氨酸磷酸酶催化結(jié)構(gòu)域(PTP)和羧基末端的C2結(jié)構(gòu)域組成，氨基末端有雙特異磷酸酶催化區(qū)的核心基序，能對(duì)酪氨酸和絲氨酸/蘇氨酸殘基脫磷酸化，廣泛作用于細(xì)胞中的信號(hào)分子, 在多種腫瘤中表達(dá)缺失或減少，其在腫瘤發(fā)生過(guò)程中持續(xù)喪失功能被認(rèn)為是細(xì)胞惡變的重要分子事件之一[15]。PTEN是PI3K信號(hào)通路的重要調(diào)節(jié)因子，PTEN功能失調(diào)被認(rèn)為在激活PI3K /Akt及

mTOR途徑過(guò)程中起到關(guān)鍵作用[16]。由于內(nèi)分泌治療及抗HER-2靶向治療對(duì)三陰性乳腺癌無(wú)效，由PTEN功能失調(diào)激活的信號(hào)通路被認(rèn)為是治療三陰性乳腺癌的潛在靶點(diǎn)，相應(yīng)的臨床藥物研究成為該領(lǐng)域熱點(diǎn)。本研究中，三陰性乳腺癌PTEN表達(dá)陰性組預(yù)后明顯差于陽(yáng)性組(P<0.05)，并且可以作為影響三陰性乳腺癌預(yù)后的危險(xiǎn)因素(P<0.05)。惡性腫瘤的發(fā)生要經(jīng)過(guò)一系列基因表達(dá)變化和多因素的共同作用。本研究結(jié)果顯示，CK5/6表達(dá)和PTEN表達(dá)缺失與三陰性乳腺癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。在臨床病理活檢中聯(lián)合檢測(cè)CK5/6和PTEN蛋白表達(dá)，能夠更好地了解三陰性乳腺癌的發(fā)生發(fā)展及生物學(xué)行為， 增加判斷預(yù)后的準(zhǔn)確性，同時(shí)也為進(jìn)一步揭示三陰性乳腺癌發(fā)病機(jī)制、實(shí)現(xiàn)靶向治療提供可能。

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Clinical significance of CK5/6 and PTEN expression in human triple-negative breast cancer

JIANG Bing, HUANG Bo, CAI Cun-wei, LIU Qian, WANG Zheng

(DepartmentofPathology,LiaoningCancerHospital&Institute,Shenyang110042,China)

Objective To investigate the expression of CK5/6 and PTEN in human triple-negative breast cancer and its clinical significance. Methods The expressions of CK5/6 and PTEN in 68 cases of triple-negative breast cancer (TNBC) and 22 cases of normal breast tissue were detected by immunohistochemistry. Results The positive frequency of CK5/6 (52.9%, 36/68) was significantly higher in TNBC than that (9.1%, 2/22) in normal breast tissue (P<0.05). The positive frequency of PTEN (55.9%, 38/68) was significantly lower in TNBC than that (90.9%, 20/22) in normal breast tissue (P<0.05). In tumor size, number of metastatic lymph nodes and distant metastasis, TNBC with CK5/6 positive and PTEN-loss have significantly worse performance (P<0.05). The overall survival was significantly shorter in TNBC cases with CK5/6 positive and PTEN-loss. Conclusion TNBC with CK5/6 positive and PTEN-loss could be related with lymph node metastasis and distant metastasis and the worse prognosis.

triple-negative breast cancer; CK5/6; PTEN; prognosis

10.11724/jdmu.2015.06.03

遼寧省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(20102122)

蔣 冰(1980-), 女，遼寧沈陽(yáng)人，主治醫(yī)師。E-mail： jiang_yunjia@163.com

黃 波，教授。E-mail：huangbo197033@163.com

R737.9

A

1671-7295(2015)06-0529-04

蔣冰，黃波，蔡存?zhèn)ィ? 三陰性乳腺癌中CK5/6和PTEN的表達(dá)及其臨床病理意義[J].大連醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2015,37(6)：529-532,536.

2015-07-10；

2015-11-16)