周歡群， 周 文， 陸 杉

(廣東省中醫(yī)院大學(xué)城醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)科，廣東廣州510000)

生活習(xí)慣、環(huán)境等因素的變化導(dǎo)致不育癥患者數(shù)量劇增，而男性不育比例持續(xù)升高，精子質(zhì)量的下降是導(dǎo)致男性不育的直接因素［1］.支原體是一種介于細(xì)菌與病毒之間細(xì)小的原核微生物，常引起生殖道炎癥的發(fā)生，而解尿支原體是一種能夠通過(guò)性傳播的微小病原體，通過(guò)感染男性生殖道及附屬性腺并誘發(fā)炎癥，導(dǎo)致男性不育的發(fā)生［2－3］.據(jù)報(bào)道UU感染后男性精液質(zhì)量變化，包括精液體積、精子密度、活力、正常形態(tài)等水平的降低［4－8］.本研究主要研究在UU感染的男性不育患者中，精液常規(guī)參數(shù)、頂體酶、精子表面結(jié)合抗體水平及精漿彈性蛋白酶水平的變化，分析比較UU感染與精子運(yùn)動(dòng)、精子膜完整性、頂體反應(yīng)潛能、關(guān)鍵性酶分泌內(nèi)環(huán)境及局部免疫微環(huán)境的關(guān)系，綜合探討UU感染與男性不育相關(guān)性.

1 資料與方法

1.1 資料

(1)研究對(duì)象 廣東省中醫(yī)院大學(xué)城醫(yī)院門(mén)診就診男性不育患者中選取UU陽(yáng)性46例，陰性97例，年齡(19～48)歲，平均年齡(31.67±4.99)歲.患者性生活正常，未采取任何避孕措施1年以上未孕，且未發(fā)現(xiàn)明顯睪丸、附睪、輸精管等異常，未見(jiàn)器質(zhì)性改變.

(2)樣本采集 取精前禁欲2～7 d，生理鹽水清洗手部及陰莖，通過(guò)手淫法取精，全部射入無(wú)菌無(wú)毒精杯，迅速放入37℃培養(yǎng)箱中，待精液完全液化后觀察.

1.2 方法

(1)計(jì)算機(jī)精液輔助分析 采用西班牙CASA系統(tǒng)進(jìn)行常規(guī)精液參數(shù)分析，精子活力分為前向運(yùn)動(dòng)、非前向運(yùn)動(dòng)和不動(dòng)3級(jí)，記錄每個(gè)患者的前向運(yùn)動(dòng)率及總活率.

(2)精子形態(tài)觀察 拉薄技術(shù)制作適當(dāng)厚度精子涂片，采用珠海貝索巴氏染色試劑盒進(jìn)行染色.按文獻(xiàn)［9］，計(jì)數(shù)200條精子，統(tǒng)計(jì)正常形態(tài)、頭部畸形、中段畸形及尾部畸形精子比例，并計(jì)算精子畸形指數(shù)與畸形精子指數(shù)，精子畸形指數(shù)(SDI)=缺陷總數(shù)/所數(shù)精子總數(shù)，畸形精子指數(shù)(TZI)=缺陷總數(shù)/缺陷精子數(shù).

(3)精子表面抗精子結(jié)合抗體(AsAb)檢測(cè)采用南京欣迪抗精子結(jié)合抗體(MAR)檢測(cè)試劑盒進(jìn)行檢測(cè)，參照WHO5版標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)合率R=(粘附于膠乳顆粒的活動(dòng)精子數(shù)/計(jì)數(shù)的總活動(dòng)精子數(shù))×100%，R＞50%為AsAb陽(yáng)性.

(4)精子頂體酶水平檢測(cè) 采用深圳博瑞德精子頂體酶活性檢測(cè)試劑盒進(jìn)行檢測(cè)，頂體酶活性小于58.5 μIU/106精子為異常.

(5)精漿彈性蛋白酶 采用深圳康華精漿彈性蛋白酶定量測(cè)定試劑盒檢測(cè)，精漿彈性蛋白酶質(zhì)量濃度測(cè)定大于1 000 ng/mL示泌尿生殖道確診感染.

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)分析數(shù)據(jù)，分別采用χ2檢驗(yàn)和t檢驗(yàn)對(duì)比例(%)數(shù)據(jù)和(均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差)數(shù)據(jù)進(jìn)行檢測(cè)，P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異.

2 結(jié)果

2.1 UU感染對(duì)精子活力及存活率的影響

對(duì)兩組患者精子活力進(jìn)行分析，結(jié)果顯示，觀察組精子前向運(yùn)動(dòng)率、總活力及存活率均低于對(duì)照組，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05，表1)

表1 UU感染對(duì)精子活力及存活率的影響Table 1 Effects of UU infection on sperm motility and viability

2.2 UU感染對(duì)精子形態(tài)的影響

標(biāo)準(zhǔn)巴氏染色法觀察精子形態(tài)，參照WHO第5版分類(lèi)統(tǒng)計(jì)精子畸形情況.結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，觀察組精子正常形態(tài)率降低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05);觀察組精子頭、中、尾部畸形率，精子畸形指數(shù)及畸形精子指數(shù)均與對(duì)照組相似，且無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P ＞0.05，表2)

2.3 UU感染對(duì)精子頂體酶活性的影響

與對(duì)照組相比，觀察組精子頂體酶活性降低，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05);觀察組頂體酶異常率顯著升高(P＜0.05，表3)

表2 UU感染對(duì)精子形態(tài)的影響Table 2 Effects of UU infection on sperm morphology

表3 UU感染對(duì)精子頂體酶活性的影響Table 3 Effects of UU infection on acrosin activity

2.4 UU感染對(duì)精液抗精子結(jié)合抗體水平的影響

與對(duì)照組相比，觀察組精子MAR試驗(yàn)結(jié)合率(R)較高，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;在觀察組22例、對(duì)照組99例患者中AsAb陽(yáng)性患者(R＞50%)均為0例，AsAb陽(yáng)性率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05，表4)

2.5 UU感染對(duì)精漿彈性蛋白酶水平的影響

與對(duì)照比較，觀察組患者精漿彈性蛋白酶水平無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05，表5).泌尿生殖道確診性感染(精漿彈性蛋白酶質(zhì)量濃度＞1 000 ng/mL)率分別為觀察組7/22、對(duì)照組6/27，觀察組高于對(duì)照組，經(jīng)卡方檢驗(yàn)P=0.054，兩組無(wú)顯著差異.

表4 UU感染對(duì)對(duì)精液抗精子結(jié)合抗體水平的影響Table 4 Effects of UU infection on AsAb level

表5 UU感染對(duì)精漿彈性蛋白酶水平的影響Table 5 Effects of UU infection on seminal plasma elastase

3 討論

生殖道感染是引發(fā)男性不育的重要原因，而UU是目前誘發(fā)生殖道感染的主要因素.研究指出，UU是一種介于細(xì)菌與病毒之間的微生物，同時(shí)也是非淋性尿道炎的病原體之一［10］.UU能夠附著在精子的表面，其頸部形態(tài)發(fā)生改變，尾部出現(xiàn)卷曲，形態(tài)學(xué)上的改變使精子的活力、運(yùn)動(dòng)能力降低以及精子畸形率上升，影響精卵結(jié)合，從而引發(fā)不育［11］.

精子活力及存活率間接反映精子受精能力、膜通透性及轉(zhuǎn)運(yùn)功能.本研究結(jié)果顯示，UU陽(yáng)性患者精子前向運(yùn)動(dòng)率、總活力及存活率較對(duì)照組低，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異.可能與UU感染頻率及時(shí)間、患者治療史、當(dāng)次取精狀態(tài)及病例數(shù)相關(guān)，結(jié)合既往的研究結(jié)論［12－16］及本次結(jié)果統(tǒng)計(jì)的趨勢(shì)，精子活力應(yīng)該與UU感染聯(lián)系密切.

精子形態(tài)學(xué)觀察是精液分析中重要指標(biāo)，精子正常形態(tài)低于4%可能會(huì)影響精子體外受精率［9］;有報(bào)道UU感染會(huì)導(dǎo)致精子正常形態(tài)率降低，從而出現(xiàn)不同程度畸形精子癥［17－19］，引起男性不育.本研究結(jié)果顯示，觀察組正常精子形態(tài)率低于對(duì)照組，有顯著性差異，表明UU感染能夠影響精子形態(tài).另外，精子畸形指數(shù)和畸形精子指數(shù)兩組之間并無(wú)明顯差異，提示UU感染與精子總畸形出現(xiàn)頻率及各類(lèi)畸形出現(xiàn)頻率之間的關(guān)系尚需進(jìn)一步的研究.

精卵結(jié)合是受精發(fā)生的前提條件，需要精子的頂體反應(yīng)，精子頂體會(huì)釋放精子頂體酶和透明質(zhì)酸酶，溶解透明帶，促使精子穿過(guò)透明帶并完成受精過(guò)程.精子頂體酶在此過(guò)程中發(fā)揮重要的作用.有研究指出，UU感染可引起精子頂體膜破損，影響頂體酶失活［20－21］.本研究中觀察組精子頂體酶活性低于對(duì)照組，但兩組之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，與部分研究者的結(jié)論相似，推測(cè)UU感染可能只引起精子質(zhì)膜的破損，而對(duì)頂體本身結(jié)構(gòu)并沒(méi)有損傷.

監(jiān)測(cè)血液及局部的抗精子抗體水平相是診斷免疫性不育的重要指標(biāo)，其中精子表面結(jié)合抗體水平較血液更有臨床參考價(jià)值，常采用混合球蛋白抗精子抗體凝集實(shí)驗(yàn)來(lái)檢測(cè)精子表面AsAb水平.報(bào)道指出，UU感染可引發(fā)AsAb的發(fā)生率上升，其誘發(fā)機(jī)制是通過(guò)進(jìn)入前列腺管或刺激機(jī)體產(chǎn)生UU抗體，引發(fā)和精子膜蛋白的交叉反應(yīng)［22－23］.本結(jié)果顯示，觀察組AsAb陽(yáng)性率稍高于對(duì)照組，但沒(méi)有顯著性差異，表明UU具有引起患者AsAb發(fā)生概率升高的可能性，但其不是誘發(fā)不育的主要原因.精漿彈性蛋白酶水平間接反應(yīng)泌尿生殖道感染情況，研究發(fā)現(xiàn)UU感染常引起附屬性腺炎癥發(fā)生，從而導(dǎo)致精漿彈性蛋白酶水平升高，精漿彈性蛋白酶水平測(cè)定常作為臨床診斷男性泌尿生殖道感染的重要參考指標(biāo)［24－25］.本研究結(jié)果顯示兩組彈性蛋白酶水平無(wú)顯著性差異，而觀察組確診感染比率較對(duì)照組高;UU感染可導(dǎo)致精子正常形態(tài)率降低及頂體酶異常率升高，從而影響不育;UU對(duì)精子活力、存活率、抗精子結(jié)合抗體水平、頂體酶及精漿彈性蛋白酶水平的影響尚需進(jìn)一步研究，同時(shí)應(yīng)當(dāng)針對(duì)UU重復(fù)感染及合并感染患者精液質(zhì)量進(jìn)行篩查.

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