潘文，李明明，王曉萍

甘肅省中醫(yī)藥研究院，甘肅 蘭州 730050

◆實(shí)驗(yàn)研究論著◆

補(bǔ)腎化瘀方對(duì)多囊卵巢綜合征伴胰島素抵抗大鼠激素水平及血糖的影響

潘文，李明明，王曉萍

甘肅省中醫(yī)藥研究院，甘肅 蘭州 730050

目的：研究補(bǔ)腎化瘀方加減對(duì)多囊卵巢綜合征（PCOS）伴胰島素抵抗（IR）大鼠性激素水平及血糖、胰島素的影響。方法：雌性SD大鼠隨機(jī)分成6組，每組大鼠20只。采用芳香化酶抑制劑-來(lái)曲唑誘導(dǎo)建立PCOS伴IR大鼠病理模型；模型組：予1mL/100 g生理鹽水灌胃；中藥高劑量組：造模結(jié)束后給予補(bǔ)腎化瘀方2.2 g/mL中藥煎劑1mL/100 g灌胃；中藥中劑量組：造模結(jié)束后給予補(bǔ)腎化瘀方1.1 g/mL中藥煎劑1mL/100 g灌胃；中藥低劑量組給予補(bǔ)腎化瘀方0.55 g/mL中藥煎劑1mL/100 g灌胃；二甲雙胍組：造模結(jié)束后，給予16mg/mL二甲雙胍溶液1mL/100 g灌胃?？瞻讓?duì)照組：未造膜大鼠予1mL/100 g生理鹽水灌胃。38天后光鏡觀察卵巢大體形態(tài)變化，卵泡發(fā)育情況，測(cè)定血清卵泡刺激素（FSH）、雄激素（T）、雌二醇（E2）、促黃體生成素（LH）水平、空腹血糖（FPG）、空腹胰島素（FINS）及性激素結(jié)合球蛋白（SHBG），并計(jì)算胰島素抵抗指數(shù)（HOMA-IR）。結(jié)果：中藥中劑量組能顯著降低大鼠血清中T、LH及E2水平，增加SHBG水平（P＜0.05）。結(jié)論：補(bǔ)腎化瘀方對(duì)芳香化酶抑制劑-來(lái)曲唑建立的PCOS伴IR大鼠有一定的治療作用，可改善激素水平及血糖、胰島素的異常。

多囊卵巢綜合征（PCOS）；胰島素抵抗（IR）；補(bǔ)腎化瘀方；激素水平

多囊卵巢綜合征（Polycystic ovarian syndrom e，PCOS）是育齡期婦女最常見的生殖功能障礙及糖脂代謝異常并存的內(nèi)分泌紊亂綜合征，在無(wú)排卵女性不孕中占70%，在育齡期女性中患病率為5%～10%［1］。目前尚無(wú)治療該綜合征的特效藥。腎虛血瘀是PCOS發(fā)病的基本病機(jī)，PCOS患者多見腎虛血瘀證，補(bǔ)腎祛瘀方為臨床經(jīng)驗(yàn)方，使用補(bǔ)腎活血方治療療效確切［2］。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)研究補(bǔ)腎化瘀方對(duì)PCOS伴胰島素抵抗（IR）激素水平及血糖、胰島素的影響，評(píng)估和驗(yàn)證補(bǔ)腎化瘀方對(duì)PCOS伴IR的治療作用，深入探討其作用機(jī)理。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物分組及處理 動(dòng)物：6周齡SD清潔級(jí)雌性大鼠120只（平均體重為180g），由甘肅中醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，批號(hào)：SCXK（甘）2000-0001-62001000000012。PCOS大鼠模型的建立：使用芳香化酶抑制劑-來(lái)曲唑建立PCOS病理模型，于大鼠6周齡時(shí)每天灌胃服用來(lái)曲唑1m g/kg劑量，溶于1%羧甲基纖維素（CMC）中，連續(xù)定時(shí)灌服24天，每天用顯微鏡觀察陰道涂片。造模成功后將大鼠隨機(jī)分成5組，每組大鼠20只。模型組：予1m L/100 g生理鹽水灌胃；中藥高劑量組：造模結(jié)束后給予補(bǔ)腎祛瘀方2.2 g/m L中藥煎劑1 m L/100 g灌胃；中藥中劑量組：造模結(jié)束后給予補(bǔ)腎祛瘀方1.1 g/m L中藥煎劑1m L/100 g灌胃；中藥低劑量組給予補(bǔ)腎祛瘀方0.55 g/m L中藥煎劑1 m L/100 g灌胃；二甲雙胍組：造模結(jié)束后，給予16m g/m L二甲雙胍溶液1m L/100 g灌胃。空白對(duì)照組：未造模同齡大鼠予1m L/100 g生理鹽水灌胃。38天后在最后1次用藥24 h、并禁食12h后血糖儀測(cè)定空腹血糖（FPG）水平，操作按說(shuō)明書要求進(jìn)行。后于腹腔注入0.24 m ol/L水合氯醛（400m g/kg）麻醉后取腹主動(dòng)脈血，取血后用生理鹽水沖洗卵巢至滲液清亮，摘取雙側(cè)卵巢，在解剖顯微鏡下去除卵巢表面的脂肪組織，觀察卵巢大體解剖情況并分別測(cè)量雙側(cè)卵巢的長(zhǎng)、寬、高，稱雙側(cè)卵巢質(zhì)量，用40 g/L多聚甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋。血液標(biāo)本經(jīng)3000 r/m in離心10m in后，收集血清，-20℃保存，酶聯(lián)免疫法測(cè)定血清卵泡刺激素

（FSH）、雄激素（T）、雌二醇（E2）、促黃體生成素（LH）水平、空腹胰島素（FINS）及性激素結(jié)合球蛋白（SHBG），計(jì)算胰島素抵抗指數(shù)（HOMA-IR）=FPG×FINS/22.5。

1.2 藥品與試劑 來(lái)曲唑：大連美侖生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：MB1137。臨用時(shí)用1%羧甲基纖維素溶液配成所需濃度，羧甲基纖維素鈉：北京生物試劑公司生產(chǎn)，批號(hào)：Sigm aC4888；補(bǔ)腎祛瘀方由女貞子、墨旱蓮、山茱萸、菟絲子、赤芍、川芎、丹參、紅花、桃仁等中藥組成，由甘肅省中醫(yī)院制劑室按比例制備，配成高、中、低3種劑量。FSH、T、E2、LH、FINS及SHBG測(cè)定試劑盒，均購(gòu)自上海豐翔生物技術(shù)有限公司，批號(hào)為：20140425；FPG檢測(cè)使用ACCU-CHEK Active血糖儀，購(gòu)自德國(guó)Roche Diagnostics Gm bH公司。

1.3 儀器 BS-124S型電子分析天平（賽多利斯科學(xué)儀器北京有限公司）、EPCOH酶標(biāo)儀（基因有限公司）。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行單因素方差分析檢驗(yàn)，數(shù)據(jù)以（±s）表示。

2 結(jié)果

2.1 光鏡結(jié)果 見圖1、圖2?？瞻讓?duì)照組大鼠局部形態(tài)正常，有發(fā)育成熟的卵泡，顆粒細(xì)胞呈多層，形態(tài)完整，排列整齊，卵泡膜細(xì)胞呈梭形排列，泡膜細(xì)胞及間質(zhì)細(xì)胞無(wú)明顯增生現(xiàn)象；模型組見卵泡囊性擴(kuò)張，少量的生長(zhǎng)卵泡黃體、顆粒細(xì)胞層數(shù)減少，僅為2～3層，排列疏松，泡膜細(xì)胞層增生。中藥中劑量組和中藥低劑量組鏡下見顆粒細(xì)胞層數(shù)增加，約為5～6層，形態(tài)完整，排列整齊，卵泡膜細(xì)胞呈梭形排列，泡膜細(xì)胞層變薄，黃體組織數(shù)量較模型組增多，擴(kuò)張卵泡較模型組明顯減少；中藥高劑量組及二甲雙胍組鏡下見囊性卵泡數(shù)量及閉鎖卵泡均有不同程度的減少，黃體增多。

圖1 模型組光鏡結(jié)果（×400）

圖2 中藥中劑量組光鏡結(jié)果（×400）

2.2 各組大鼠性激素變化比較 見表1。模型組PCOS大鼠LH、FSH、E2及T均顯著高于空白對(duì)照組（P＜0.05），SHBG水平則降低；二甲雙胍組能明顯改善LH、FSH及T水平（P＜0.05），但對(duì)E2及SHBG無(wú)明顯改善（P＞0.05）；中藥高劑量組對(duì)FSH、T及SHBG有改善（P＜0.05）；中藥中劑量組及中藥低劑量組均能顯著改善PCOS大鼠的LH、FSH及E2水平（P＜0.05），中藥中劑量組還對(duì)SHBG有改善，但對(duì)T無(wú)改善，中藥低劑量組則相反；總之，以中藥中劑量組及中藥低劑量組對(duì)PCOS大鼠激素水平的改變最為明顯。

表1 各組大鼠血清性激素變化比較（±s）

表1 各組大鼠血清性激素變化比較（±s）

與模型組比較，①P＜0.05；與空白對(duì)照組比較，②P＜0.05

組別空白對(duì)照組模型組二甲雙胍組中藥高劑量組中藥中劑量組中藥低劑量組樣本數(shù)19 20 19 20 20 20 LH（mIU/mL）10.95±2.29①20.43±5.32 16.32±4.06①16.82±5.28 15.72±6.02①14.57±5.09①②FSH（mIU/mL）4.16±1.14①6.43±2.73 4.89±1.85①②4.84±1.92①②4.62±1.92①②4.97±1.94①②E2（pg/mL）20.69±1.57①27.19±8.39 24.05±6.26②22.53±5.93②20.14±3.76①②21.83±5.55①②T（ng/dL）4.49±1.16①9.46±2.82 6.87±1.89①6.97±2.52①8.36±2.28②6.42±2.23①SHBG（nmol/L）54.86±6.75①43.27±6.98 47.80±7.23②52.71±11.91①②51.63±12.02①②49.69±11.72②

2.3 各組大鼠FPG、FINS及HOMA-IR變化比較 見表2。模型組FPG、FINS及HOMA-IR均分別顯著高于空白對(duì)照組（P＜0.05）；二甲雙胍組及中藥高劑量組均能明顯改善PCOS 伴IR大鼠的FPG（P＜0.05），但對(duì)FINS及HOMA-IR無(wú)明顯改善（P＞0.05）；中藥中劑量組及中藥低劑量組均能顯著改善PCOS伴IR大鼠的FPG、FINS及HOMA-IR水平（P＜0.05），以中藥中劑量組最為明顯。

表2 各組大鼠FPG、FINS及HOMA-IR變化比較（±s）

表2 各組大鼠FPG、FINS及HOMA-IR變化比較（±s）

與模型組比較，①P＜0.05；與空白對(duì)照組比較，②P＜0.05

組別空白對(duì)照組模型組二甲雙胍組中藥高劑量組中藥中劑量組中藥低劑量組樣本數(shù)19 20 19 20 20 20 FPG（mmol/L）4.78±0.36①5.65±0.37 5.23±0.49①5.21±0.54①5.08±0.47①②5.16±0.52①②FINS（μIu/mL）16.93±4.11①23.83±5.80 26.35±7.24 24.18±4.96 19.64±3.58①②21.61±5.93①②HOMA-IR 3.56±0.79①5.74±1.00 5.54±1.03 5.60±1.34 4.26±0.56①②4.50±0.94①

3 討論

PCOS的典型臨床特征為持續(xù)性無(wú)排卵和高雄激素血癥。而IR或高胰島素血癥導(dǎo)致的高雄激素血癥為PCOS患者卵巢功能異常的主要發(fā)病機(jī)制之一［3］。IR和代償性高胰島素血癥已被認(rèn)為是PCOS患者糖代謝異常及生殖功能障礙的病理基礎(chǔ)，改善IR有利于卵泡的發(fā)育和排卵功能的恢復(fù)，這不僅為PCOS伴IR患者的治療提供理論依據(jù)，也為PCOS的治療開辟了新的領(lǐng)域［4］。

補(bǔ)腎化瘀方由女貞子、墨旱蓮、山茱萸、菟絲子、赤芍、川芎、丹參、紅花、桃仁等藥物組成，不僅可以促進(jìn)卵泡發(fā)育成熟及排出，而且可逆轉(zhuǎn)卵巢的多囊樣改變。方中二至丸補(bǔ)益肝腎，滋陰止血祛瘀；菟絲子的主要有效成分菟絲子黃酮，具有雌激素樣作用，可促進(jìn)下丘腦-垂體-性腺軸功能，提高垂體對(duì)促性腺激素釋放激素的反應(yīng)性，促進(jìn)卵泡發(fā)育，提高應(yīng)激E2、黃體酮的水平，同時(shí)亦能提高垂體LH以及下丘腦β-

內(nèi)啡肽的水平；茱萸水提物、醇提物皆有不同程度降血糖作用，升高進(jìn)食后血胰島素水平；川芎可抗血小板聚集、擴(kuò)張小動(dòng)脈、改善微循環(huán)；桃仁中含苦杏仁苷及揮發(fā)油，對(duì)子宮平滑肌有興奮作用，可使其收縮力加強(qiáng)，二者調(diào)節(jié)卵巢酶系統(tǒng)作用于卵巢包膜，通過(guò)活血化瘀作用，使增大的卵巢恢復(fù)正常，還有降低血脂作用；赤芍能擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈、增加冠脈血流量；赤芍與甘草配伍應(yīng)用，可使SHBG合成增加，使游離睪酮減少，致血睪酮活性降低。補(bǔ)腎中藥被認(rèn)為具有類激素樣作用，可對(duì)女性性腺軸雙向調(diào)節(jié)；補(bǔ)腎基礎(chǔ)上加活血藥物又能改善卵巢局部的血液循環(huán)，增加卵巢血流量，從而促進(jìn)卵泡發(fā)育、誘發(fā)排卵及促黃體形成。本研究結(jié)果顯示，補(bǔ)腎化瘀方能使PCOS 伴IR大鼠T、LH、INS明顯下降，SHBG升高，與前研究一致，且該方可以使PCOS大鼠的卵巢黃體組織數(shù)量增加，卵巢顆粒細(xì)胞層增厚，卵泡膜細(xì)胞變薄，減少囊狀卵泡量，改善PCOS大鼠的卵巢形態(tài)學(xué)異常，從而調(diào)整其激素水平［5］。本研究提示補(bǔ)腎化瘀方對(duì)PCOS伴IR有一定的治療作用，為補(bǔ)腎祛瘀方治療PCOS伴IR提供一定的科學(xué)依據(jù)，但其確切的機(jī)理仍待進(jìn)一步研究。

［1］彭敏，鄭少珍，陳燕楨.媽富隆聯(lián)合羅格列酮治療多囊卵巢綜合征伴不孕的臨床療效觀察［J］.中國(guó)實(shí)用醫(yī)刊，2012，39（12）：24-26.

［2］馬曉玲.補(bǔ)腎化瘀調(diào)周法治療高原地區(qū)多囊卵巢綜合征120例療效觀察［J］.中國(guó)藥房，2010，24（3）：12-14.

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［5］楊正望，張?jiān)?，文?補(bǔ)腎化瘀方對(duì)PCOS大鼠卵巢顆粒細(xì)胞FSHR、LHR蛋白表達(dá)的影響［J］.湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2009，29（2）：17-19.

（責(zé)任編輯：駱歡歡）

R711.75

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0256-7415（2015）12-0222-03

10.13457/j.cnki.jncm.2015.12.100

2015-05-11

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（81360604）；甘肅省技術(shù)研究與開發(fā)專項(xiàng)計(jì)劃項(xiàng)目（1305TCYA029）

潘文（1963-），女，碩士研究生導(dǎo)師，主任醫(yī)師，研究方向：不孕癥的中西醫(yī)結(jié)合治療。