余亮彬，石浪濤

（黃岡職業(yè)技術(shù)學(xué)院 生物與制藥工程學(xué)院，湖北 黃岡 438002）

黃岡市豬瘟流行病學(xué)調(diào)查與分析

余亮彬，石浪濤

（黃岡職業(yè)技術(shù)學(xué)院 生物與制藥工程學(xué)院，湖北 黃岡 438002）

為全面客觀了解湖北省黃岡市豬瘟（CSF）流行現(xiàn)狀，通過實地調(diào)查和實驗室ELISA方法檢測，對黃岡市432家豬場進行豬瘟（CSF）感染兩年跟蹤檢測，其結(jié)果為：豬場感染率為25.48% （2014年）和23.51%（2015年）；豬群CSFV陽性率為2.42%（2014年）和1.93%（2015年）；不同豬群CSFV抗原陽性率順序為育成豬＞保育豬＞育肥豬＞哺乳仔豬＞母豬＞種公豬。

豬瘟；流行病學(xué)調(diào)查；黃岡市

豬瘟（CSF）是由黃病毒科瘟病毒屬的豬瘟病毒（CSFV）引起的高度接觸性、出血性豬傳染病，是豬群中最嚴重的傳染病之一，每年對全球養(yǎng)豬業(yè)造成巨大經(jīng)濟損失。世界動物衛(wèi)生組織（OIE） 將其列為A類16種法定傳染病之一，中國將其列為一類動物傳染病。CSF在世界上養(yǎng)豬國家都有不同程度的流行，近年來一些原本宣布消滅豬瘟的國家（英國、比利時、荷蘭、德國等）又相繼暴發(fā)豬瘟［1］［5］。我國于1956年提出消滅CSF規(guī)劃，雖然有效地控制了CSF的急性發(fā)生和大流行，但因病毒毒株變異、野毒的無規(guī)律性的存在和水平間傳播以及豬場環(huán)境和生產(chǎn)管理技術(shù)的不規(guī)范，CSF仍在我國不間斷地流行［2］。當(dāng)前，我國豬瘟的流行和發(fā)病特點與以前相比已發(fā)生了較大的變化：臨床上出現(xiàn)典型的豬瘟較少取而代之的是非典型及溫和型、亞臨床或無癥狀持續(xù)感染型及免疫失敗現(xiàn)象，原來大面積的爆發(fā)與流行也不多見，如今多呈散發(fā)及小范圍流行，發(fā)病日齡由原來的育成豬轉(zhuǎn)向保育豬和仔豬［3］［6］。

為全面客觀了解湖北省黃岡市豬瘟（CSF）流行現(xiàn)狀，從2014年1月起至2015年12月止，本試驗對黃岡市11個縣市區(qū)432家豬場進行跟蹤實地調(diào)查，并運用ELISA方法進行豬瘟血清流行病學(xué)調(diào)查，通過實地調(diào)查和實驗室檢測結(jié)果，全面分析了黃岡市CSF的流行規(guī)律，為當(dāng)?shù)刂贫–SF綜合防控措施提供科學(xué)依據(jù)和理論參考。

1 豬場抽樣

為保障樣品來源的代表性，按照統(tǒng)計抽樣要求對黃岡市所轄11個縣市存欄200頭以上規(guī)模豬場進行隨機抽樣。每月在各縣市隨機選取3個豬場作為調(diào)查豬場，為保障調(diào)查豬場在各縣分布相對均勻，要求每豬場之間距離30公里以上，并盡量呈三角形分布。

調(diào)查時間： 2014年1月-2015年12月

2 主要調(diào)查內(nèi)容

一是對豬場基本情況進行調(diào)查，以實地調(diào)查為主，主要內(nèi)容有：

（1）豬場環(huán)境狀況調(diào)查：調(diào)查豬場的地理位置、周邊環(huán)境、糞污處理、欄舍設(shè)備及衛(wèi)生狀況等。

（2）豬場飼養(yǎng)管理情況調(diào)查：調(diào)查飼養(yǎng)規(guī)模、豬群結(jié)構(gòu)、管理水平（精細化管理還是粗放式管理）、管理制度及執(zhí)行情況、飼料及飲水品質(zhì)等。

（3）豬場獸醫(yī)保障情況調(diào)查：主要調(diào)查豬場免疫計劃及執(zhí)行情況、發(fā)病及治療情況、獸醫(yī)場所及人員配備與技術(shù)力量等。

二是CSF流行病學(xué)調(diào)查，主要內(nèi)容有：

（1）豬場感染率調(diào)查；（2）CSFV抗原檢測

3 材料與方法

3.1 材料

3.1.1 全血及血清樣品

2014年1月-2015年12月期間，每月不間斷從各調(diào)查豬場采集不同階段無臨床癥狀豬群的全血血清樣品，并收集疑似病料組織，記錄相關(guān)信息并編號后置于4℃保存?zhèn)溆谩?014年全年，從361家調(diào)研豬場采集全血樣品7642份，血清樣品4236份；2015年全年，從336家調(diào)研豬場采集全血樣品7468份，血清樣品4803份。

3.1.2 病料組織

2014年收集疑似CSF病料447份，2015年收集疑似CSF病料397份，無菌采集上述調(diào)研豬場疑似感染CSF病豬腎臟、脾臟、淋巴節(jié)、扁桃體等組織，觀察病理變化，記錄相關(guān)信息并編號4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

3.1.3 診斷試劑

豬瘟抗原檢測試劑盒（北京世紀元亨公司），包括：豬瘟抗原包被的酶標板，辣根過氧化物酶標記的豬瘟病毒單克隆抗體、濃縮的清洗液（10）、樣品稀釋液、標準陰性對照、標準陽性對照、終止液、底物溶液。

Trizol Reagent、 Rnase Inhibitor、 dNTP、Taq酶、M-MLV （自大連寶生物工程公司）；瓊脂糖（ Sigma 公司）；其他常規(guī)試劑均為分析純。

3.1.4主要儀器：

Labsystems Wellscan Mk3酶標儀（法國梅里埃公司）；

TGL-16高速冷凍離心機（上海安亭科學(xué)儀器公司）；

HH-4 數(shù)顯恒溫水浴鍋（國華電器有限公司）；ECP3000 三恒多用電泳儀（美國 Bio-raid 公司）；

DY C3113型電泳槽（美國Bio-raid公司）；

PCR 儀（美國Bio-raid公司）；

ZS-2200 型凝膠成像系統(tǒng)（美國Bio-raid公司）。

3.2 方法

3.2.1 實地調(diào)查法

實地調(diào)查目的是為了全面、準確了解調(diào)查對象（豬場）的基本情況，依據(jù)事先制定的調(diào)查設(shè)計方案確定好調(diào)查工作計劃，然后通過“實地察看、填表記錄、血樣及病料采集”等方式完成調(diào)查。

3.2.2 CSFV抗原檢測

CSFV抗原檢測用豬瘟ELISA抗原檢測試劑盒（北京世紀元亨公司），操作步驟嚴格按試劑盒說明書進行。

使用前，現(xiàn)將所有試劑解凍至室溫20℃左右，將試劑輕輕搖旋混合均勻。

結(jié)果判定［4］［7］：

被檢樣品的矯正吸光值≥0.3，則為陽性；

被檢樣品的矯正吸光值＜0.2，則為陰性；

被檢樣品的矯正吸光值介于0.2-0.3，則為可疑。

4 結(jié)果與分析

4.1 實地調(diào)查結(jié)果

2014-2015兩年間，調(diào)查范圍覆蓋黃岡市管轄11個縣市（黃州、武穴、麻城、紅安、羅田、英山、浠水、蘄春、黃梅、團風(fēng)、龍感湖）共計432家豬場（2014年361家，2015年336家，有重復(fù)）。對這些豬場的豬群品種、養(yǎng)殖規(guī)模、生產(chǎn)性能、日常管理、免疫計劃、疾病死亡、用藥治療等情況進行實地調(diào)查。

2014-2015兩年間，發(fā)放《豬場流行病學(xué)調(diào)查表》778份，收回713份，無效調(diào)查表16份，有效調(diào)查表697份。通過統(tǒng)計697份《豬場流行病學(xué)調(diào)查表》，得知如下信息：697家豬場中，外三元雜交品種豬場452家（占64.85%），內(nèi)三元雜交品種豬場207家（占29.70%），二元雜交豬品種豬場17家（占2.44%），長白豬品種豬場13家（占1.86%），本地太湖豬品種豬場8家（占1.15%）。

697家豬場中存欄規(guī)模200-20000頭不等，其中，存欄500頭以下93家，500-1000頭215家，1000-2000頭286家，2000頭以上103家。

各豬場均有自己的免疫計劃，并嚴格執(zhí)行。生產(chǎn)管理秩序相對規(guī)范，少數(shù)廠家門禁、消毒措施不嚴。病毒性疾病主要依賴疫苗，細菌性疾病用藥物控制。

疾病發(fā)生及死亡情況各豬場表現(xiàn)不一，由于調(diào)研目的的需要，對平時收集CSF疑似病料，作現(xiàn)場剖檢觀察并記錄病理變化。典型病例的病理變化見圖3-1、圖3-2、圖3-3、圖3-4。

圖1　耳根出血點

圖2　腎臟、膀胱針點狀出血點

圖3　回盲瓣紐扣狀潰瘍

圖4　頜下淋巴結(jié)腫脹出血

通過對疑似CSF病豬的體表觀察和剖檢，其主要病癥表現(xiàn)為：體溫升高、犬坐式呼吸、嘔吐拉稀，初期皮膚出血，后期四肢內(nèi)側(cè)、腹下、耳根、鼻端出現(xiàn)紫紺；剖檢其病理變化為：喉頭、腸粘膜、胃底膜、腎臟、膀胱針尖狀出血，腸系膜淋巴結(jié)、頜下淋巴結(jié)水脹、出血、大理石樣變，回盲瓣紐扣狀潰瘍，脾臟邊緣出血梗死。

4.2 豬場感染CSFV檢測結(jié)果

2014年，調(diào)查全市11個縣市361家豬場，其中檢測到CSFV陽性豬場92家，全市豬場平均陽性率為25.48%；2015年，在全市范圍內(nèi)共計調(diào)查336家豬場，其中檢測到CSFV陽性豬場79家，全市豬場平均陽性率為23.51%，兩年間黃岡境內(nèi)的11個縣市均有陽性豬場存在（表1）。

表1　2014-2015年黃岡市不同縣市中豬場感染CSFV情況

2014-2015年間，按調(diào)查進度每月統(tǒng)計全市陽性豬場數(shù)量情況，其結(jié)果如下（見下頁表2）。

表2　2014-2015年黃岡市不同月份中豬場感染CSFV情況

由表1、表2數(shù)據(jù)分析可知：2014、2015年間CSFV已經(jīng)在黃岡市境內(nèi)11各縣市都有感染，感染的陽性豬場占調(diào)查豬場總數(shù)的1/4左右，其中，2015年豬場感染為23.51%，2014年豬場感染25.48%，說明黃岡CSF的防控不容忽視；比較兩年的陽性豬場感染率，2015年較2014年略有下降，但不明顯，說明CSFV持續(xù)感染趨勢依然存在，但不排除CSF防控措施的作用效果。

4.3 CSFV抗原檢測結(jié)果

2014全年間，對來自全市11個縣市361家豬場的7642份全血樣品，進行豬瘟ELISA抗原檢測，其中，檢測出CSFV抗原陽性全血樣品185份，CSF陽性率為2.42%；2015全年間，對來自全市11個縣市336家豬場的7468份全血樣品，進行豬瘟ELISA抗原檢測，其中，檢測出CSFV陽性全血144份，CSF陽性率為1.93%（表3）。

表3　2014-2015年黃岡市不同月份中CSFV抗原檢測結(jié)果

2014年、2015年全血樣品均采集于無臨床癥狀豬群，通過表3數(shù)據(jù)分析可知， 說明：2014-2015兩年間CSFV對全市2%左右豬群造成隱形感染（或帶毒）；2015年豬場感染率為1.93%，2014年豬場感染率2.42%，2015年較2014年感染率略有下降，降幅明顯，說明黃岡市CSF防控措施有效。從2014-2015兩年間每月檢測的結(jié)果看，說明CSF一年四季均可感染，但以2月份和3月份CSF感染率最低，分別為1.95%和1.70%；以11月份和12月份CSF感染率最高，分別為3.16%和 2.42%；其他各月份間感染率差異不明顯。

為進一步分析不同豬群感染CSFV情況，按豬群分類，分別統(tǒng)計全市2014年、2015年全血樣品中CSFV抗原檢測結(jié)果，其結(jié)果如下（見表4）。

表4　2014-2015年黃岡市不同豬群中CSFV抗原檢測結(jié)果

由表4可知，CSFV對所有豬群都有感染，但其感染率在不同豬群中間有差異表現(xiàn)，本調(diào)查結(jié)果顯示：2014-2015兩年間黃岡市不同豬群CSFV抗原陽性率順序為育成豬＞保育豬＞育肥豬＞哺乳仔豬＞母豬＞種公豬。2014年CSFV在不同豬群中的感染率分別為育成豬（4.23%）、保育豬（3.10%）、育肥豬（2.45%）、哺乳仔豬（1.92%）、母豬（1.74%）、種公豬（1.56%）；2015年CSFV在不同豬群中的感染率分別為育成豬（3.74%）、育肥豬（2.49%）、保育豬（2.06%）、哺乳仔豬（1.51%）、母豬（1.08%）、種公豬（0.98%）。通過比較可知，總體來說育成豬和育肥豬CSFV陽性率最高，帶毒現(xiàn)象比其他豬群嚴重，種公豬和母豬CSFV陽性率最低，哺乳仔豬和保育豬CSFV陽性率居中。由于所有血樣均來自無臨床癥狀的豬只，但通過檢測發(fā)現(xiàn)CSFV仍然存在于各階段豬群，說明：黃岡市CSFV主要成隱形感染，因此密切關(guān)注和加強CSF的檢測工作不容忽視。5 綜合分析上述結(jié)果，形成討論觀點：

（1）通過兩年的CSF流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)：CSFV已經(jīng)在黃岡市境內(nèi)11各縣市都有感染，其中，受到CSFV陽性豬場比例占調(diào)查豬場的1/4，主要以隱性感染為主，偶見溫和型發(fā)病，主要集中在斷乳后的保育豬階段；兩年的豬場陽性率數(shù)據(jù)變化相對平穩(wěn)，未見大面積大規(guī)模爆發(fā)。說明黃岡市CSFV感染范圍較大，并且有持續(xù)帶毒現(xiàn)象，CSF防控不容忽視。

（2）本檢測的血樣均來自于調(diào)查豬場的無臨床癥狀豬群，說明黃岡市CSF主要以無臨床征狀感染為主，這對于凈化CSF的難度將增大，同時，一旦由于環(huán)境或其他疾病因素造成豬群免疫力下降，CSF爆發(fā)的可能增大。

［1］甘孟侯，楊漢春.中國豬病學(xué)［M］.北京：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社，2005.

［2］孟文學(xué)，淺談近年豬瘟流行態(tài)勢和防制對策［J］.中國獸醫(yī)科技，2009（9）：29一30.

［3］B.E斯特勞，5.D.阿萊爾，w.L蒙加林，等.著，豬病學(xué)（第八版）［M］.趙德明，張仲秋，沈建忠，等，譯.北京：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社，2010，157一171.11.

［4］王在時.豬瘟防制研究的回顧和展望［C］.畜禽重大疫病免疫防制研究進展.北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2011：64一105.

［5］于立權(quán)，崔玉東，樸范澤等.豬瘟疫苗研究進展［J］.動物醫(yī)學(xué)進展，2010，23（2）：10-13.

［6］顏水泉.最新豬病學(xué)［M］.臺北：德龍出版社. 2011.11-12.

［7］王在時.王瑋琳.我國豬瘟長期持續(xù)存在的根源及綜合防制對策.［J］.豬病防控2012（11）：30-32.

［責(zé)任編輯：秦春娥］

S858.28

A

1672-1047（2015）06-0134-04

10.3969/j.issn.1672-1047.2015.06.38

2015-11-30

黃岡職業(yè)技術(shù)學(xué)院科研項目“黃岡市豬瘟流行病學(xué)本底調(diào)查及防控技術(shù)規(guī)范研究（2015C2022107）”。作者簡介：余亮彬，男，湖北浠水人，總支書記，副教授。研究方向：獸醫(yī)流行病學(xué)及農(nóng)業(yè)高等職業(yè)教育研究。