李寶媛

【摘 要】目的：分析如何采用RP-HPLC測定硝苯地平片中各種成分的含量，旨在為同行日后工作提供參考。方法：采用電子天平C18色譜柱來檢測硝苯地平片中的乙腈-甲醇含量，且就這些含量的比例做了說明。結(jié)果：硝苯地平線性范圍為0.05～0.55mg·ml-1范圍內(nèi)呈現(xiàn)出良好的流性關(guān)系。結(jié)論：以反相高效液相色譜法分析硝苯地平片中的含量有著精密度高、準確性好、可靠且靈活的優(yōu)勢，可以適用其中各種不同成分的測量。

【關(guān)鍵詞】RP-HPLC；硝苯地平片；含量；測定；色譜柱；色相

硝苯地平片在當今臨床診療中很常見，是鈣通道阻滯治療中的常見藥物，有著抑制心肌對鈣離子社區(qū)的作用，而且能有效降低心肌興奮引起的收縮偶聯(lián)ATP酶的作用。就我國2005年頒布的《中華藥典》將其列為心絞痛、高血壓臨床診療的主要藥物。因此，這里我們有必要利用RP-HPLC對其含量進行測定。

1.一般資料

硝苯地平片在目前的臨床診療中，主要用于心絞痛和高血壓治療中。在心絞痛的臨床診療中，這一藥物主要應用在不穩(wěn)定性心絞痛、慢性穩(wěn)定型心絞痛診療中；高血壓診療中常常都將這種藥物作為降壓藥使用。硝苯地平片的主要含量也就是硝苯地平，它的化學名稱為2，6-二甲基-4（2-硝基苯基）-1，4-二氫-3，5-吡啶二甲酸二甲酯。，其化學分子式為：分子式：C17H18N2O6。目前我國醫(yī)療工作中所采用的硝苯地平片用化學方式結(jié)構(gòu)表示如下：

1.1儀器的選擇

在本次試驗中所選擇的儀器主要為高效液相色譜儀、紫外檢測器以及電子天平。這些設備在選擇之前都對設備的型號、種類做了嚴格的檢查。高效液相色譜儀在選擇中主要以waters2695型號為主，紫外線檢測器則為waters2487為主的，電子天平選擇了CP225D型號。

1.2藥物選擇

本次試驗中選擇的硝苯地平片的規(guī)格為10mg·片。該硝苯地平片與我國2005年頒發(fā)的《中華藥典》中的藥物相同，在甲醇、乙腈檢測條件下表現(xiàn)出色譜純的現(xiàn)象，在其他試劑檢測之后表現(xiàn)出分析純，水主要選擇了蒸餾水。

2.檢測方法和結(jié)果

2.1溶液的制備

首先，配備對照溶液，在具體工作中提前利用電子天平稱取硝苯地平片10mg并置放在已經(jīng)準備好的50ml的容量瓶中，并且在瓶中加入5ml的甲醇，采用振搖的方式讓甲醇迅速的溶解，并且檢查流動相的稀釋程度。

其次，配備供試品溶液。此次的配備提前提取硝苯地平片20片，出去外皮包衣之后進行稱量，然后對稱量好的硝苯地平片研磨。精密稱取這些研磨得出的細粉，加入到100mL的量瓶當中，然后加入10ml的甲醇，也采用振搖的方式讓甲醇迅速的溶解，添加流動相稀釋至刻度之后然后搖勻，過濾。

2.2色譜條件

經(jīng)過大量的問下查閱得出，這些溶液的色譜條件如下：流動相主要表現(xiàn)出水-甲醇的流動比，其比值為40：60，在這一比例下流動相表現(xiàn)的最為突出和明顯，此時流動相的波長為235nm，流速為10m·min-1。此時的溫度為恒溫狀態(tài)，即30℃。在這些條件下，色譜條件理論值為4200，具體的色譜圖如圖2所示。

2.3耐用性和系統(tǒng)適用性

取供試品溶液，在不同品牌的色譜柱（SunFireC184.6mm×250mm，5.0μm或GeminiC184.6mm×250mm，5.0μm），不同的液相色譜儀（WaterS2695系統(tǒng)EmpoWer工作站、LC-20ATVP），不同流動相系統(tǒng)，不同的pH等試驗條件下，進行分析比較，考察方法的耐用性，測定結(jié)果見表1。

2.4線性關(guān)系考察

精密量取硝苯地平對照品25mG，置250mL量瓶中，加25mL甲醇溶解后，以流動相定容至250mL搖勻，即得對照品儲備液。量取對照品儲備液2，3，4，5，6，7mL，分別置50mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，制成系列溶液。

2.5回收率試驗

精密稱取硝苯地平片處方量的80%，100%，120%的硝苯地平對照品各3份，分別置預先按硝苯地平的其他處方量的100mL量瓶中，加10mL甲醇溶解后，以流動相定容至100mL搖勻，按“含量測定”項下方法測定，按外標法計算。低、中、高3種濃度的回收率（n=3）分別為99.8%（RSD=1.0%），99.9%（RSD=0.64%），100.7%（（RSD=0.93%）；回收率平均值（n=9）為100.1%。

2.6含量測定

精密稱取硝苯地平樣品25mG于250mL量瓶中，加入25mL甲醇溶解，以流動相定容至250mL。精密量取供試品溶液20μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖。另取硝苯地平對照品溶解于甲醇中（約1mG·mL-1），以流動相稀釋至0.1mG·mL-1，同法測定。按外標法以峰面積計算，測得3批樣品中硝苯地平含量分別為標示量的98.1%101.7%，98.8%。

3.討論

3.1本品遇光極不穩(wěn)定

由于分子內(nèi)部發(fā)生光歧化作用，降解為硝基苯吡啶衍生物及亞硝基苯吡啶衍生物，分別為4-（2-硝基苯基）-2，6-二甲基吡啶-3，5-二羧酸二甲酯（Ⅰ）和4-（2-亞硝基苯基）-2，6-二甲基吡啶-3，5-二羧酸二甲酯（Ⅱ），后者對人體極為有害，注意生產(chǎn)及檢驗過程中均應注意避光，故本品在供試品液及對照品液制備以后避光測定，防止光化性光的破壞。

3.2檢測波長的選擇

鑒于硝苯地平雜質(zhì)結(jié)構(gòu)與主成分結(jié)構(gòu)類似，在UV圖譜中吸收情況基本一致或相近，進一步通過液質(zhì)聯(lián)用試驗分析對照品與自制樣品雜質(zhì)的一致性，結(jié)果確定主峰、雜質(zhì)峰及大部分離子峰m/z相同，結(jié)合紫外分光光度計記錄紫外吸收曲線圖，最終確定最大吸收波長235nm為檢測波長。

3.3流動相的選擇

分別選用水-乙腈-甲醇（50：25：25）、甲醇-水（3：2）為流動相系統(tǒng)，均未達到理想的效果，終因主成分保留時間過長等原因；最終選擇了水-乙腈-甲醇（30：35：35）為流動相，其基線穩(wěn)定，漂移和噪音極小，提高了檢測靈敏度。

4.結(jié)束語

本品采用紫外-可見分光光度法進行含量測定，受輔料干擾較大，尤其在短波長處更甚，在分次定量轉(zhuǎn)移時易造成損失；采用高效液相色譜法進行含量測定，檢測靈敏度高，易區(qū)分結(jié)構(gòu)相似的雜質(zhì)，可省略掉稀釋試驗步驟，縮短檢驗時間，盡可能避免遇光分解，大大提高試驗效率。 [科]

【參考文獻】

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