高銳婷，金樹(shù)琦，陳 寧*（內(nèi)蒙古包頭醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院，內(nèi)蒙古 包頭 014010）

熱休克蛋白60在香煙煙霧誘導(dǎo)的高血壓合并慢性阻塞性肺疾病大鼠體內(nèi)的表達(dá)及意義

高銳婷，金樹(shù)琦，陳 寧*
（內(nèi)蒙古包頭醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院，內(nèi)蒙古 包頭 014010）

目的 通過(guò)研究熱休克蛋白60（HSP60）在正常、高血壓合并慢性阻塞性肺疾?。–OPD）大鼠血清中的濃度變化，初步探索其在COPD發(fā)展進(jìn)程中的作用機(jī)制，為臨床治療提供新靶點(diǎn)。方法 選取40只8周齡清潔級(jí)健康雄性w istar大鼠隨機(jī)分對(duì)照組（正常環(huán)境下正常喂養(yǎng)）和實(shí)驗(yàn)組（煙熏法建立高血壓合并慢阻肺大鼠模型），各20只。18周后對(duì)兩組大鼠稱重，處死，收集標(biāo)本。肺組織經(jīng)固定-浸蠟-包埋-切片-HE染色后進(jìn)行病理學(xué)觀察；兩組血清中HSP60的濃度采用酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定；利用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件分析HSP60在兩組間的差異及相關(guān)性。結(jié)果 實(shí)驗(yàn)組大鼠血清中HSP60的濃度較對(duì)照組增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論 （1）單純煙熏法能成功復(fù)制高血壓合并慢性阻塞性肺疾病的模型。（2）實(shí)驗(yàn)組HSP60在慢性阻塞性肺疾病中含量高于對(duì)照組，預(yù)測(cè)其可能在COPD病程進(jìn)展中起著重要作用。

熱休克蛋白60；香煙煙霧；慢性阻塞性肺疾病

慢性阻塞性肺疾病（COPD）是呼吸系統(tǒng)疾病中的常見(jiàn)病及高發(fā)病，病程長(zhǎng)、死亡率高，影響患者的生活質(zhì)量，造成巨大的家庭和社會(huì)負(fù)擔(dān)。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)比兩組大鼠血清中熱休克蛋白60的濃度差異，研究香煙煙霧引起的高血壓合并COPD中HSP60的表達(dá)及影響。

1 材料及方法

1.1 一般材料

選取40只8周齡清潔級(jí)健康雄性w istar大鼠（重約180 g左右），購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司；熱休克蛋白60試劑盒試劑盒購(gòu)自美國(guó)R&D公司；大青山香煙由內(nèi)蒙古昆明卷煙有限責(zé)任公司出品（焦油量11mg，煙堿量1.0 mg，一氧化碳量14 mg，20支/盒）；MultiskanMK3酶標(biāo)儀（美國(guó)熱電THERMO）；離心機(jī)由美國(guó)熱電公司制造；-80℃冰箱由海爾電器公司提供；電溫箱由北京醫(yī)療設(shè)備廠提供；自制煙熏箱（尺寸80 cm×50 cm×80 cm，于左右上角分別留置直徑1 cm的通氣孔）。

1.2 高血壓合并慢阻肺大鼠模型的建立

將40只8周齡健康雄性wistar大鼠隨機(jī)分對(duì)照組（正常環(huán)境下正常喂養(yǎng)）和實(shí)驗(yàn)組（煙熏法建立高血壓合并慢阻肺大鼠模型），各20只。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物養(yǎng)于我院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室，采光良好，室溫22～25℃，定期消毒。實(shí)驗(yàn)前大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周。對(duì)照組大鼠在自然環(huán)境下正常喂養(yǎng)，大鼠自由攝食飲水；實(shí)驗(yàn)組大鼠在自制煙熏箱內(nèi)被動(dòng)吸煙（煙熏箱左右上角分別留一直徑1 cm的通氣孔，保持箱內(nèi)通氣），2次/d，香煙15支/次，同時(shí)點(diǎn)燃放入箱內(nèi)燃燒，時(shí)間持續(xù)至煙霧基本消失，約1 h。4 h后再次進(jìn)行被動(dòng)吸煙。每周6天，連續(xù)熏至16周，行X線片其中15只診斷為慢阻肺。剩余5只繼續(xù)煙熏，至18周后行X線檢測(cè)5只均符合高血壓合并慢阻肺的表現(xiàn)。除在密封箱內(nèi)時(shí)間外，兩組大鼠在相同環(huán)境中飼養(yǎng)。

1.3 HSP60濃度的測(cè)定方法

采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)各組大鼠血清中HSP60的含量，嚴(yán)格按照試劑盒中說(shuō)明書的實(shí)驗(yàn)步驟操作執(zhí)行。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以“±s”表示，采用t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 大鼠一般情況

（1）對(duì)照組大鼠：進(jìn)食正常，精神狀態(tài)良好，體毛光亮，反應(yīng)靈活，身體健碩，無(wú)死亡。（2）實(shí)驗(yàn)組大鼠：熏煙2周后開(kāi)始出現(xiàn)咳嗽，第95天死亡1只，原因?yàn)楹粑ソ摺?/p>

2.2 大鼠體重的比較（見(jiàn)表1）

2.3 大鼠肺組織病理學(xué)檢查

2.3.1 一般觀察

對(duì)照組：表面粉紅，彈性良好；實(shí)驗(yàn)組：肺組織過(guò)度膨脹，顏色灰白，局部顏色發(fā)黑，彈性降低，表面可見(jiàn)肺大泡，切面呈蜂窩狀。見(jiàn)圖1。

表1 兩組大鼠體重比較（g）

圖1 左邊是正常肺，右邊是肺氣腫

2.3.2 光鏡觀察

（1）對(duì)照組：氣管壁完整光滑，肺組織結(jié)構(gòu)完整，纖毛上皮無(wú)脫落，肺泡間隔均勻，肺泡腔大小均勻，氣管壁內(nèi)無(wú)粘液分泌，支氣管平滑肌無(wú)增生。見(jiàn)圖2。

（2）實(shí)驗(yàn)組：支氣管粘膜上皮細(xì)胞變性壞死，潰瘍形成，纖毛變短，倒伏、粘連，脫落，杯狀細(xì)胞增生、肥大，基底膜變厚壞死，支氣管壁充血、水腫。氣泡腔不規(guī)則擴(kuò)大，肺泡間隔變薄斷裂，有肺大泡形成。細(xì)支氣管周圍大量淋巴細(xì)胞，中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，氣道粘液分泌增多。見(jiàn)圖3。

2.3.3 HE染色病理切片（見(jiàn)圖2、圖3）

圖2 正常肺組織

圖3 慢阻肺肺氣腫

2.3.4 影像學(xué)檢測(cè)

（1）對(duì)照組：雙側(cè)胸廓前后徑正常，雙肺野透過(guò)度正常，肺紋理清晰，雙側(cè)胸膜無(wú)增厚，未見(jiàn)胸腔積液。

（2）實(shí)驗(yàn)組：雙側(cè)胸廓前后徑大于左右徑，雙肺野透過(guò)度增高，肺紋理稀疏，氣管支氣管通暢，未見(jiàn)狹窄或阻塞征，雙側(cè)胸膜無(wú)增厚，未見(jiàn)胸腔積液。

2.4 兩組HSP60濃度比較

實(shí)驗(yàn)組（慢阻肺組）大鼠血清中HSP60的濃度較對(duì)照組（正常組）增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表2。

表2 正常組與慢阻肺組HSP60濃度比較

3 討 論

熱休克蛋白60作為一種分子伴侶，主要由內(nèi)皮細(xì)胞分泌和釋放，在內(nèi)皮細(xì)胞受外界因素如缺血缺氧、應(yīng)激、高血壓、感染等刺激時(shí)HSP60的釋放增加，被樹(shù)突狀細(xì)胞、淋巴細(xì)胞所識(shí)別，從而觸發(fā)自身免疫反應(yīng)［1-2］。目前有研究表明通過(guò)口服HSP60可誘導(dǎo)機(jī)體內(nèi)特異性CD 4+CD 25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞分泌增加，從而起到抑制免疫炎癥反應(yīng)的作用［3］。高血壓大鼠生長(zhǎng)早期，會(huì)持續(xù)增加血管阻力，誘因血壓升高，機(jī)體的腎素-血管緊張素系統(tǒng)激活，此過(guò)程持續(xù)進(jìn)展至生命結(jié)束。

近年來(lái)有研究表明，熱休克蛋白60可通過(guò)誘導(dǎo)自身免疫炎癥反應(yīng)，促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞增殖遷移，參與多種疾病的發(fā)展。HSP60在慢性阻塞性肺疾病中的表達(dá)文獻(xiàn)中報(bào)道較少。本研究進(jìn)一步證實(shí)HSP60在COPD中表達(dá)的臨床意義，研究發(fā)現(xiàn)HSP60在COPD大鼠中表達(dá)明顯高于正常組大鼠，提示HSP60在COPD中過(guò)表達(dá)可能是由于COPD病程進(jìn)展中應(yīng)激反應(yīng)和細(xì)胞的免疫應(yīng)答，具體機(jī)制目前尚不明確，有待進(jìn)一步臨床實(shí)踐研究證實(shí)。

［1］ 肖 建，等.慢性阻塞性肺疾病病因及發(fā)病機(jī)制研究進(jìn)展［J］.中國(guó)老年學(xué)雜志，2014，34（11）：3191-3193.

［2］ 龔素波，等.HSP60與支氣管哮喘相關(guān)性探討［J］.中華哮喘雜志（電子版），2013，7（2）：126-129.

［3］ 李雙雪.重組人血管內(nèi)皮抑制素對(duì)慢性阻塞性肺疾病大鼠模型肺組織低氧誘導(dǎo)因子-1α和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子表達(dá)的影響［J］.《中國(guó)藥物與臨床》，2013，（3）：317-318.

本文編輯：吳 衛(wèi)

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ISSN.2095-6681.2015.026.197.02

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