付智慧，陸錦銳，李淑軍，胡慧華

（1.北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，北京100102；2.黔南民族醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校，貴州都勻558000）

駱駝蓬炮制前后駱駝蓬堿含量變化研究

付智慧1，陸錦銳2，李淑軍1，胡慧華1

（1.北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，北京100102；2.黔南民族醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校，貴州都勻558000）

目的采用高效液相色譜（HPLC）法測定炮制前后駱駝蓬中駱駝蓬堿的含量變化。方法色譜柱為Agilent SB柱（250 mm× 4.6mm，5μm），流動相為甲醇-0.02mol/L硫酸銨（32∶68，V/V），流速為1.0mL/min，柱溫為25℃，檢測波長為375 nm。結(jié)果炮制前后駱駝蓬中駱駝蓬堿的平均含量分別為2.72，1.90mg/g，炮制后的駱駝蓬堿含量較炮制前下降了30.15%。結(jié)論駱駝蓬經(jīng)紅酒煮制后，駱駝蓬堿含量可顯著降低。

駱駝蓬堿；駱駝蓬；炮制

駱駝蓬Peganumharmala L.屬蒺藜科，維吾爾醫(yī)分別以其全草和種子入藥，全草稱為駱駝蓬，種子稱為駱駝蓬子。駱駝蓬主要分布于我國西北部的干旱草地以及鹽堿化荒地，是維吾爾族、蒙古族沿用已久的草藥，也被收載入中醫(yī)藥本草為中醫(yī)藥廣泛使用［1-4］。駱駝蓬性平，味苦、辛，有毒，具有堅(jiān)固筋脈、助陽暖陰、消除黏稠體液、消散寒濕之氣等功效，主治筋脈軟弱、骨關(guān)節(jié)痛、咳嗽痰多、偏癱健忘、神昏頭痛、月經(jīng)不調(diào)等［5］。駱駝蓬主要化學(xué)成分為生物堿，其中駱駝蓬堿（harmaline）及去氫駱駝蓬堿（harmine）是駱駝蓬的主要活性成分，屬β-咔啉類生物堿［5-6］。駱駝蓬全株有毒，可引起家畜嚴(yán)重中毒，中毒后出現(xiàn)厭食、嘔吐、腹瀉癥狀，明顯處于麻醉狀態(tài)并伴有間歇性的興奮，而后呼吸困難、瞳孔放大，在這些病癥出現(xiàn)后的30～36 h死亡，這些綜合病癥表明，駱駝蓬中含有亞致死物［4］。據(jù)記載，維醫(yī)在治療頑固性頭痛和癲癇病時，將駱駝蓬用紅酒煮后才能用，提示紅酒煮制可降低毒性，提高臨床用藥安全性和有效性［7］。我國對駱駝蓬的炮制研究尚處于空缺狀態(tài)，本試驗(yàn)中以駱駝蓬堿的含量為指標(biāo)，以傳統(tǒng)紅酒煮法對駱駝蓬進(jìn)行炮制，研究駱駝蓬炮制前后駱駝蓬堿的含量變化，為駱駝蓬炮制解毒提供參考。

1　儀器與試藥

KQ5200型超聲清洗儀（昆山市超聲儀器有限公司）；Agilent G1316A 1200型高效液相色譜儀、WFZ2800 D2型紫外-分光光度計（北京第二光學(xué)儀器廠）；SL2002N型電子天平（上海民橋精密科學(xué)儀器有限公司）；EL204型分析天平（梅特勒-托利多儀器上海有限公司）。甲醇（色譜純，天津光復(fù)科技發(fā)展有限公司，批號為20120301）；甲醇（天津市富宇精細(xì)化工有限公司，批號為20120512）、硫酸銨（天津光復(fù)科技發(fā)展有限公司，批號為20120221）、磷酸（天津市富宇精細(xì)化工有限公司，批號為20120221）均為分析純；駱駝蓬堿對照品（簡稱為HML，Sigma，批號為101087574）。駱駝蓬草購于新疆和田大巴扎阿提木疆維藥店，經(jīng)新疆維吾爾醫(yī)專吳秋靈教授鑒定為蒺藜科植物駱駝蓬Peganumharmala L.；紅酒購于新疆和田買買提維藥店。

2　方法與結(jié)果

2.1色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：Agilent SB柱（250mm×4.6mm，5μm）；流動相：甲醇-0.02 mol/L硫酸銨溶液（含0.5%H3PO4，1%三乙胺，32∶68，V/V）；進(jìn)樣量：10μL；流速：1 mL/min；柱溫：25℃；檢測波長：375 nm。在此條件下，色譜圖見圖1。

2.2溶液制備

稱取駱駝蓬堿對照品6.15 mg，精密稱定，置10 mL容量瓶中，加甲醇制成每1mL含0.615mg的對照品貯備液；精密吸取1 mL，加甲醇稀釋并定容至25 mL，即得HML對照品溶液（24.6μg/mL）。根據(jù)《新疆維吾爾自治區(qū)中藥維吾爾藥飲片炮制規(guī)范》［8］，取駱駝蓬草適量，凈制后切為長度約2 cm小段作為生品備用；取駱駝蓬草段500 g，加紅酒500mL，文火煮沸至酒干，取出，涼干，即得駱駝蓬炮制品。參考文獻(xiàn)［8-10］，精密稱取駱駝蓬生品和炮制品粉末各0.3 g，分別置50mL具塞三角瓶中，精密加入25mL甲醇，稱重，超聲提取60min，放冷后用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，量取適量濾液用0.45μm微孔濾膜濾過，即得駱駝蓬生品與炮制品供試品溶液。

2.3方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察：分別精密吸取HML對照品溶液2，6，10，14，18μL，測定峰面積。以峰面積（Y）對對照品進(jìn)樣量（X）進(jìn)行線性回歸，得回歸方程Y=5 683X-27.66，r=0.999 5（n=5）。結(jié)果表明，HML進(jìn)樣量在0.049 2～0.442 8μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

圖1　高效液相色譜圖

精密度試驗(yàn)：精密吸取HML對照品溶液24.6μg/mL，連續(xù)進(jìn)樣5次，測定峰面積。結(jié)果HML對照品平均峰面積為1 386.44，RSD=1.55%（n=5），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：精密吸取同一生品供試品溶液，每隔2 h進(jìn)樣1次，測定峰面積。結(jié)果生品供試品溶液中HML的平均峰面積為1 871.96，RSD=1.45%（n=5），表明生品供試品溶液在室溫8 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn)：分別精密稱取駱駝蓬炮制品5份，每份0.3 g，按擬訂方法制備供試品溶液，依法進(jìn)樣測定。結(jié)果炮制品供試品溶液中HML的平均含量為2.72mg/g，RSD=2.43%（n=5），表明該方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn)：采用半量加樣回收法，精密稱取駱駝蓬炮制品粉末0.15 g，精密加入適量的HML對照品溶液，按擬訂方法制備供試品溶液，依法進(jìn)樣測定，計算回收率。結(jié)果見表1。

表1　HML加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=5）

2.4樣品含量測定

分別精密吸取生品與炮制品供試品溶液各10μL，依法進(jìn)樣測定HML的含量。結(jié)果見表2。

3　討論

駱駝蓬生物堿作為駱駝蓬的主要化學(xué)成分，具有抗腫瘤、抗阿爾茨海默病、抗糖尿病、抗凝血、鎮(zhèn)痛、抗菌、抗原蟲等多方面藥理作用，其中抗腫瘤活性最顯著，作為抗腫瘤藥物具有廣闊的開發(fā)利用前景［5，11］。而駱駝蓬含有的多種生物堿又有一定的毒性，對神經(jīng)系統(tǒng)有多種強(qiáng)烈作用［4］，但經(jīng)紅酒煮制后毒性降低［7］。在對駱駝蓬毒性成分研究尚未清楚的情況下，駱駝蓬在臨床的安全應(yīng)用成為了首要的問題，故研究駱駝蓬通過炮制減毒很有必要。

表2　樣品含量測定結(jié)果

本試驗(yàn)結(jié)果顯示，駱駝蓬經(jīng)紅酒煮制后，其駱駝蓬堿的含量與生駱駝蓬相比明顯下降，說明駱駝蓬堿可能是其中的毒性成分之一，可為揭示駱駝蓬炮制解毒提供相關(guān)資料。對于其他生物堿炮制前后的含量變化，還有待進(jìn)一步研究。

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Research on Change of Harmaline Content in Peganumharmala L.before and after Processing

Fu Zhihui1，Lu Jinrui2，Li Shujun1，Hu Huihua1
（1.School of Chinese Material Medica Beijing University of Chinese Medicine，Beijing，China 100102；2.Qiannan Medical College for Nationalities，Duyun，Guizhou，China 558000）

Objective To investigate the change of harmaline content in Peganumharmala L.before and after processing by adopting the HPLC method.M ethods The determination was carried out with the Agilent SB column（250 mm×4.6 mm，5μm）；the mobile phase consisted of methanol-0.02 mol/L ammonium sulfate（32∶68，V/V）for elution；the detection wavelength was set at 375 nm，and the flow rate was 1.0 mL/min at the column temperature of 25℃.Results The average harmaline content of crude Peganumharmala L.was 2.72 mg/g，the average harmaline contents in Peganumharmala L.before and after processing were 2.72，1.9 mg/g，respectively，the harmaline content after processing was decreased by 30.15%than before processing.Conclusion The content of harmaline in Peganumharmala L.after decocting with red wine is significantly reduced.

harmaline；Peganumharmala L.；processing

R284.1；R282.71；R283.1

A

1006-4931（2015）16-0052-03

付智慧（1987-），女，漢族，河南人，碩士研究生，研究方向?yàn)橹兴幣谥疲娮有畔洌?95344143@qq.com；胡慧華（1962-），女，漢族，北京人，博士研究生，副教授，研究方向?yàn)橹兴幣谥茩C(jī)理研究，本文通訊作者，（電子信箱）ahuihh@sina.com。

2015-01-27；

2015-03-13）