張 琴

（湖南省中醫(yī)藥大學(xué)附一醫(yī)院藥劑科，湖南 長(zhǎng)沙 410000）

HPLC法測(cè)定復(fù)方丹參滴丸中丹參素的含量

張 琴

（湖南省中醫(yī)藥大學(xué)附一醫(yī)院藥劑科，湖南 長(zhǎng)沙 410000）

目的 建立高效液相色譜法（HPLC）快速測(cè)定復(fù)方丹參滴丸中丹參素的含量。方法色譜柱為Hypersil C18（4.6 mm×250 mm，5μm）；流動(dòng)相為甲醇-水-冰醋酸（20∶80∶0.5），柱溫為室溫；流速為0.9 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為281 nm。結(jié)果丹參素對(duì)照品在0.01～0.10 mg/mL范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系，r<0.9997， 含量丹參素平均回收率為99.6%，RSD為0.89%。所測(cè)復(fù)方丹參滴丸中丹參素的平均含量為8.034 mg/g，符合2010年版藥典對(duì)其含量的要求。結(jié)論HPLC法測(cè)定復(fù)方丹參滴丸中丹參素的含量方法操作流程簡(jiǎn)單、快速、準(zhǔn)確，可用于該制劑的質(zhì)量控制中大力推廣使用。

HPLC法；復(fù)方丹參滴丸；丹參素；含量

復(fù)方丹參滴丸是由丹參、三七及冰片等藥味組成的復(fù)方制劑，具有活血化瘀、理氣止痛的功效［1］?，F(xiàn)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)收載在《中國(guó)藥典》2005年版一部檢測(cè)的內(nèi)容中。復(fù)方丹參滴丸存在質(zhì)量控制方法簡(jiǎn)單，產(chǎn)品質(zhì)量不易控制的缺點(diǎn)，從而將影響產(chǎn)品的生產(chǎn)和保證質(zhì)量［2］。本研究建立高效液相色譜法（HPLC）快速測(cè)定復(fù)方丹參滴丸中丹參素的含量，結(jié)果準(zhǔn)確性高，現(xiàn)將操作步驟總結(jié)如下。

1　材　料

1.1儀器：Shimadzu 2010高效液相色譜系統(tǒng)（日本島津公司），Agilent HPll00 LC-DAD色譜系統(tǒng)（安捷倫科技公司），Thermo Finnigan Surveyor LC-TSQ Quanturn Ulna AM液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜系統(tǒng)（美國(guó)菲尼根質(zhì)譜公司）。連續(xù)式移液器（美國(guó)熱電儀器有限公司）。102-3遠(yuǎn)紅外快速干燥箱（北京興爭(zhēng)儀器設(shè)備廠）。

1.2試劑：丹參素鈉對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，批號(hào)：100018-200908）。復(fù)方丹參滴丸（天津天士力制藥股份有限公司提供，批號(hào)為100904、101002、100919）。三重蒸餾水自制。甲醇、乙腈為美國(guó)進(jìn)口色譜純，水為純凈水，其他試劑均為分析純。

2　方　法

2.1色譜條件：STI2000高效液相色譜儀，Vertex C18色譜柱為Hypersil C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），UV501紫外檢測(cè)器。流流動(dòng)相為甲醇-水-冰醋酸（20∶80∶0.5），柱溫為室溫；流速為0.9 mL/min，20 μL定量管進(jìn)樣，檢測(cè)波長(zhǎng)為281 nm。理論塔板數(shù)按照丹參素色譜峰計(jì)＞5000。

2.2溶液的制備

2.1丹參素鈉對(duì)照品溶液的配制：精密稱取10.0 mg丹參素對(duì)照品于10 mL容量瓶中，加甲醇稀釋到刻度，搖勻，過濾。取續(xù)濾液用0.45 μm微孔濾膜過濾，作為對(duì)照品溶液備用。

2.2樣品溶液的制備：精密稱取復(fù)方丹參滴丸12粒，研成細(xì)粉后精確稱量，置25 mL量瓶中。加入甲醇約20 mL，超聲處理30 min使溶解，放冷至室溫，加甲醇至刻度搖勻即得樣品溶液，離心5 min，進(jìn)樣前用

0.45μm濾膜濾過，即得復(fù)方丹參滴丸的供溶液試品溶液。

3　方法考察

3.1可行性考察：按處方比例及工藝自制不含丹參的空白樣品。吸取復(fù)方丹參滴丸及其空白樣品適量。按樣品測(cè)定項(xiàng)下方法分別進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見圖1（A、B），由圖1（B）看出其他藥材和輔料不干擾丹參素測(cè)定。同時(shí)吸取丹參素對(duì)照品溶液適量進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見圖1（C）。

3.2線性關(guān)系考察：精密吸取丹參素鈉照品溶液0.5、1.0、2.0、3.0、5.0 mL于5個(gè)10 mL容量瓶中，加甲醇定容，搖勻后即得對(duì)照品溶液，用0.45 μm微孔濾膜過濾，分別精密吸取20 μL進(jìn)樣，按上述色譜條件分別測(cè)定其峰面積，以色譜峰面積為縱坐標(biāo)，以溶液中丹參素的濃度為橫坐標(biāo)，按上述條件測(cè)定峰面積。結(jié)果丹參素對(duì)照品在0.01～0.10 mg/mL范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系，回歸方程為Y<0.711C-1.861，r<0.9997（n<5）。見表1。

表1　丹參素的對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)曲線

表2　復(fù)方丹參滴丸成分含量測(cè)定

圖1　復(fù)方丹參滴丸 HPLC 圖譜（A供試品；B空白樣品；C丹參素）

3.3精密度試驗(yàn)：精密取用對(duì)照品溶液4.0 mL于10.00 mL容量瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液1.0 mL，用1%醋酸溶液稀釋到刻度。重復(fù)進(jìn)樣5次，每次20 μL，分別測(cè)定峰面積，RSD丹參素為0.59%。試驗(yàn)結(jié)果表明精密度良好。

3.4重現(xiàn)性試驗(yàn)：精密稱取丹參滴丸樣品5份，按本文方法處理和測(cè)定，每份進(jìn)樣3次，每次進(jìn)樣20 μL，以外標(biāo)法分別測(cè)定峰面積。5份復(fù)方丹參滴丸中丹參素的平均含量為7.9776 mg/g，RSD為1.24%。

3.5穩(wěn)定性試驗(yàn)：取樣品溶液，分別于1、2、6、10、24、72 h進(jìn)樣，每次20 μL，分別測(cè)定峰面積。結(jié)果丹參素與內(nèi)標(biāo)物的峰面積比的RSD為0.71%。

3.6回收率實(shí)驗(yàn)：精密量取復(fù)方丹參滴丸供試品溶液4.0 mL，置于5個(gè)含0.5、1.0、2.0、3.0、4.0 mL對(duì)照品溶液的10 mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，取續(xù)濾液用0.45 μm微孔濾膜過濾，20 μL注入高效液相色譜儀，按樣品測(cè)定項(xiàng)下操作，計(jì)算回收率。測(cè)得結(jié)果含量丹參素平均回收率為99.6%，RSD為0.89%。試驗(yàn)結(jié)果表明，加樣回收率良好。

3.7樣品含量測(cè)定：取三個(gè)不同批號(hào)的復(fù)方丹參滴丸樣品，每批3份，按樣品溶液制備方法制備供試品溶液，進(jìn)樣前用0.45 μm濾膜濾過，棄去初濾液，分別進(jìn)樣，進(jìn)樣量為20 μL，分別測(cè)定峰面積。結(jié)果見表2。

4　討　論

復(fù)方丹參滴丸處方為丹參、三七、冰片。臨床上廣泛用于冠心病、心絞痛的預(yù)防、治療、急救。具有劑量小、服用方便、溶出速度快、起效迅速等特點(diǎn)。其中丹參為君藥，其有效有丹參酮ⅡA、丹酚酸B、丹酚酸B鎂鹽、丹參素、丹參總酮、隱丹參酮、原兒茶醛等，丹參素可抑制血小板合成、提高心肌耐缺氧能力，保護(hù)心肌，增加冠脈流量［3-4］。是復(fù)方丹參滴丸治療冠心病、心肌缺血的主要機(jī)制。復(fù)方丹參滴丸現(xiàn)在已經(jīng)成為國(guó)內(nèi)心血管市場(chǎng)上的最主要藥物和品牌。中藥復(fù)方丹參滴丸由多味中藥、多種成分組成，很難作到每味藥都進(jìn)行含量測(cè)定［5-6］。臨床測(cè)定復(fù)方丹參滴丸中丹參素含量方法較多。本研究所采用HPLC法快速測(cè)定復(fù)方丹參滴丸中丹參素的含量。高效液相色譜用甲醇-水-冰醋酸為（20∶80∶0.5）流動(dòng)相，出峰時(shí)間以及峰型較佳，保留時(shí)間適宜［7］。在測(cè)定復(fù)方丹參滴丸中丹參素的含量時(shí)，其他藥物成分均無干擾［8-9］。高效液相色譜法中流動(dòng)相為液體，流經(jīng)色譜柱時(shí)，受到的阻力較大，為了能迅速通過色譜柱，必須對(duì)載液加高壓［10］。其特點(diǎn)為分離效能高。特別是高沸點(diǎn)、大分子、強(qiáng)極性、熱穩(wěn)定性差化合物的分離分析，顯示出優(yōu)勢(shì)。而且分析速度快、載液流速快。此外高效液相色譜還有色譜柱可反復(fù)使用、樣品不被破壞、易回收等優(yōu)點(diǎn)［11］。本研究建立HPLC快速測(cè)定復(fù)方丹參滴丸中丹參素的含量。結(jié)果顯示丹參素對(duì)照品在0.01～0.10 mg/mL范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系，r<0.997，含量丹參素平均回收率為100.15%，RSD為4.19%。所測(cè)復(fù)方丹參滴丸中丹參素的平均含量為8.034 mg/g，符合2010 版藥典對(duì)其含量的要求。提示HPLC法測(cè)定復(fù)方丹參滴丸中丹參素的含量方法操作流程簡(jiǎn)單、快速、準(zhǔn)確，可用于該制劑的質(zhì)量控制中大力推廣使用。

由于丹參素鈉穩(wěn)定性欠佳，因此對(duì)照品溶液需避光，低溫保存，最好臨用現(xiàn)配，以保證準(zhǔn)確性。

［1］國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典（2010年版一部）［M］.北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2011.

［2］游勇基，陳銘輝.高效液相色譜法測(cè)定丹參中丹酚酸B等3種有效成分［J］.中國(guó)藥學(xué)雜志，2011，38（12）:950-952.

［3］楊廣德，賀浪沖，李永茂.丹參有效部位指紋圖譜定性和有效成分定量分析方法研究［J］.藥物分析雜志，2011，23（6）:409-413.

［4］Chu Y，Zhang L，Wang XY，et al.The effect of Compound Danshen Dripping Pills，a Chinese herb medicine，on the pharmacokinetics and pharmacodynamics of warfarin in rats［J］.J Ethnopharmacol，2011，137（3）:1457-1461.

［5］Ng CS，Wang SP.Systematic review and meta -analysis of randomized controlled trials comparing Chinese patent medicines Compound Danshen Dripping Pills and Di'ao Xinxuekang in treating angina pectoris［J］.Zhong Xi Yi Jie He Xue Bao，2012，10（1）:25-34.

［6］袁琦，趙輝.HPLC法測(cè)定復(fù)方丹參滴丸中丹參素的含量［J］.河南大學(xué)學(xué)報(bào):醫(yī)學(xué)版，2008，27（2）:31-32.

［7］靳榮.復(fù)方丹參滴丸臨床新用近況［J］.實(shí)用中醫(yī)藥雜志，2012，28（7）: 610-611.

［8］丁蘭，易愛純，石崢嶸.高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定復(fù)方丹參滴丸中丹參素和原兒茶醛［J］.中國(guó)實(shí)用醫(yī)藥，2008，3（18）:70-71.

［9］呂東，劉亞蓉.復(fù)方丹參膠囊質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)研究［J］.西北藥學(xué)雜志，2010，15（6）:254.

［10］洪馨，王寧生.高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方丹參滴丸中丹參素和丹參酮ⅡA的含量［J］.中藥新藥與臨床藥理，2011，13（4）:247-249.

［11］張翠蓮，張偉琪，楊秀斌，等.復(fù)方丹參注射液的質(zhì)量考察［J］.中國(guó)藥學(xué)雜志，2011，38（1）:56-58.

Determination of Danshensu in Compound Danshen dripping pill by HPLC

ZHANG Qin
（Department of Pharmacy， the First Hospital of Hunan University of Chinese Medicine， Changsha 410000， China）

Objective To establish a HPLC method for content determination （HPLC） of Danshensu in Compound Danshen dropping pill. Methods The chromatographic column was Hypersil C18（4.6 mm×250 mm， 5 μm）； the mobile phase of methanol-water-acetic acid （20∶80∶0.5）， the column temperature was room temperature； the flow rate was 0.9 mL/min； the detection wavelength was 281 nm. Results Danshensu control sample showed good linear relationship in the range of 0.01-0.10 mg/mL r<0.997， Danshensu content， the average recovery was 99.6%， RSD 0.89%. The average content of pigment compound danshendropping pill for 8.034mg/g， consistent with the 2010 edition of Pharmacopoeia requirements for its content. Conclusion The HPLC method for the determination of content of Danshensu in Compound Danshen Dropping Pill operation is simple， fast， accurate， and can be used for the quality control of the preparation in vigorously promoting the use of.

HPLC； Compound Danshen dripping pills； Danshensu； Content

R282.710.3

B

1671-8194（2015）19-0062-02