真菌毒素是真菌產(chǎn)生的有毒次級(jí)代謝物，它廣泛存在于糧油食品和飼料中，對(duì)人類(lèi)和動(dòng)物有害。一種真菌可能產(chǎn)生多種毒素，多種真菌可能產(chǎn)生同一種毒素。通常糧食或飼料中的真菌毒素并非單獨(dú)存在，可能以一種或數(shù)種毒素為主，當(dāng)不同毒素同時(shí)存在時(shí)，真菌毒素的毒性有累加效應(yīng)（如黃曲霉毒素和赭曲霉毒素、嘔吐毒素和玉米赤霉烯酮等），但并非是相加或相乘的關(guān)系。真菌毒素的毒性變化很大，它取決于毒素的種類(lèi)、數(shù)量、攝入量、持續(xù)攝入時(shí)間、環(huán)境因素（包括環(huán)境衛(wèi)生、空氣質(zhì)量、溫度、濕度）等。目前，全世界已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了400多種結(jié)構(gòu)不同的真菌毒素，其中已經(jīng)被分離鑒定的有20多種，危害較大的主要有黃曲霉毒素、玉米赤霉烯酮、嘔吐毒素、赭曲霉毒素A、伏馬毒素和T2/HT2毒素等。其中，黃曲霉毒素是天然物中致癌性最強(qiáng)的毒素，被世界衛(wèi)生組織（WHO）的癌癥研究機(jī)構(gòu)劃定為1類(lèi)致癌物，也是世界各地農(nóng)產(chǎn)品及食品中最易受其污染的一種真菌毒素。據(jù)聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織估計(jì)，全世界谷物供應(yīng)的25%受真菌毒素污染，這些真菌毒素會(huì)通過(guò)被污染的谷物、飼料和由這些飼料喂養(yǎng)的動(dòng)物所提供的動(dòng)物性食品進(jìn)入人們的食物鏈，從而對(duì)人畜表現(xiàn)出致癌性、遺傳毒性和致畸性。目前，全世界已有100個(gè)國(guó)家規(guī)定了糧食中主要真菌毒素的限量，我國(guó)GB 2761-2011也明確規(guī)定了食品中真菌毒素的限量。因此，準(zhǔn)確檢測(cè)真菌毒素含量的技術(shù)手段變得極為重要。

真菌毒素的檢測(cè)方法有很多種，比較經(jīng)典且已經(jīng)形成國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)或行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)予以實(shí)施的檢測(cè)方法主要包括高效液相色譜法（HPLC）、液質(zhì)聯(lián)用法（LC-MS）、薄層層析法（TLC）、免疫親和層析凈化熒光光度法、酶聯(lián)免疫法、膠體金檢測(cè)條法等。

高效液相色譜法和液質(zhì)聯(lián)用法

高效液相色譜法是目前糧油食品中真菌毒素定量檢測(cè)的主要方法，其檢測(cè)過(guò)程一般包括樣品粉碎、提取、過(guò)濾、凈化和進(jìn)樣分析等步驟。由于高效液相色譜法對(duì)樣品的純度要求較高，因此凈化過(guò)程是檢測(cè)中的關(guān)鍵步驟。在我國(guó)新近頒布的真菌毒素檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)方法中，主要采用免疫親和柱凈化-高效液相色譜法，該方法已經(jīng)成為國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的主流方法。

由于真菌毒素的種類(lèi)較多，其化學(xué)性質(zhì)各有特點(diǎn)，如有些對(duì)紫外光有響應(yīng)，有些對(duì)熒光有響應(yīng)，而有些只能衍生后進(jìn)行檢測(cè)，因此傳統(tǒng)的液相色譜法很難同時(shí)檢測(cè)多種毒素，而同種糧油或其制品常易被多種毒素同時(shí)污染，因此發(fā)展出了可同時(shí)測(cè)定多種真菌毒素的液質(zhì)聯(lián)用法（HPLC-MS）。中檢環(huán)貿(mào)生物技術(shù)（北京）有限公司的Helix六合一真菌毒素免疫親和柱適用于多種樣品類(lèi)型，如糧食谷物、堅(jiān)果、食用油、奶粉、嬰幼兒食品和香辛料等，能同時(shí)分離和純化標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的6種真菌毒素（AFLA+ZEN+DON+OTA+FUM+T2/HT2），將免疫親和柱的高效純化優(yōu)勢(shì)與質(zhì)譜多種分析物同時(shí)檢測(cè)的特點(diǎn)有效結(jié)合，樣品處理液可直接應(yīng)用于HPLC、LC-MS/MS、ELISA等多種檢測(cè)方法。

薄層色譜法（TLC）

薄層色譜法是20世紀(jì)60年代發(fā)展起來(lái)的一種平面色譜技術(shù)，該方法針對(duì)不同樣品，用適當(dāng)?shù)挠袡C(jī)溶劑將待測(cè)毒素從樣品中提取出來(lái)，經(jīng)純化后在薄層板上展開(kāi)層析、分離，利用真菌毒素的熒光特性，與標(biāo)準(zhǔn)品比較進(jìn)行定性和定量。該方法成本低，對(duì)設(shè)備和檢測(cè)人員要求較低，但是該方法精確度低、操作過(guò)程復(fù)雜、分析結(jié)果的可重復(fù)性和再現(xiàn)性差，并且檢測(cè)過(guò)程中需要使用高濃度的真菌毒素標(biāo)準(zhǔn)品（真菌毒素毒性較強(qiáng)，易對(duì)人體造成傷害，尤其是黃曲霉毒素，能夠致癌），因此，近幾年薄層色譜法的使用越來(lái)越少。

酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）

酶聯(lián)免疫吸附方法是以抗原抗體的特異性結(jié)合酶與底物顯色反應(yīng)為基礎(chǔ)的檢測(cè)方法。酶聯(lián)免疫吸附法具有靈敏度高、干擾小、簡(jiǎn)便、快速、操作安全、特異性強(qiáng)、檢測(cè)成本低等特點(diǎn)。該方法是篩選方法，2～3小時(shí)完成檢測(cè)，需要借助酶標(biāo)儀判讀結(jié)果。

膠體金方法

膠體金技術(shù)又稱(chēng)側(cè)流向免疫層析技術(shù)，是以膠體金作為示蹤標(biāo)記物應(yīng)用于樣品中待測(cè)物檢測(cè)的一種免疫檢測(cè)技術(shù)，可用于樣品中待測(cè)物質(zhì)的快速定性或定量檢測(cè)，是一種穩(wěn)定、靈敏的檢測(cè)方法。該方法操作簡(jiǎn)單，無(wú)需專(zhuān)業(yè)培訓(xùn)，幾分鐘即可完成檢測(cè)，非常適用于現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)。目前，市場(chǎng)上的膠體金檢測(cè)條大部分為定性檢測(cè)條，無(wú)法進(jìn)行定量檢測(cè)。

美國(guó)Charm公司的Charm Rosa真菌毒素定量檢測(cè)系統(tǒng)采用膠體金免疫層析原理，能夠在5分鐘內(nèi)快速定量測(cè)定糧食及其制品中的真菌毒素，包括黃曲霉毒素、嘔吐毒素、玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素A、伏馬菌素和T2/HT2毒素。該系統(tǒng)由檢測(cè)條、孵育器和讀數(shù)儀組成，其中檢測(cè)條采用3線(xiàn)設(shè)計(jì)，包括2條檢測(cè)線(xiàn)（T線(xiàn)）和1條質(zhì)控線(xiàn)（C線(xiàn)），便于準(zhǔn)確定量，增加動(dòng)態(tài)檢測(cè)范圍；另外，檢測(cè)條封閉包裝，可防止檢測(cè)條因暴露在空氣中而被污染。孵育器為保溫裝置，能夠促進(jìn)樣品流動(dòng)并確保反應(yīng)溫度，該孵育器可自動(dòng)倒計(jì)時(shí)，孵育結(jié)束后發(fā)出“嗶嗶”聲。讀數(shù)儀主要用于讀取定量檢測(cè)結(jié)果，檢測(cè)結(jié)果可儲(chǔ)存于儀器內(nèi)，也可傳輸至電腦或打印機(jī)。

系統(tǒng)特點(diǎn)

·5分鐘快速定量檢測(cè)；

·擁有業(yè)內(nèi)最齊全、最完整的霉菌毒素檢測(cè)項(xiàng)目；

·樣品制備過(guò)程簡(jiǎn)單快速；

·無(wú)需使用霉菌毒素標(biāo)準(zhǔn)品，對(duì)檢測(cè)人員無(wú)毒無(wú)害；

·檢測(cè)結(jié)果與國(guó)標(biāo)方法具有較高的一致性；

·廣泛適用于實(shí)驗(yàn)室、糧倉(cāng)、農(nóng)產(chǎn)品收購(gòu)站等各種場(chǎng)合；

·產(chǎn)品通過(guò)USDA-GIPSA（美國(guó)農(nóng)業(yè)部-美國(guó)谷物檢驗(yàn)、批發(fā)及畜牧場(chǎng)管理局）和FGIS（聯(lián)邦谷物檢測(cè)局）認(rèn)證；

·該方法為中國(guó)國(guó)家糧食局糧油檢測(cè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。

高效液相色譜法（HPLC）、液質(zhì)聯(lián)用法（LC-MS）、免疫親和層析凈化熒光光度法等方法為國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的檢測(cè)方法，結(jié)果準(zhǔn)確，靈敏度高，但是對(duì)操作人員的技術(shù)要求較高，操作較為復(fù)雜，均需在實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行，且成本較高，無(wú)法適應(yīng)現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)的需要。新《食品安全法》明確規(guī)定，食品藥品監(jiān)督管理部門(mén)可以采用國(guó)家規(guī)定的快速檢測(cè)方法對(duì)食用農(nóng)產(chǎn)品進(jìn)行抽查檢測(cè)，可見(jiàn)國(guó)家對(duì)快速檢測(cè)方法的認(rèn)可。準(zhǔn)確、簡(jiǎn)單、高效、低成本的現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)方法是真菌毒素檢測(cè)的發(fā)展趨勢(shì)。