張娟 趙鵬偉 楊麗敏 李東霞

·論著·

小檗堿對(duì)人皮膚鱗狀細(xì)胞癌A431細(xì)胞增殖和凋亡的影響

張娟 趙鵬偉 楊麗敏 李東霞

目的 探討小檗堿對(duì)人皮膚鱗狀細(xì)胞癌A431細(xì)胞株增殖及凋亡相關(guān)信號(hào)通路中Bax與Bcl-2表達(dá)的影響。方法 體外培養(yǎng)A431細(xì)胞，分別用含12.5、25、50、100 mg/L小檗堿的培養(yǎng)液（實(shí)驗(yàn)組）、含250 mg/L順鉑的培養(yǎng)液（陽(yáng)性對(duì)照組）、正常培養(yǎng)液（空白對(duì)照組）作用于A431細(xì)胞12、24、48、72 h后，用噻唑藍(lán)（MTT）法測(cè)定小檗堿對(duì)A431細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用；倒置顯微鏡觀察小檗堿作用后細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變；實(shí)時(shí)定量RT-PCR法檢測(cè)小檗堿對(duì)A431細(xì)胞Bax和Bcl-2基因表達(dá)的影響；免疫熒光法分析Bax和Bcl-2的表達(dá)情況。采用SPSS 13.0軟件進(jìn)行多因素方差分析。結(jié)果 MTT結(jié)果顯示，小檗堿對(duì)A431細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用隨作用時(shí)間的延長(zhǎng)而增強(qiáng)（F=510.927，P＜0.001），隨濃度的增加而增強(qiáng)（F=1118.312，P ＜0.001），小檗堿濃度與作用時(shí)間的交互作用有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=70.239，P＜0.001），表明不同濃度小檗堿組各時(shí)間點(diǎn)的變化趨勢(shì)不完全一致。倒置顯微鏡下可見，隨著藥物濃度增加，A431細(xì)胞密度減少，由多角形變?yōu)閳A頓皺縮。實(shí)時(shí)定量RT-PCR結(jié)果表明，小檗堿作用后，隨著時(shí)間或濃度的增加，Bax/Bcl-2 mRNA相對(duì)表達(dá)量增加，同一濃度小檗堿（25、50、100 mg/L）作用 4、8、12 h 組間比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=226.231、1 300.636、4 325.139，P ＜ 0.001）。免疫熒光染色顯示，小檗堿作用后A431細(xì)胞內(nèi)Bax熒光增強(qiáng)，而Bcl-2減弱。結(jié)論 小檗堿對(duì)A431細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用呈時(shí)間和濃度依賴性，Bax和Bcl-2的表達(dá)改變可能是小檗堿誘導(dǎo)A431細(xì)胞凋亡的途徑之一。

小檗堿；癌，鱗狀細(xì)胞；原癌基因蛋白質(zhì)c-bcl-2；bcl-2相關(guān)X蛋白質(zhì)；細(xì)胞凋亡；細(xì)胞增殖；A431細(xì)胞

皮膚鱗狀細(xì)胞癌（鱗癌）的早期診斷和及時(shí)治療甚為重要，而開發(fā)新藥和合理治療是目前亟待解決的難題及研究熱點(diǎn)。小檗堿（berberine）為一種季胺類化合物，屬異喹啉類生物堿，具有多種藥理作用［1］。近年來隨著對(duì)小檗堿藥效作用的深入研究，其抗腫瘤作用成為研究的熱點(diǎn)。本研究通過檢測(cè)小檗堿對(duì)皮膚鱗癌A431細(xì)胞生長(zhǎng)抑制及細(xì)胞凋亡途徑中相關(guān)因子Bax/Bcl-2的表達(dá)情況，探討其作用機(jī)制，以期為皮膚鱗癌的治療提供一條新思路。

材料和方法

一、細(xì)胞株及主要試劑和儀器

人皮膚鱗癌A431細(xì)胞株（中國(guó)科學(xué)院上海細(xì)胞庫(kù)）；小檗堿（B325-5G）、噻唑藍(lán)（MTT）、二甲基亞砜（DMSO）（美國(guó)Sigma公司）；胎牛血清、改良DMEM培養(yǎng)基、胰蛋白酶（美國(guó)Gibco公司）；細(xì)胞RNA提取試劑盒、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、實(shí)時(shí)定量PCR試劑盒（日本Takara公司）；Bax兔抗人多克隆抗體、Bcl-2兔抗人多克隆抗體（美國(guó)Cell Signal公司）；辣根過氧化物酶標(biāo)記的山羊抗兔IgG抗體（美國(guó)KPL公司）；異硫氰酸熒光素（FITC）羊抗兔IgG抗體（北京博奧森）；酶標(biāo)儀（美國(guó)Thermo公司）；PCR擴(kuò)增儀（美國(guó)Applied Biosystems公司）。

二、A431細(xì)胞培養(yǎng)

用含10%胎牛血清、100 U/ml青霉素、100 mg/L鏈霉素的DMEM培養(yǎng)基，在37℃、5%CO2、飽和濕度細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)進(jìn)行單層傳代培養(yǎng)。

三、MTT法檢測(cè)A431細(xì)胞增殖

取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞，0.25%胰酶消化，調(diào)整細(xì)胞數(shù)為1.0×105/ml，以每孔100 μl接種于96孔培養(yǎng)板，培養(yǎng)24 h后去原培養(yǎng)液進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)分為空白對(duì)照組（正常培養(yǎng)液）、陽(yáng)性對(duì)照組（含順鉑250 mg/L的培養(yǎng)液）、實(shí)驗(yàn)組（含12.5、25、50、100mg/L小檗堿的培養(yǎng)液），各100 μl，每個(gè)濃度設(shè)3個(gè)復(fù)孔，于37℃、5%CO2條件下培養(yǎng)。培養(yǎng)結(jié)束前4 h，每孔加入 MTT（5 mg/L）20 μl。培養(yǎng)結(jié)束時(shí)，棄上清，加入DMSO 150 μl，振蕩 10 min，使結(jié)晶物充分溶解，用酶標(biāo)儀分別測(cè)定培養(yǎng)12、24、48、72 h 吸光度（A490值），細(xì)胞存活率=（實(shí)驗(yàn)組平均A值/空白對(duì)照組平均A值）×100%。

四、A431細(xì)胞形態(tài)觀察

將A431細(xì)胞消化后調(diào)整細(xì)胞密度為1.0×105/ml，以每孔1 ml接種于6孔細(xì)胞培養(yǎng)板中培養(yǎng)，待細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)約24 h，細(xì)胞融合至60%~70%時(shí)，棄原培養(yǎng)液，分別加入含小檗堿 0、25、50、100 mg/L 的培養(yǎng)液2 ml，培養(yǎng)24 h，倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)變化。

五、實(shí)時(shí)定量RT-PCR法檢測(cè)Bax和Bcl-2 mRNA的表達(dá)

1.提取A431細(xì)胞總 RNA：收集0、25、50、100mg/L小檗堿分別作用4、8、12 h后的細(xì)胞，用RNiso Plus試劑盒提取細(xì)胞總RNA，紫外分光光度儀測(cè)定總RNA濃度及純度，測(cè)定A260/A280值在1.8~2.0，1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)質(zhì)量。

2.逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA：總反應(yīng)體系20 μl（5×PrimeScript RT Master Mix 4 μl，總 RNA 與無(wú) RNase水共 16 μl），在 37 ℃ 15 min，85 ℃ 15 s，4 ℃終止反應(yīng)條件下進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，產(chǎn)物置-20℃冰箱保存待用。

3.實(shí)時(shí)定量RT-PCR擴(kuò)增Bax、Bcl-2和內(nèi)參GAPDH目的片段：引物序列見表1。PCR反應(yīng)體系為 20 μl：SYBR?Premix Ex TaqTMⅡ （2 ×）10 μl；上、下游引物（0.4 μmol/L）各 0.8 μl；ROX Reference Dye 0.4 μl；合成 cDNA 2 μl；無(wú) RNase 水 6 μl。反應(yīng)條件為：95℃ 10 min（1個(gè)循環(huán)）；變性 95℃ 15 s→退火Tm60s→延伸72℃30s（40個(gè)循環(huán)）；延伸：72℃7 min，4℃終止，測(cè)定A值，計(jì)算目的基因與內(nèi)參基因GAPDH的ΔCt（ΔCt=Ct目的基因-Ct內(nèi)參基因），以空白對(duì)照組為對(duì)照，各試驗(yàn)組的ΔCt減去空白對(duì)照組的ΔCt即為ΔΔCt值，最后轉(zhuǎn)化為相對(duì)差異倍數(shù)，即QR=2-ΔΔCt。

表1 實(shí)時(shí)定量RT-PCR擴(kuò)增Bax、Bcl-2和內(nèi)參GAPDH目的片段所用引物序列（5′-3′）

六、免疫熒光法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)Bax和Bcl-2蛋白表達(dá)

將蓋玻片置于6孔板，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞，0.25%胰酶消化后，用培養(yǎng)液稀釋成單細(xì)胞懸液，以1×104個(gè)/ml接種于6孔板中，每孔2 ml；細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)后去除培養(yǎng)液，分別加入含小檗堿0、50 mg/L的培養(yǎng)液2 ml；培養(yǎng)24 h后，去上清液，加入2 ml磷酸鹽緩沖液（PBS），3 min后吸去PBS，反復(fù)浸洗3次；加入4%多聚甲醛4℃固定15 min，吸去液體，PBS洗3次；0.5%Triton X-100室溫通透20 min，PBS洗3次，吸干殘留液體，在玻片上滴加羊血清封閉30 min，吸掉封閉液，在玻片上滴加足量稀釋好的一抗 Bax（1 ∶2 000）、Bcl-2（1 ∶500），放入暗盒，4 ℃孵育過夜；PBS浸洗3次，滴加1∶500稀釋的熒光標(biāo)記二抗（FITC羊抗兔IgG抗體），暗盒中37℃孵育1 h，PBS浸洗，滴加4,6-聯(lián)脒-2-苯基吲哚二鹽酸（DAPI）復(fù)染核，室溫避光孵育5 min，再用PBS洗3次，吸水紙吸干液體，甘油封片，4℃避光保存，熒光顯微鏡下觀察。

七、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

結(jié) 果

一、MTT法測(cè)定小檗堿對(duì)A431細(xì)胞增殖的影響

多因素方差分析顯示，小檗堿對(duì)A431細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用隨作用時(shí)間的延長(zhǎng)而增強(qiáng)（F=510.927，P＜0.001），隨濃度的增加而增強(qiáng)（F=1118.312，P＜0.001）；小檗堿濃度與作用時(shí)間的交互作用有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=70.239，P ＜ 0.001），表明不同濃度小檗堿組各時(shí)間點(diǎn)的變化趨勢(shì)不完全一致。小檗堿對(duì)A431細(xì)胞的抑制作用具有明顯的時(shí)效依賴性和量效依賴性。見圖1。

二、細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察

倒置顯微鏡下觀察，空白對(duì)照組細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好，為扁平的多角形，均質(zhì)性，折光性強(qiáng)，細(xì)胞間相互銜接，排列緊密，融合成片；藥物作用24 h后，25 mg/L小檗堿組折光性下降，細(xì)胞皺縮變圓，體積縮小，細(xì)胞間隙拉寬，散在懸浮細(xì)胞；隨著小檗堿濃度增加，懸浮細(xì)胞逐漸增多，細(xì)胞呈圓形散在分布。

三、實(shí)時(shí)定量RT-PCR檢測(cè)凋亡蛋白Bax/Bcl-2 mRNA表達(dá)情況

Bax mRNA在低濃度組表達(dá)較弱，在高濃度組表達(dá)較強(qiáng)；而Bcl-2 mRNA在低濃度組表達(dá)明顯，而高濃度組表達(dá)較弱。高濃度組（100 mg/L）Bax/Bcl-2 mRNA相對(duì)表達(dá)水平較低濃度小檗堿組（25、50mg/L）顯著升高；隨著作用時(shí)間延長(zhǎng)，不同濃度藥物作用組Bax/Bcl-2 mRNA相對(duì)表達(dá)水平逐漸增高。相同濃度4、8、12 h組間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表2。

四、免疫熒光法檢測(cè)A431細(xì)胞內(nèi)Bax和Bcl-2蛋白的表達(dá)情況

免疫熒光觀察小檗堿對(duì)A431細(xì)胞中Bax和Bcl-2蛋白表達(dá)的影響及細(xì)胞生長(zhǎng)抑制作用（圖2、3）。Bax蛋白和Bcl-2蛋白均分布于細(xì)胞質(zhì)中，藥物作用組與空白對(duì)照組比較，Bax蛋白表達(dá)增加（圖2），Bcl-2蛋白表達(dá)減少（圖3）（綠染熒光），活細(xì)胞數(shù)目減少（DAPI藍(lán)染細(xì)胞），二者疊加表現(xiàn)更加明顯和直觀。

討 論

近年來，抗癌藥物的研究熱點(diǎn)已逐漸轉(zhuǎn)向天然植物，中醫(yī)中藥治療腫瘤已成為腫瘤治療領(lǐng)域的一大特色［2-4］。小檗堿具有多種藥理作用，最初作為清熱解毒藥和抗菌藥物應(yīng)用于臨床治療胃腸道疾病，小檗堿還有降血糖、降血脂、抗心力衰竭、抗消化性潰瘍等藥理作用［5］。近年來其抗腫瘤作用得到廣泛關(guān)注，研究發(fā)現(xiàn)［6］，小檗堿對(duì)鼻咽癌、肺癌、宮頸癌、前列腺癌等腫瘤細(xì)胞均有抑制作用，其作用機(jī)制主要為通過抑制腫瘤細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡、細(xì)胞周期阻滯等實(shí)現(xiàn)抗腫瘤作用。

圖1 不同濃度小檗堿對(duì)A431細(xì)胞存活率的影響 1：空白對(duì)照組；2～ 5：分別為 12.5、25、50、100 mg/L 小檗堿組；6：陽(yáng)性對(duì)照組。隨時(shí)間延長(zhǎng)和藥物濃度的增加，A431細(xì)胞存活率下降。a：與同一時(shí)間空白對(duì)照組比較，P＜0.05；b：與同一時(shí)間陽(yáng)性對(duì)照組比較，P＜0.05

表2 不同濃度小檗堿作用A431細(xì)胞后Bax/Bcl-2 mRNA相對(duì)表達(dá)水平的變化（±s）

表2 不同濃度小檗堿作用A431細(xì)胞后Bax/Bcl-2 mRNA相對(duì)表達(dá)水平的變化（±s）

分組 小檗堿濃度25 mg/L 50 mg/L 100 mg/L 4 h 0.326 8±0.013 6 0.571 1±0.002 7 2.961 1±0.065 7 8 h 0.349 4±0.000 9 0.784 2±0.001 5 4.057 9±0.032 7 12 h 0.465 8±0.005 7 1.005 1±0.177 9 6.138 7±0.006 3 F值 226.231 1 300.636 4 325.139 P值 ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001

本研究觀察小檗堿對(duì)A431細(xì)胞株增殖、凋亡的影響，并檢測(cè)Bax/Bcl的表達(dá)變化情況，探討小檗堿對(duì)A431細(xì)胞增殖、凋亡變化的影響。MTT結(jié)果表明，與250 mg/L順鉑陽(yáng)性對(duì)照組比較，不同濃度（12.5、25、50、100 mg/L）小檗堿對(duì) A431 細(xì)胞的增殖均有明顯的抑制作用，且隨藥物濃度的增加、作用時(shí)間的延長(zhǎng)，細(xì)胞抑制率明顯增加，呈時(shí)間-劑量依賴性。倒置顯微鏡觀察顯示，隨小檗堿濃度的增加，A431細(xì)胞生長(zhǎng)受到抑制，細(xì)胞形態(tài)皺縮，細(xì)胞間連接松散，漂浮細(xì)胞增多。免疫熒光染色結(jié)果顯示，小檗堿作用后，藍(lán)染的A431活細(xì)胞數(shù)目明顯減少，表明小檗堿具有體外抑制A431細(xì)胞增殖及存活的作用。

圖2 免疫熒光染色觀察50 mg/L小檗堿作用后Bax蛋白在A431細(xì)胞中表達(dá)情況和活細(xì)胞密度（×200） 小檗堿作用組與空白對(duì)照組比較，活細(xì)胞數(shù)目減少，Bax分布于胞質(zhì)，表達(dá)增加

圖3 免疫熒光染色觀察50 mg/L小檗堿作用后Bcl-2蛋白在A431細(xì)胞中表達(dá)情況和活細(xì)胞密度（×200） 小檗堿作用組與空白對(duì)照組比較，活細(xì)胞數(shù)目減少，Bcl-2分布于胞質(zhì)，表達(dá)減弱

細(xì)胞凋亡是受多基因調(diào)控的細(xì)胞自然死亡過程［7-9］。在凋亡調(diào)控基因中，Bcl-2是目前發(fā)現(xiàn)與凋亡關(guān)系密切的原癌基因之一，Bcl-2家族包括Bax、Bcl-2、Bad、Bcl-xl等，Bcl-2 和 Bax 分別是 Bcl-2家族中最有代表性的凋亡抑制因子和凋亡促進(jìn)因子［10］，Bcl-2 可阻斷 Ca2+從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)釋出，使依賴于 Ca2+的核酸內(nèi)切酶活性降低，從而阻斷DNA消化和細(xì)胞凋亡［11-12］，Bcl-2蛋白還可以和Bax蛋白相結(jié)合，從而抑制細(xì)胞凋亡［13］。Bcl-2與Bax的比值決定了細(xì)胞接受凋亡信號(hào)后細(xì)胞的存活與否，如果Bax占優(yōu)勢(shì)，細(xì)胞死亡，反之則細(xì)胞存活。Bax/Bcl-2比值對(duì)決定細(xì)胞是否進(jìn)入凋亡狀態(tài)具有重要意義。實(shí)時(shí)定量RT-PCR和免疫熒光染色結(jié)果均顯示，小檗堿作用A431細(xì)胞后，凋亡促進(jìn)蛋白Bax表達(dá)上調(diào)，而凋亡抑制蛋白Bcl-2表達(dá)下降，Bax/Bcl-2比值隨小檗堿濃度的增加上調(diào)，提示小檗堿誘導(dǎo)A431細(xì)胞凋亡可能通過上調(diào)Bax/Bcl-2比值而實(shí)現(xiàn)。

綜上所述，小檗堿對(duì)皮膚鱗癌A431細(xì)胞生長(zhǎng)具有明顯抑制作用，且呈時(shí)間-劑量依賴性，其機(jī)制可能與上調(diào)Bax蛋白、下調(diào)Bcl-2蛋白的表達(dá)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡有關(guān)。

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·學(xué)術(shù)動(dòng)態(tài)·

奧馬珠單抗在H1抗組胺藥物治療下癥狀仍反復(fù)的慢性自發(fā)性/特發(fā)性蕁麻疹治療中的有效性和安全性：一項(xiàng)隨機(jī)、對(duì)照研究

Sarbjit等的一項(xiàng)名為ASTERIA I的隨機(jī)、雙盲、對(duì)照試驗(yàn)，評(píng)價(jià)了奧馬珠單抗在難治性慢性自發(fā)性蕁麻疹治療中的有效性和安全性。入組319例患者，隨機(jī)均分成奧馬珠單抗75 mg、150 mg、300 mg治療組和安慰劑組，每4周給予皮下注射藥物1次，共治療24周，隨訪16周。主要評(píng)價(jià)指標(biāo)為瘙癢嚴(yán)重程度積分（ISS7）及蕁麻疹活動(dòng)度積分（UAS7）。結(jié)果表明，奧馬珠單抗在控制癥狀和疾病活動(dòng)情況中有明顯療效，其中300 mg組最為明顯。據(jù)此，F(xiàn)DA和EMA批準(zhǔn)了奧馬珠單抗用于治療慢性自發(fā)性蕁麻疹。［JID,2015,135（1）:67-75］

（第三軍醫(yī)大學(xué)西南醫(yī)院皮膚科 陳奇權(quán)摘譯）

銀屑病不是一種自身免疫性疾??？

本文對(duì)銀屑病是一種自身免疫性疾病的觀點(diǎn)提出了質(zhì)疑。自身免疫性疾病的發(fā)生是基于鏈球菌和角蛋白之間存在一些分子結(jié)構(gòu)類似的同源肽，對(duì)這些同源肽能做出反應(yīng)的是外周血中CD8+T細(xì)胞，而不是CD4+T細(xì)胞，但銀屑病發(fā)生的主要始動(dòng)因素是CD4+T細(xì)胞。近年來一些研究發(fā)現(xiàn)，在正常皮膚及銀屑病皮損的細(xì)菌微生物群中厚壁菌門及鏈球菌屬是最常見的。銀屑病的發(fā)病與固有免疫的激活有關(guān)，近年來有關(guān)銀屑病基因?qū)W的研究也證實(shí)了其易感基因與固有免疫系統(tǒng)相關(guān)。目前發(fā)現(xiàn)，克羅恩病、牙周炎和銀屑病之間有一定聯(lián)系，銀屑病患者和克羅恩病患者間存在一些相同的和固有免疫有關(guān)的基因突變。機(jī)體對(duì)腸道內(nèi)細(xì)菌的免疫不耐受導(dǎo)致了克羅恩病。這些發(fā)現(xiàn)都提示，銀屑病有可能是在特定遺傳背景下機(jī)體對(duì)皮膚中菌群的異常反應(yīng)而促發(fā)的。［Exp Dermatol,2014,27.doi:10.1111/exd.12572.］

（成都市第二人民醫(yī)院皮膚科 張力文陳濤摘譯）

Effect of berberine on the proliferation and apoptosis of a human skin squamous cell carcinoma cell line A431

Zhang Juan,Zhao Pengwei,Yang Limin,Li Dongxia*.*Department of Dermatovenereology,Affiliated Hospital of Inner Mongolia Medical College,Hohhot 010050,China

Li Dongxia,Email:ldx828@sina.com

ObjectiveTo estimate the effect of berberine on the proliferation of and expressions of apoptosisrelated factors Bax and Bcl-2 in a human skin squamous cell carcinoma cell line A431.Methods A431 cells were culturedin vitro,and classified into various groups to be treated with berberine at different concentrations（12.5,25,5,100 mg/L）or cisplatin at 250 mg/L （positive control group）for different durations（12,24,48 and 72 hours）.The A431 cells remaining untreated served as the negative control group.Subsequently,methyl thiazolyl tetrazolium （MTT）assay was performed to evaluate cell growth,and inverted microscopy to observe cell morphology.Real time quantitative reverse transcription-PCR and an immunofluorescence assay were conducted to measure the mRNA and protein expressions of Bax and Bcl-2 respectively.Statistical analysis was done by multi-way analysis of variance（ANOVA）using the software SPSS 13.0.ResultsMTT assay showed that berberine inhibited the growth of A431 cells,and the inhibitory effect increased with the increase in concentration（F=1118.312,P＜0.001）and treatment duration（F=510.927,P＜0.001）of berberine.Moreover,there was a significant interaction between the concentration and treatment duration of berberine（F=70.239,P＜0.001）.Inverted microscopy revealed that when the concentration of berberine increased,cell density was reduced,and cell morphology changed from polygonal to round with cell body shrinkage.The ratio of bax to Bcl-2 mRNA was elevated with the increase in treatment duration and concentration of berberine,and there were significant differences in the mRNA ratio among cells treated with berberine for different time durations at same concentrations（F=226.231,1300.636,4325.139 for berberine at 25,50 and 100 mg/L respectively,allP ＜ 0.001）.Immunofluorescence staining indicated that the fluorescence intensity of Bax was enhanced,while that of Bcl-2 was weakened after berberine treatment.ConclusionsBerberine inhibits the growth of A431 cells in a dose-and timedependent manner,and may induce the apoptosis of A431 cells via regulating the expressions of Bax and Bcl-2.

Berberine;Carcinoma,squamous cell;Proto-oncogene proteins c-bcl-2;bcl-2-Associated X protein;Apoptosis;Cell proliferation;A431 cell

10.3760/cma.j.issn.0412-4030.2015.04.013

內(nèi)蒙古自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目（2011MS1117）；內(nèi)蒙古自治區(qū)衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)醫(yī)療衛(wèi)生科研計(jì)劃項(xiàng)目（201302063）；2014年內(nèi)蒙古自治區(qū)科技計(jì)劃項(xiàng)目（kjt14sf16）

010050呼和浩特，內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院皮膚性病科［張娟（現(xiàn)在玉溪市人民醫(yī)院，653199云南玉溪）、李東霞］；內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院微生物免疫教研室（趙鵬偉、楊麗敏）

李東霞，Email：ldx828@sina.com

2014-04-30）

（本文編輯：周良佳 顏艷）