王 梅 李征宇

子宮內(nèi)膜癌是婦科常見(jiàn)的疾病，為婦科惡性腫瘤首位［1］。本文對(duì)我院收治的子宮內(nèi)膜癌患者回顧性分析淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞透明質(zhì)酸受體(LYVE-1)、缺氧誘導(dǎo)因子1α(HIF-1α)及血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子C(VEGF-C)的表達(dá)情況，探討腫瘤周邊淋巴管密度(LVD)對(duì)子宮內(nèi)膜癌患者臨床病理特征及其生存狀況的影響。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取2013年1月－2014年1月我院收治的子宮內(nèi)膜癌患者115例，年齡35～73歲，平均(45.8±16.5)歲。其中高分化41例，中分化54例，低分化20例;按1988年FIGO臨床標(biāo)準(zhǔn)分期，其中Ⅰ期45例，Ⅱ期38例，Ⅲ期32例;淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者29例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者86例;無(wú)肌層浸潤(rùn)12例，淺肌層浸潤(rùn)≤1/2肌層53例，深肌層浸潤(rùn)＞1/2肌層62例;子宮內(nèi)膜樣腺癌102例，透明細(xì)胞8例，腺鱗癌5例。按WHO的腫瘤細(xì)胞分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)分級(jí)，其中G1級(jí)51例，G2級(jí)35例，G3級(jí)29例。ER和(或)PR(+)者68例，ER、PR均為(－)者57例。選擇同期正常子宮內(nèi)膜標(biāo)本20例作為對(duì)照。

1.2 試劑及檢測(cè)方法

免疫組化SP法試劑盒及DAB顯色液均為生工生物工程(上海)有限公司產(chǎn)品。采用免疫組化SP法檢測(cè)LYVE-1、HIF-1α、VEGF-C的表達(dá)水平。實(shí)驗(yàn)步驟:①切片常規(guī)二甲苯脫蠟，脫水;②過(guò)氧化氫甲醇阻斷過(guò)氧化物酶，枸櫞酸鹽緩沖液(0.01M，pH 6.0)抗原熱修復(fù)，冷卻至室溫;③一抗:加入10%羊非免疫血清，孵育20 min后倒出血清，將稀釋好的鼠抗人LYVE-1、HIF-1α和VEGF-C單克隆抗體加入其中，4℃過(guò)夜孵育，PBS洗滌3次;④二抗:加入辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素，37℃孵育30 min;⑤染色:先后用DAB和蘇木精各染色5 min。用已知陽(yáng)性切片組織作陽(yáng)性對(duì)照，PBS代替一抗做陰性對(duì)照。

1.3 評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)

HIF-1α顯色于胞核，而VEGF-C顯色于細(xì)胞質(zhì)，高倍鏡下隨機(jī)選取每個(gè)切片5個(gè)視野，每個(gè)視野計(jì)算100個(gè)細(xì)胞中的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)，計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞率，并取5組數(shù)的平均值。陽(yáng)性細(xì)胞率≥50%為陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)，陽(yáng)性細(xì)胞率＜50%為陰性標(biāo)準(zhǔn)。LYVE-1標(biāo)記淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞，參照孟曉瑜等［1］方法計(jì)算LVD，低倍鏡下分別對(duì)子宮內(nèi)膜癌組織腫瘤邊緣(P-LVD)和中心區(qū)陽(yáng)性淋巴管密集區(qū)域(I-LVD)即“hotspot”區(qū)進(jìn)行觀察，高倍鏡下隨機(jī)選取每個(gè)切片5個(gè)視野，每個(gè)視野計(jì)算LVD，并取5組數(shù)的平均值。

1.4 隨訪

采用電話隨訪的方式對(duì)所有患者隨訪4～80個(gè)月，隨訪截止時(shí)間為2014年4月。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

所有資料應(yīng)用SPSS 16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，多組比較采用χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料采用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 LVD與子宮內(nèi)膜癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系

HIF-1α和VEGF-C的陽(yáng)性表達(dá)率分別為76.19%和52.38%;腫瘤邊緣區(qū)和腫瘤中心區(qū)LYVE-1+微淋巴管陽(yáng)性表達(dá)率分別為88.69%和62.61%。P-LVD和 I-LVD 平均為(20.38 ±5.18)個(gè)/高倍視野和(4.29±0.97)個(gè)/高倍視野。子宮內(nèi)膜癌患者P-LVD和ILVD與其臨床病理參數(shù)的關(guān)系見(jiàn)表1。結(jié)果顯示，PLVD與腫瘤分化程度、FIGO分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是否有關(guān)(P＜0.05)，與腫瘤病理類型、組織學(xué)分級(jí)、基層侵襲和激素受體表達(dá)無(wú)關(guān)，I-LVD與所有參數(shù)無(wú)關(guān)(P＞0.05)。

表1 子宮內(nèi)膜癌患者P-LVD和I-LVD與其臨床病理參數(shù)的關(guān)系(s)

表1 子宮內(nèi)膜癌患者P-LVD和I-LVD與其臨床病理參數(shù)的關(guān)系(s)

項(xiàng)目 例數(shù) P-LVD P值 I-LVD P值0.035 0.356高41 22.57 ±2.68 5.35 ±2.45中54 20.19 ±5.27 5.25 ±1.67低20 17.34 ±6.13 4.98 ±3.28病理類型 0.372 0.426腺癌 102 20.46 ±5.21 5.01 ±2.14鱗癌 8 19.37 ±5.19 4.92 ±3.21透明細(xì)胞癌 5 20.61 ±4.18 5.03 ±0.28 FIGO 分期 0.041 0.532Ⅰ期 45 21.45 ±6.32 5.16 ±1.56Ⅱ期 38 18.36 ±6.18 5.05 ±1.75Ⅲ期 32 20.56 ±3.71 5.21 ±3.28組織學(xué)分級(jí) 0.496 0.427 G1 級(jí) 51 20.06 ±2.78 4.99 ±2.64 G2 級(jí) 35 21.56 ±4.92 5.28 ±0.35 G3 級(jí) 29 20.18 ±3.22 4.89 ±2.55肌層侵襲 0.391 0.537≥1/2 53 20.01 ±3.29 5.17 ±2.17＜1/2 62 19.89 ±6.27 5.11 ±3.27淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 0.028 0.245有29 22.15 ±5.22 4.96 ±3.23無(wú)86 18.34 ±4.68 5.22 ±2.18激素受體 0.693 0.426 ER/PR(+)68 19.35 ±4.25 4.79 ±3.56 ER/PR(－)分化程度57 20.45 ±2.66 5.22 ±2.65

2.2 單因素分析

所有患者1年、3年、5年生存率分別為95.65%、86.96%、78.26%，25 例患者死亡，占 21.74%。將腫瘤邊緣區(qū)和腫瘤中心區(qū)LYVE-1+微淋巴管陽(yáng)性表達(dá)患者分為高、低組，即高P-LVD組和低P-LVD組，高ILVD組和低I-LVD組。分析顯示，P-LVD、病理類型、FIGO分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著影響子宮內(nèi)膜癌患者的5年生存率(P＜0.05);高P-LVD組5年生存率顯著高于低P-LVD組(P＜0.05);I-LVD、分化程度、組織學(xué)分級(jí)、基層侵襲和激素受體表達(dá)對(duì)子宮內(nèi)膜癌患者的5年生存率無(wú)影響(P＞0.05)。

表2 子宮內(nèi)膜癌患者5年生存率與其臨床病理參數(shù)的關(guān)系(例，%)

2.3 多因素分析

預(yù)后多因素分析結(jié)果見(jiàn)表3。結(jié)果顯示P-LVD、病理類型、FIGO分期為其預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P＜0.05)，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移為非獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P＜0.05)。

表3 子宮內(nèi)膜癌預(yù)后多因素Cox分析結(jié)果

3 討論

子宮內(nèi)膜癌是女性常見(jiàn)的惡性腫瘤，一旦發(fā)生轉(zhuǎn)移，預(yù)后較差。影響子宮內(nèi)膜癌患者預(yù)后的因素一般分為臨床病理因素和一般生物學(xué)因素［2-3］。各有關(guān)子宮內(nèi)膜癌預(yù)后影響因素的報(bào)道也不一致，因此，深入探討子宮內(nèi)膜癌患者的臨床特征和預(yù)后的關(guān)系至關(guān)重要。研究顯示，腫瘤能誘發(fā)新生血管和淋巴管形成，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移，因此淋巴管是判斷包括子宮內(nèi)膜癌在內(nèi)的多種腫瘤預(yù)后的指標(biāo)［4］。

淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移在腫瘤轉(zhuǎn)移過(guò)程中有重要作用，腫瘤淋巴管浸潤(rùn)的發(fā)生是淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的前提［1］。LYVE-1被廣泛應(yīng)用于檢測(cè)子宮內(nèi)膜癌組織中微淋巴管的生成，本文研究顯示，腫瘤邊緣區(qū)和腫瘤中心區(qū)有LYVE-1+微淋巴管陽(yáng)性表達(dá)率分別為88.69%和62.61%。P-LVD 和 I-LVD 分別平均為(20.38±5.18)個(gè)/高倍視野和(4.29±0.97)個(gè)/高倍視野，P-LVD 顯著高于I-LVD(P＜0.05)。推斷可能機(jī)制是由于腫瘤中心高的組織間隙壓力限制了腫瘤細(xì)胞侵襲生長(zhǎng)，同時(shí)對(duì)新生的淋巴管有一定的破壞作用所致，腫瘤周邊組織相對(duì)疏松的環(huán)境為淋巴管的增生提供了良好的環(huán)境，成為腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移的重要途徑。P-LVD與分化程度、FIGO分期和是否淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P＜0.05)，與病理類型、組織學(xué)分級(jí)、基層侵襲和激素受體表達(dá)無(wú)關(guān)，ILVD與所有參數(shù)無(wú)關(guān)(P＞0.05)。

早期惡性腫瘤的生長(zhǎng)需要大量營(yíng)養(yǎng)和氧氣，代謝產(chǎn)物不能及時(shí)排除體外造成了腫瘤組織形成缺氧、微酸的環(huán)境［5-6］。HIF-1α由于在缺氧和微酸環(huán)境中的降解受限，因此在多種腫瘤中高表達(dá)，同時(shí)，其具有促進(jìn)基質(zhì)金屬蛋白酶表達(dá)的作用，從而進(jìn)一步推進(jìn)惡性腫瘤的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移［5］。VEGF-C可通過(guò)與淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞受體VEGFR-3結(jié)合促進(jìn)淋巴管增生。本研究顯示，HIF-1α和VEGF-C的陽(yáng)性表達(dá)率分別為76.19%和52.38%，高于正常婦女的的陽(yáng)性表達(dá)率。推斷HIF-1α和VEGF-C在子宮內(nèi)膜癌患者中活性較高，可以促進(jìn)淋巴管形成。

此外，本研究通過(guò)單因素分析顯示P-LVD、病理類型、FIGO分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著影響子宮內(nèi)膜癌患者的5年生存率(P＜0.05);高P-LVD組患者5年生存率顯著低于低 P-LVD組(P＜0.05);I-LVD、分化程度、組織學(xué)分級(jí)、基層侵襲和激素受體表達(dá)對(duì)子宮內(nèi)膜癌患者的5年生存率無(wú)影響(P＞0.05)，與多個(gè)文獻(xiàn)報(bào)道一致［7-9］。提示P-LVD可發(fā)展成為判斷有無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及預(yù)后的重要指標(biāo)。多因素分析結(jié)果顯示，PLVD、病理類型、FIGO分期為子宮內(nèi)膜癌患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P＜0.05)，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移為非獨(dú)立因素(P＜0.05)。因此P-LVD可協(xié)助判斷子宮內(nèi)膜癌的惡性程度及生物學(xué)行，對(duì)臨床治療子宮內(nèi)膜癌患者提供借鑒意義。

推斷HIF-1α和VEGF-C在子宮內(nèi)膜癌患者中活性較高，可以促進(jìn)淋巴管形成;P-LVD與分化程度、FIGO分期和是否淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，尚不能確定其是否可成為子宮內(nèi)膜癌預(yù)后指標(biāo);影響子宮內(nèi)膜癌患者的獨(dú)立危險(xiǎn)因素有P-LVD、病理類型和FIGO分期，它們互相作用，共同影響子宮內(nèi)膜癌的預(yù)后。

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